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基于微流控芯片平台解析缺氧诱导转分化的内皮细胞增强胶质瘤干样细胞抵抗替莫唑胺的机制

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基于微流控芯片平台解析缺氧诱导转分化的内皮细胞增强胶质瘤干样...

作者：郑宗清福建医科大学

学位级别：硕士

第一部分:缺氧诱导胶质瘤干样细胞向血管内皮样细胞转分化。目的:通过体外缺氧诱导胶质瘤干样细胞(glioma stem-like cell,GSLC)转分化为内皮样细胞(glioma derived endothelial cell,GDEC),同时进一步检测胶该细胞在体外培养的性质和... 详细信息

第一部分:缺氧诱导胶质瘤干样细胞向血管内皮样细胞转分化。目的:通过体外缺氧诱导胶质瘤干样细胞(glioma stem-like cell,GSLC)转分化为内皮样细胞(glioma derived endothelial cell,GDEC),同时进一步检测胶该细胞在体外培养的性质和功能变化特点。方法:体外通过RFP+的SU3胶质瘤细胞系,通过无血清培养GSLC,后将GSLC在特定的转分化的培养基中,置于缺氧小室内进行缺氧(1.5%O2)培养48h。以培养HBMEC作为对照,观察细胞的形态学变化;利用免疫荧光标记技术对该细胞进行CD31和v WF内皮细胞表面标记物联合鉴定;通过Matrigel胶上进行三维培养,进一步考察该细胞形成血管管腔样结构的功能,同时应用透射电镜对细胞超微结构进行观察,比较该细胞器结构的差异;最后通过无血清培养探讨GDEC向GSLC逆向分化现象,以及明确在共同培养基中培养,检测内皮细胞标记物的变化情况。结果:1)缺氧条件下在转分化培养基中诱导GSLC48h,形态学上细胞分布由杂乱无章逐渐形成规则铺路分布,细胞形态由不规则结构转变成梭形内皮细胞样结构,同时能够阳性表达CD31及v WF内皮细胞标记物。2)GDEC具备正常内皮细胞性质,在Matrigel胶上能够形成典型血管腔样结构;与正常内皮细胞相比,GDEC具备更丰富的细胞器结构。3)转分化血管内皮细胞仍保留肿瘤细胞性质,在无血清培养下能较快逆分化成GSLC,而在含有内皮细胞培养基中则能长时间维持内皮细胞标记物稳定表达。结论:体外缺氧条件下,GSLC在转分化培养基中能够分化为具有内皮细胞性质和功能的血管内皮样细胞,它保留部分肿瘤细胞的性质,在不同培养条件下,能转变成不同类型的细胞。第二部分:基于肿瘤缺氧niche理念构建胶质瘤干样细胞与内皮细胞相互作用的在线分析模型目的:基于肿瘤组织缺氧niche理念,体外构建在缺氧条件下GSLC与内皮细胞之间相互作用在线分析模型,并探讨GDEC对GSLC作用。