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尼罗罗非鱼Ddx41介导的信号通路相关基因的克隆及功能分析

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尼罗罗非鱼Ddx41介导的信号通路相关基因的克隆及功能分析

作者：郑建美上海海洋大学

学位级别：硕士

罗非鱼是我国水产养殖的优势品种,具有重要的经济价值,但近年来高死亡率链球菌病频发,严重威胁到罗非鱼养殖产业的健康发展,且尚未发现有效的防治措施,因此深入探索罗非鱼抗病的分子机理十分必要。先天免疫是鱼类免疫防御的第一道防线,... 详细信息

罗非鱼是我国水产养殖的优势品种,具有重要的经济价值,但近年来高死亡率链球菌病频发,严重威胁到罗非鱼养殖产业的健康发展,且尚未发现有效的防治措施,因此深入探索罗非鱼抗病的分子机理十分必要。先天免疫是鱼类免疫防御的第一道防线,模式识别受体（pattern recognition receptors,PRRs）是先天免疫受体的代表,可以与病原体相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）相互作用,是启动先天免疫应答的关键因子。Ddx41(D-E-A-D（aspartate-glutamate-alanine-aspartate-box）polypeptide 41)是由ddx41基因编码的RNA解旋酶,能够作为PRR识别宿主细胞内细菌和病毒所产生的PAMPs,激活干扰素基因刺激分子（stimulator of interferon genes,sting）依赖的天然免疫应答过程。完善的先天免疫系统的形成需要多种调控机制,近期三重基序（tripartite motif,TRIM）蛋白家族被发现能够作用于细胞内先天免疫信号通路相关因子并影响先天免疫反应。本研究拟从尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）可感知胞质DNA的ddx41基因入手,同时对Ddx41的推测胞内接头蛋白Sting及推测调控因子Trim16和Trim25的编码基因进行基因结构分析及表达特征检测,初步了解上述基因的生物学功能。在此基础上构建真核表达载体,研究哺乳动物293T细胞中过表达上述基因对NF-κB（Nuclear factor-κB）活性的影响。以期为揭示罗非鱼的免疫抗感染机制、探索病害防治新途径,保证罗非鱼养殖业的持续健康发展提供基础资料。1尼罗罗非鱼ddx41和sting基因的克隆及表达分析为了研究ddx41和sting基因在尼罗罗非鱼免疫过程中的作用,本研究通过逆转录PCR（RT-PCR）和末端快速扩增（RACE）获得尼罗罗非鱼ddx41和sting基因的c DNA及基因组序列,进行了基因结构和蛋白二级结构分析,并以q RT-PCR方法检测基因的组织分布、胚胎发育过程表达及其对无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）感染的响应。结果表明,尼罗罗非鱼ddx41基因的c DNA序列全长2 230bp,ORF 1 842 bp,编码614个氨基酸,基因组序列全长为8 138 bp,包含17个外显子和16个内含子。蛋白二级结构分析显示,Ddx41存在Colied coil结构域,DEXDc结构域,HELICc结构域以及Zn F-C2HC结构域。氨基酸序列同源性分析表明,尼罗罗非鱼Ddx41与斑马拟丽鱼（Maylandia zebra）、伯氏朴丽鱼（Haplochromis burtoni）、三湖慈鲷（Pundamilia nyererei）以及布氏新亮丽鲷（Neolamprologus brichardi）同源性大于99.0%,与其他鱼类以及哺乳动物同源性在85.6%7.6%之间。组织表达分析表明,在所检测的11个组织/器官中ddx41基因均有表达,其中血液中表达量最高,肝脏中表达量最低,血液中的表达量为肝脏（对照组）表达量的27.51倍。ddx41基因在尼罗罗非鱼胚胎发育过程中均有稳定表达且表达水平有逐渐升高的趋势。人工感染无乳链球菌后ddx41基因在肠、脾脏、鳃、肾脏中表达量存在升高的阶段,分别为0 h（对照组）的4.05、5.74、4.12、2.27倍,在血液中该基因的表达量呈现降低趋势。sting基因的c DNA全长2 724bp,ORF 1 209 bp,编码403个氨基酸,基因组序列全长10 746 bp,包含6个外显子和5个内含子。氨基酸序列同源性分析表明,尼罗罗非鱼Sting与斑马拟丽鱼同源性最高为95.2%,与其他鱼类以及哺乳动物同源性介于28.5%4.9%之间。组织表达分析表明,在所检测的11个组织/器官中,sting基因均有表达,其中肠中表达量最高,心脏中表达量最低。sting基因在尼罗罗非鱼胚胎发育过程中均有表达且表达量呈现升高的趋势。人工感染无乳链球菌后,sting基因在所检测的5个组织/器官中的表达量均存在升高的阶段,sting基因在肠、脾、鳃、肾脏和血液中的最高表达量分别为对照组的4.99、15.19、15.74、5.81和6.33倍。上述结果表明:ddx41基因和sting基因在尼罗罗非鱼抗无乳链球菌感染过程中发挥了重要作用。2尼罗罗非鱼trim16和trim25基因的克隆及表达分析为了研究trim16和trim25基因在尼罗罗非鱼免疫过程中的作用,本研究以RT-PCR和RACE方法获得尼罗罗非鱼trim16和trim25基因的c DN