方法:结合HE和免疫荧光双染技术,证实脑胶质瘤组织缺氧区血管旁微环境的存在。基于相关病理参数基础上,利用PDMS通过“光刻法”制作微流控芯片,通过叠加组装形成上下层各有3条“L”型通道的微流控芯片,结合缺氧小室构建缺氧共培养系统。通过荧光报告系统和氧电极实时记录细胞相互作用的距离和氧气含量变化。应用死活试剂分析系统中GSLC、HBMEC、GDEC培养24h、48h、72h的存活情况;通过细胞荧光蛋白和免疫荧光标记技术追踪该系统中培养48h的GSLC、HBMEC、GDEC细胞原有标记物的变化;最后结合细胞荧光蛋白标记和细胞荧光追踪技术,将各种内皮细胞和GSLC接种在芯片上下层通道内,构建单独培养GSLC、HBMEC和GSLC共培养以及GDEC和GSLC共培养的三组在线分析模型,以前面两组作为对照组,分析缺氧环境中在GDEC作用下,GSLC细胞增殖情况。结果:1)缺氧小室和微流控芯片构建的缺氧共培养系统提供更靠近真实肿瘤微环境内皮细胞与GSLCs相互作用的平台。2)GSLC、HBMEC、GDEC缺氧共培养系统中培养24h、48h、72h呈现良好生长,利用选取培养48h以上各种细胞进行原有细胞标记物在线检测,结果表明以上各种细胞的原有标记物呈现稳定表达3)通过细胞荧光蛋白标记和细胞荧光追踪技术在线分析表明在缺氧共培养系统中GDEC具有更强促进GSLC增殖作用。结论:双层微流控芯片结合缺氧小室构成的缺氧共培养系统可有效应用于缺氧环境下细胞之间相互作用的研究,并成功模拟并证实缺氧下GDEC和GSLC之间的串话;同时结合细胞荧光蛋白标记和荧光追踪技术实现对细胞实时观察检测的功能。第三部分:缺氧下诱导胶质瘤干样细胞转分化的内皮细胞对胶质瘤干样细胞抵抗替莫唑胺的影响及分子机制目的:探索缺氧微环境中GDEC对GSLC抵抗TMZ作用的影响及分子机制方法:基于第二部实验搭建缺氧共培养在线分析模型的基础上,构建单独培养GSLC、HBMEC和GSLC共培养以及GDEC和GSLC共培养三组化疗共培养模型,在各组实验中添加2000μmmol/L的TMZ作用48h,以前两组作为对照组,每组设3个重复实验,通过激光共聚焦技术和流式细胞术分析在GDEC细胞作用下,GSLC存活和凋亡比例;最后在未加药的三组共培养模型中,通过Western-blot以及免疫荧光技术分析Jagged1、DLL4在与GSLC共培养前后GDEC表达情况,同时Elisa法检测三组共培养体系中共同培养基中Jagged1和DLL4含量;结合荧光定量PCR分析在GDEC作用下,GSLC细胞Notch信号下游Hes1激活情况。结果:1)缺氧共培养系统中三组实验,进行TMZ药物干预48h,有内皮细胞共培养下,GSLC的存活比例高,凋亡细胞少;其中,在GDEC作用下,GSLC存活比例最高,凋亡细胞最少。2)与GSLC缺氧共培养48h后