关键词：尼罗罗非鱼无乳链球菌 ddx41基因 sting基因 trim16基因 trim25基因 NF-κB

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长角血蜱胚胎发育的研究

长角血蜱胚胎发育的研究

作者：郑建美河北师范大学

学位级别：硕士

蜱类为专性吸血的外寄生动物,不仅传播多种病原体而且还有很强的繁殖力。每只雌蜱一生能产卵几百至几千粒,蜱类的繁殖力决定了其种群数量及危害程度。所以了解蜱卵胚胎发育的规律对预测其幼虫出现的时期,掌握防治时机有重要的实践意义... 详细信息

蜱类为专性吸血的外寄生动物,不仅传播多种病原体而且还有很强的繁殖力。每只雌蜱一生能产卵几百至几千粒,蜱类的繁殖力决定了其种群数量及危害程度。所以了解蜱卵胚胎发育的规律对预测其幼虫出现的时期,掌握防治时机有重要的实践意义。本文以广泛分布于我国的长角血蜱Haemaphysalis longicornis Neumann为研究对象,运用组织学、激光共聚焦技术、SDS-PAGE、生物化学、免疫印迹、气相色谱/质谱(GC/MS)等现代生物学的研究方法,首次对其胚胎发育过程中的形态和物质变化进行了较系统的研究,揭示了蜱类胚胎发育的规律。主要结果如下:1、建立了适合长角血蜱卵的石蜡切片技术体系:以10%次氯酸钠溶液软化卵壳3～5 min,用Smith液固定24h,用系列乙醇脱水,二甲苯透明,得出了最佳脱水和透明条件。2、获得了较为系统的胚胎发育不同时期的实体照片,这些时期包括胚盘形成、胚带形成、器官形成等发育时期。3、SDS-PAGE结果显示:胚胎发育中,156KD、150KD、120KD、107KD、68KD、17KD、18KD、20KD、21KD和22KD蛋白的动态变化均出现在长角血蜱形态发生的不同时期。4、卵黄蛋白(Vn)的Western-blot分析结果显示:Vn的八个亚基在胚胎发育中有不同程度的消耗,幼虫非寄生期的营养来源来自Vn。5、经夹心ELISA检测, Vn在胚胎发育中逐渐被利用,尤其在胚胎发育早期(由3.016μg/egg降到1.601μg/egg)和器官形成期由(1.907μg/egg降到1.394μg/egg)利用率最高。6、测定了长角血蜱胚胎发育过程中的蛋白、糖、脂、水分的变化;初步探讨了胚胎发育中的主要能源物质为蛋白和脂类;糖参与了几丁质的合成;在胚胎晚期,大量的水分用于增加内压使幼虫突破卵壳。7、应用GC/MS技术测定出长角血蜱胚胎发育中的主要化学物质。结果显示:长角血蜱胚胎发育中共有19中化学物质,分别为十七烷酸、二十五烷、棕榈酸等。在胚胎发育的不同时期出现了特定的化学物质,保证了胚胎发育的顺利完成。

关键词：长角血蜱组织学胚胎发育生化分析

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氧气湿化瓶清洗方法的改进与效果观察

中华医院感染学杂志 2012年第19期22卷 4291-4292页

作者：周红娟谢亚芬郑建美杭州烧伤专科医院供应室浙江杭州310021

目的探讨氧气湿化瓶清洗方法改进的效果。方法 60个回收氧气湿化瓶随机等分两组,试验组:湿化瓶用改进清洗方法即洗衣粉和多酶混合液浸泡10min,清洗后消毒;对照组:用传统方法即清水清洗后消毒,分别于7d进行肉眼观察和细菌学检测。结果试... 详细信息

目的探讨氧气湿化瓶清洗方法改进的效果。方法 60个回收氧气湿化瓶随机等分两组,试验组:湿化瓶用改进清洗方法即洗衣粉和多酶混合液浸泡10min,清洗后消毒;对照组:用传统方法即清水清洗后消毒,分别于7d进行肉眼观察和细菌学检测。结果试验组与对照组清洗后的氧气湿化瓶残留物检出率分别为6.7%、60.0%,试验组的透明度、外观清洁度为96.7%、100.0%,对照组为56.7%、50.0%,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);试验组湿化瓶储存7d细菌总数<15CFU/cm2,细菌监测合格率为100.0%,对照组为93.3%,两组比较,差异无统计学意义。结论洗衣粉及多酶混合液浸泡有助于清洗效果的提高。

关键词：氧气湿化瓶消毒清洗细菌监测

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眼后部脉络膜平滑肌瘤一例

中华眼视光学与视觉科学杂志 2020年第3期22卷 231-232页

作者：李志郑建美林新霖童绎福建中医药大学附属第二人民医院健康管理中心超声科 350003 福建医科大学附属第一医院干部超声科 350005 福建医科大学附属第一医院神经眼科 350005

患者,女,57岁,因右眼视物不清,逐渐减退3年而于2010年7月就诊于福建医科大学附属第一医院眼科。眼底检查:右眼底颞下方见高低不均局限性隆起,表面呈黄白色,左眼球无异常,全身情况无异常。超声检查:右眼玻璃体内可见低回声肿物,大小约0.8... 详细信息

患者,女,57岁,因右眼视物不清,逐渐减退3年而于2010年7月就诊于福建医科大学附属第一医院眼科。眼底检查:右眼底颞下方见高低不均局限性隆起,表面呈黄白色,左眼球无异常,全身情况无异常。超声检查:右眼玻璃体内可见低回声肿物,大小约0.8 cm×0.6 cm,形状呈圆形,自球壁向玻璃体内突起,边界光滑锐利,内部回声均,内见稍丰富血流信号,其前部可见膜样强回声带(见图1);左眼形态结构正常。提示右眼玻璃体内实性占位性病变,考虑脉络膜黑色素瘤,继发性视网膜脱离。眼眶MRI:右侧眼球后壁颞侧结节状异常信号影,增强后强化明显,宽基底,大小约1.0 cm×0.6 cm,局部眼环增厚且见强化现象,考虑肿瘤占位(见图2)。

关键词：脉络膜黑色素瘤右眼玻璃体平滑肌瘤逐渐减退眼底检查左眼球内部回声血流信号

系统康复训练对胫骨平台骨折患者术后功能恢复的影响

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中华物理医学与康复杂志 2017年第6期39卷 460-461页

作者：徐红梅薛露章大伟郑建美杭州市江干区人民医院手术室杭州310021 杭州市江干区人民医院骨科杭州310021 吉林大学第一医院小儿血液科

胫骨平台骨折是比较常见的一种关节内骨折，在四肢骨折中发生率较高，治疗不当容易引起不同程度膝关节功能障碍，对患者日常生活活动能力造成很大影响，部分患者甚至丧失劳动功能。内固定手术是胫骨平台骨折较常用的治疗方法，术后早期... 详细信息

胫骨平台骨折是比较常见的一种关节内骨折，在四肢骨折中发生率较高，治疗不当容易引起不同程度膝关节功能障碍，对患者日常生活活动能力造成很大影响，部分患者甚至丧失劳动功能。内固定手术是胫骨平台骨折较常用的治疗方法，术后早期康复干预对于患者膝关节功能恢复具有非常重要的意义，如早期康复治疗可抑制膝关节粘连，扩大膝关节活动范围，减少肢体肿胀，改善关节软骨营养供给，避免关节僵硬和肌肉萎缩等并发症。

关键词：医学康复医学系统康复训练胫骨平台骨折患者

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氯酸钠晶体防结块技术研究及应用

无机化工信息 2002年第3期 22-26,27页

作者：郑建美福州一化化学品有限公司，福州350011

本文根据无机盐防结块机理提出采用一种表面活性剂作为工业氯酸钠的防结块剂，设计了筛选表面活性剂试验，提出了表面活性剂在氯酸钠防结块工艺中的添加方法、添加量及分析方法。形成完整、简便、可控、易行的生产工艺。生产出的氯酸... 详细信息