关键词：转分化肿瘤干细胞内皮细胞缺氧微流控缺氧微环境胶质瘤增殖 Notch 耐药

一种基于组织病理结合BMP2mRNA表达的胶质瘤新分级模型及其应用价值

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一种基于组织病理结合BMP2mRNA表达的胶质瘤新分级模型及其应用价...

第十五届中国医师协会神经外科医师年会

作者：周开甲张鸣刘伯伟郑宗清福建省肿瘤医院神经肿瘤外科

目的:通过胶质瘤患者术后组织学病理及骨形态发生蛋白2（bonemorphogeneticprotein2,BMP2）mRNA表达建立一种胶质瘤新分级模型,并探讨其在胶质瘤中的应用价值。方法:1、模型建立:1)、提取CGGA数据库里692例患者的临床基本信息、组织病... 详细信息

目的:通过胶质瘤患者术后组织学病理及骨形态发生蛋白2（bonemorphogeneticprotein2,BMP2）mRNA表达建立一种胶质瘤新分级模型,并探讨其在胶质瘤中的应用价值。方法:1、模型建立:1)、提取CGGA数据库里692例患者的临床基本信息、组织病理结果、生存期及BMP2 mRNA表达水平。2)、结合胶质瘤患者组织病理类型及肿瘤组织中BMP2m RNA水平表达的不同,建立一种新的胶质瘤分级模型:我们将它命名为HB分级（包含4个级别）:HBs（极高表达型）,HBh（高表达型）,HBm（中表达型）,HBl（低表达型）。3)、对HB分型中4个级别胶质瘤患者进行生存期分析。2、模型验证:分别提取CGGA数据库中另一组291例及TGGA数据库中625例患者临床基本信息、组织病理结果、生存期及BMP2m RNA表达水平对该分级模型进行BMP2表达水平及生存分析,评估结果的有效性。3、模型扩展应用:利用CGGA数据库,根据HB分级模型,检测4个级别中BMP2三种受体BMPR1A/BMPR1B/BMPR2（bonemorphogeneticprotein receptor）的表达情况,同时与BMP2的表达进行分析,探讨BMP2的作用机制。结果:1、建立了基于组织化学及BMP2表达基础上的新的胶质瘤分级（HB分级:HBs:r O,r AO,r OA.HBh:O,AO,OA.HBm:AOA,r AOA,A,rA,AA,rAA.HBl:GBM,rGBM）,并与患者预后有关。2、利用该模型分析了CGGA另一组291例及TGGA中625例胶质瘤患者的BMP2mRNA的表达情况及生存期,得出与模型建立组类似的结果,说明模型有效。3、利用该分级模型进行BMP2/BMPR1A/BMPR1B/BMPR2的m RNA表达研究。在HBs组中,BMP2极高表达,BMPRIA/BMRPII高表达,但MPRIB低表达,导致其预后中等。在HBh组中,BMP2高表达,BMPRIA/BMPR2/BMPR1B均高表达,预后良好。在HBm组中,BMP2中等表达,虽然BMPR1A/BMPR1B/MPRII均高表达,其预后因受到BMP2中等表达影响,预后中等。在HBl组中,BMP2低表达,虽然BMPRIA/BMPRII高表达,BMPR1B低表达,预后差。结论:1.基于组织病理及BMP2表达基础上的新的胶质瘤分级（HB分级）能够预测胶质瘤患者的预后。2、不同类别胶质瘤BMPR1A、BMPR2均高表达,而BMP2、BMPR1B表达水平不同,其不同组合造成了不同类别胶质瘤的不同预后。3、BMP2增加胶质瘤分化、凋亡的作用具有受体依赖性,主要依赖于受体BMPR1B。同时具有自身浓度依赖性,BMP2浓度越高,患者预后越好。

关键词：胶质瘤分子分型组织病理

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丹霞山地质公园的建设及其管理问题探讨

丹霞山地质公园的建设及其管理问题探讨

全国第19届旅游地学年会暨韶关市旅游发展战略研讨会

作者：郑宗清华南师范大学旅游管理系

丹霞山是广东名山,中国名山,世界名山,有全国重点风景名胜区、国家地质地貌自然保护区、国家AAAA 级旅游区等众多的头衔,2004年获世界地质公园称号。该文认为地质公园应作为丹霞山开展旅游事业的核心内容。目前,丹霞山地质公园在建设和... 详细信息

丹霞山是广东名山,中国名山,世界名山,有全国重点风景名胜区、国家地质地貌自然保护区、国家AAAA 级旅游区等众多的头衔,2004年获世界地质公园称号。该文认为地质公园应作为丹霞山开展旅游事业的核心内容。目前,丹霞山地质公园在建设和管理方面存在亟待解决的问题,建设方面表现在地质游形象不突出,地质标识牌不足, 丹霞地貌研究成果未被充分应用,导游对地质无所知之。管理方面表现在政出多门,部分员工服务意识差,管理不规范等不足,作者从旅游地学的角度,在充分认识丹霞山地质公园特点的基础上,针对问题提出了相应的解决办法。

关键词：丹霞山丹霞地貌地质公园旅游地质

利用手机POCO相机双重曝光技术无创、快速定位颅内病变、血管及功能区的临床研究

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利用手机POCO相机双重曝光技术无创、快速定位颅内病变、血管及功...