本文根据无机盐防结块机理提出采用一种表面活性剂作为工业氯酸钠的防结块剂，设计了筛选表面活性剂试验，提出了表面活性剂在氯酸钠防结块工艺中的添加方法、添加量及分析方法。形成完整、简便、可控、易行的生产工艺。生产出的氯酸钠产品防结块效果极佳，放置六个月不结块，呈流沙状，产品化学指标符合国际GB／T1618－1995优等品指标。

关键词：氯酸钠晶体防结块技术研究应用表面活性剂防结块剂

Synthesis and Crystal Structure of a New Cadmium(Ⅱ) Coordination Polymer with Ethylenediaminetetraacetic Acid

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Chinese Journal of Structural Chemistry 2012年第3期31卷 309-314页

作者：郑建美吴美凤郑发鲲刘华 Fuqing Branch of Fujian Normal University State Key Laboratory of Structural Chemistry Fujian Institute of Research on the Structure of MatterChinese Academy of Sciences

A new cadmium（Ⅱ） coordination polymer,namely,[KCd2（edta）I]n（1,H4edta = ethylenediaminetetraacetic acid）,has been prepared and structurally characterized by single-crystal X-ray *** data for 1：C10H12Cd2IKN2O8,Mr = 679.02,monoclinic,space group P21/n,a = 9.870（5）,b = 8.989（4）,c = 19.082（10） ,β = 104.581（10）o,V = 1638.5（13） 3,Z = 4,Dc = 2.753 g/cm3,μ = 4.776 mm-1,F（000） = 1272,the final R = 0.0473 and wR = 0.1311 for 2846 observed reflections with I 〉 2σ（I）.Polymer 1 features a 2-D layered structure,in which each edta4-ligand chelates/bridges five adjacent six-/seven-coordinated Cd（Ⅱ） centers with all ten donors（eight oxygen and two nitrogen） involved with *** iodide I-ions as counterions are bound to the Cd（Ⅱ） centers in a terminal mode and the potassium K＋ ions are located in the layers and surrounded by O and I atoms from neighboring *** thermal stability of 1 has been discussed.

关键词： cadmium(Ⅱ) complex ethylenediaminetetraacetic acid coordination polymer crystal structure

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氯酸钠晶体防结块技术研究及应用

化学工程与装备 2001年第3期 26-29+44页

作者：郑建美福州一化化学品有限公司福州 350011

本文根据无机盐防结块机理提出采用一种表面活性剂作为工业氯酸钠的防结块剂,设计了筛选表面活性剂试验,提出了表面活性剂在氯酸钠防结块工艺中的添加方法、添加量及分析方法。形成完整、简便、可控、易行的生产工艺。生产出的氯酸钠产... 详细信息

本文根据无机盐防结块机理提出采用一种表面活性剂作为工业氯酸钠的防结块剂,设计了筛选表面活性剂试验,提出了表面活性剂在氯酸钠防结块工艺中的添加方法、添加量及分析方法。形成完整、简便、可控、易行的生产工艺。生产出的氯酸钠产品防结块效果极佳,放置六个月不结块,呈流沙状,产品化学指标符合国标GB/T1618-1995优等品指标。

关键词：工业氯酸钠表面活性剂防结块技术生产工艺

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高中有效音乐课堂教学的策略探议

江苏教育研究（实践）（B版） 2012年第10期 55-56页

作者：郑建美金坛市第一中学 213000

笔者近来听了本市一些高中音乐课,发现尽管课改已推进多年,但人们对于有效的音乐课堂教学在认识上依然存在着很多误区,导致音乐课堂教学中普遍存在一些共性的问题：满堂问、满堂动、满堂放,这些现象必然导致课堂教学的低效甚至无效。如... 详细信息

笔者近来听了本市一些高中音乐课,发现尽管课改已推进多年,但人们对于有效的音乐课堂教学在认识上依然存在着很多误区,导致音乐课堂教学中普遍存在一些共性的问题：满堂问、满堂动、满堂放,这些现象必然导致课堂教学的低效甚至无效。如何才能进一步实现高中音乐课堂教学的有效性？笔者以为主要有三条路径。

关键词：音乐课堂教学高中有效性课改