第十四届中国医师协会神经外科医师年会

作者：周开甲张鸣刘伯伟郑宗清福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤医院神经肿瘤外科

目的探讨利用手机下载POCO相机软件,并应用其中的双重曝光照相技术无创、快速定位颅内病变、颅内重要血管及功能区的精确性及其应用价值。方法 1、将普通MRI片或CT片的三维片（冠状位、矢状位、轴位）分别用手机中下载的POCO相机软件进... 详细信息

目的探讨利用手机下载POCO相机软件,并应用其中的双重曝光照相技术无创、快速定位颅内病变、颅内重要血管及功能区的精确性及其应用价值。方法 1、将普通MRI片或CT片的三维片（冠状位、矢状位、轴位）分别用手机中下载的POCO相机软件进行双重曝光的第一重曝光、拍照;第一重影像信息存留于手机屏幕上;2、将手机屏幕中存留的普通MRI片或CT片的第一重三维片分别与病人实际颅脑表面空间位置相重合,进行理论上的第二重曝光、拍照。冠状位、矢状位、轴位上各选择一帧图片即可,每帧图片仅包含图像上病变最明显的一层面即可;3、在第二重曝光前调整手机的远近及左右、上下位置,使得手机屏幕上存留的第一重曝光的MRI或CT影像周围特征性结构（如颅骨弧度、鼻根形状、眼眶形状等）与病人实际颅脑周围相应结构重叠,即手机屏幕中存留的第一重图像周边与病人颅脑的边缘重叠;4、此时MRI片或CT片上的颅内病变、重要血管、功能区均可以显示于病人实际颅脑表面,据此可以根据颅脑表面显示的信息直接在颅脑表面画出颅内病变、重要血管、功能区位置图;5、根据画出的颅内病变、重要血管、功能区位置图设计手术切口;6、开颅、进一步比对验证该方法的定位效果、切除病变,对位于颅脑深部病变,则术中多层面逐层由浅入深反复照相,引导手术入路,最终探及并切除肿瘤,随访手术效果。结果 1、开颅后直视下表浅的颅内病变、重要血管、功能区位置均符合真实位置（100%）2、深部颅内病变经多层面、多次照相引导后亦顺利找到并切除3、术后头颅CT复查手术区域、范围切除满意,随访患者术后恢复良好。结论利用手机POCO相机双重曝光技术可以无创、简易、快速定位颅内病变、重要血管及功能区。该方法利用手机双重拍照,无创,可以重复、随时使用,且无直接接触病人,保证了无菌性,对于手术中辅助定位极为有利,简易、低廉,病人零费用,而且快速、高效,定位准确,适合于基层及急诊时的快速应用,有极广的应用价值。但对颅脑深部肿瘤的引导应用例数尚少,应用的病人随访时间尚短,有待进一步探讨。

关键词：颅内病变定位诊断与治疗手机拍照

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金融危机对广州旅游业的影响及对策

金融危机对广州旅游业的影响及对策

第十四届全国区域旅游开发学术研讨会暨第二届海南国际旅游...

作者：郑宗清胡靖贤华南师范大学旅游管理系

广州是一个极具旅游魅力的城市。随着金融危机的负面影响越来越明显,正处于蓬勃发展的广州旅游业也将接受这次金融危机的洗礼。金融危机对广州旅游业的影响,主要有广州入境游下滑,外汇收入减少,广州出境旅游面临增长滞缓,广州旅游企业... 详细信息

广州是一个极具旅游魅力的城市。随着金融危机的负面影响越来越明显,正处于蓬勃发展的广州旅游业也将接受这次金融危机的洗礼。金融危机对广州旅游业的影响,主要有广州入境游下滑,外汇收入减少,广州出境旅游面临增长滞缓,广州旅游企业面临经营困难;同时存在发展机遇:"亚运"带给广州旅游业的机遇,国家政策"拉动内需"带来的机遇,"国民旅游休闲计划"带来的机遇,"六十大庆"将带来的机遇,"台湾之旅"带来的机遇;提出了旅游业充分利用各种机遇、提升内部管理水平、重视人才建设、多种多样的营销等应对策略,以供旅游从业者参考。

关键词：广州旅游业金融危机对策

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中外旅游地理

中外旅游地理

手术联合替莫唑胺治疗脑胶质母细胞瘤的疗效及安全性

2014年

作者：肖星郑宗清候佩旭左盘石副

本书主要内容包括绪论、旅游资源，世界遗产，旅游交通，旅游线路，中国旅游地理分区，世界旅游地理分区，旅游与环境等。

关键词：经济旅游经济世界旅游事业

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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临床合理用药杂志 2020年第26期13卷 137-139页

作者：郑宗清周开甲张鸣刘伯伟福建省肿瘤医院/福建医科大学附属肿瘤医院福州市350014

目的观察手术联合替莫唑胺(TMZ)治疗脑胶质母细胞瘤(GBM)的疗效及安全性。方法选择2015年6月-2017年12月福建省肿瘤医院/福建医科大学附属肿瘤医院治疗的GBM患者84例,采用随机数字表法分为观察组和对照组各42例。观察组给予手术治疗联合... 详细信息

目的观察手术联合替莫唑胺(TMZ)治疗脑胶质母细胞瘤(GBM)的疗效及安全性。方法选择2015年6月-2017年12月福建省肿瘤医院/福建医科大学附属肿瘤医院治疗的GBM患者84例,采用随机数字表法分为观察组和对照组各42例。观察组给予手术治疗联合TMZ化疗治疗,对照组给予单纯手术治疗。比较2组患者的临床疗效、生存率及不良反应。结果观察组患者总有效率为78.57%,高于对照组的59.52%(χ2=6.354,P=0.034);观察组治疗后6、12、18、24个月的生存率均高于对照组(P<0.01或P<0.05);观察组患者治疗后出现恶心呕吐、骨髓抑制、脱发、白细胞下降、肝功能受损等不良反应,给予对症治疗后缓解,不影响化疗治疗周期。结论手术联合TMZ治疗GBM近期疗效较好,有助于延长患者生存周期,不良反应进行对症治疗后均能缓解,治疗安全性高,值得临床推广应用。

关键词：脑胶质母细胞瘤手术替莫唑胺化疗临床疗效安全性

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爱国研学践行“三有”德育初探

中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2021年第6期 0303-0303页

作者：郑宗清佛山市顺德区龙江丰华初级中学广东佛山528318

立德树人是教育的根本任务,从活动育人的角度去实践爱国主义教育可以培根铸魂、启智润心。把学生的持续发展和国家发展战略相契合巧用研学实践培养有正气、有雅行、有正气的“三有”学生是新时代的需要。 “三有”爱国研学需要研读理论... 详细信息

立德树人是教育的根本任务,从活动育人的角度去实践爱国主义教育可以培根铸魂、启智润心。把学生的持续发展和国家发展战略相契合巧用研学实践培养有正气、有雅行、有正气的“三有”学生是新时代的需要。 “三有”爱国研学需要研读理论,设计活动框架;巧用辩与论启动思想动员;定制经营研学基地活化教育成果;反刍淬练持续发展终身受益。

关键词：爱国研学三有德育

基于推力因素理论的老年群体旅游动机实证研究——以广州老年人为例

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基于推力因素理论的老年群体旅游动机实证研究——以广州老年人为...

旅游业：推动产业升级和城市转型——第十三届全国区域旅游...

作者：郑宗清赵衬笑华南师范大学旅游管理系

旅游动机是旅游活动的内在心理因素,对老年群体旅游动机的分析有助于深入了解老年群体的旅游行为,而旅游推力因素是研究旅游行为潜在动机的有效方法。通过对广州市老年人的问卷调查,应用因子分析法,确立5个推力公因子,并通过独立样本T... 详细信息

旅游动机是旅游活动的内在心理因素,对老年群体旅游动机的分析有助于深入了解老年群体的旅游行为,而旅游推力因素是研究旅游行为潜在动机的有效方法。通过对广州市老年人的问卷调查,应用因子分析法,确立5个推力公因子,并通过独立样本T检验和方差分析法,分析了老年旅游者人口统计特征的差异对旅游动机的影响,结果显示年龄,收入,性格,气质对旅游动机影响均有显著差异。

关键词：旅游动机推力因素老年群体广州