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中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者病毒基因在大肠杆菌中的表达及其抗原性

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中华医学杂志 2006年第14期86卷 983-986页

作者：边中启华占楼严维耀刘明秋郑兆鑫中国人民解放军成都军区昆明总医院传染病中心昆明650032 复旦大学遗传工程国家重点实验室

目的研究不同民族慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV前S2/S(preS2/S)和C(core,C)基因在大肠杆菌Escherichia coli(***)中表达的稳定性和水平,并对其抗原性进行鉴定,为创制新型疫苗提供抗原材料。方法从中国云南少数民族地区50例慢性乙型肝炎患... 详细信息

目的研究不同民族慢性乙型肝炎(CHB)患者HBV前S2/S(preS2/S)和C(core,C)基因在大肠杆菌Escherichia coli(***)中表达的稳定性和水平,并对其抗原性进行鉴定,为创制新型疫苗提供抗原材料。方法从中国云南少数民族地区50例慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV基因组DNA,将聚合酶链反应(PCR)扩增-克隆-测序的HBV preS2/S和C基因插入到表达载体pλPR上,构建重组pλPR-S2S和pλPR-C表达质粒,并在大肠杆菌TOP10中表达。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定表达产物非融合蛋白,并对其抗原性用Western印迹和ELISA方法进行检测。结果SDS-PAGE检测到全部慢性乙型肝炎患者pλPR-S2S和pλPR-C重组质粒在大肠杆菌TOP10中存在稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白相对分子质量分别为31000和21000,非融合蛋白浓度约占16%,纯度达96%。Western印迹和ELISA分析,非融合蛋白能分别与HBVpreS2/S抗原单抗、C抗原单抗及慢性乙型肝炎患者血清发生反应,而与对照的甲型肝炎(HAV)患者血清、丙型肝炎(HCV)患者血清及正常血清之间无交叉反应。结论中国云南少数民族地区慢性乙型肝炎患者HBV preS2/S和C基因在大肠杆菌TOP10中有稳定性和高水平的表达,表达的非融合蛋白具有抗原性。这些发现为创制新型疫苗具有潜在应用价值。

关键词：肝炎病毒,乙型疫苗大肠杆菌少数民族 Western印迹

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抗A5型口蹄疫病毒重组多肽疫苗的研究

复旦学报（自然科学版） 2005年第6期44卷 1037-1041页

作者：刘明秋张骏陈维灶严维耀郑兆鑫复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

根据A型口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因序列及国际上公认的抗病毒中和表位,并结合对口蹄疫病毒的研究成果,设计了A型FMDV的重组多肽疫苗.分别选择VP1上21～40位和137～160位氨基酸对应的基因序列为表位基因,组成137～160-21～40-137～160的... 详细信息

根据A型口蹄疫病毒(FMDV)的VP1基因序列及国际上公认的抗病毒中和表位,并结合对口蹄疫病毒的研究成果,设计了A型FMDV的重组多肽疫苗.分别选择VP1上21～40位和137～160位氨基酸对应的基因序列为表位基因,组成137～160-21～40-137～160的串连结构,并以大肠杆菌β-半乳糖苷酶为大分子载体,构建重组质粒pLM99,在大肠杆菌中表达得到高含量的融和蛋白.体外免疫原性检测表明,所表达的融和蛋白与标准A型阳性血清有特异性抗原/抗体反应,即说明该融和蛋白具有免疫反应性.免疫豚鼠的实验结果表明,融合蛋白能在豚鼠体内诱导中和抗体,并使70%的豚鼠能抵抗病毒的攻击.

关键词： A型口蹄疫病毒抗原表位多肽疫苗

畜禽病毒病防治有望弥补传统的抗病毒疫苗或抑制剂的缺陷——抑制病毒复制的“新式武器”:RNA干扰展望

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中国动物保健 2008年第1期10卷 112-113,115页

作者：陈维灶丛微郑兆鑫复旦大学

近年来越来越多的发现人畜共患疾病不仅威胁畜牧业发展,更是对人类的健康产生直接的威胁,例如非典病毒、禽流感病毒。又如在猪、牛、羊中传播极快的口蹄疫病毒,也是对人类健康潜在威胁。利用RNA干扰技术,可以一旦在家畜中疾病暴发后,先... 详细信息

近年来越来越多的发现人畜共患疾病不仅威胁畜牧业发展,更是对人类的健康产生直接的威胁,例如非典病毒、禽流感病毒。又如在猪、牛、羊中传播极快的口蹄疫病毒,也是对人类健康潜在威胁。利用RNA干扰技术,可以一旦在家畜中疾病暴发后,先采用干扰技术抑制病毒快速传播,减少大牲畜的屠宰数量,降低经济损失,为随后大规模免疫接种争取时间,提高免疫效率。还有些动物可能是人类病毒天然栖息载体,病毒在这些受感染动物体内呈现隐性感染状态,并不发病。例如鸭、鹅是禽流感的病毒库,猪是由禽流感转变为能人传人病毒的主要中间宿主。又如牛,常会隐性携带口蹄疫病毒,而要彻底清除这些中间宿主体内病毒,RNA干扰技术会起巨大作用。

关键词： RNA干扰技术病毒复制抗病毒疫苗新式武器病毒防治抑制剂人畜共患疾病禽流感病毒

同源重组构建表皮葡萄球菌纤维蛋白原结合基因缺失突变菌株

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中国感染与化疗杂志 2006年第3期6卷 154-158页

作者：赵旭朱德妹张婴元郑兆鑫严维耀复旦大学附属华山医院抗生素研究所上海200040 复旦大学遗传学研究所

目的构建表皮葡萄球菌(表葡菌)纤维蛋白原结合基因(fbe基因)缺失突变菌株,为fbe基因功能研究提供实验工具。方法采用同源基因重组技术。构建质粒ΔpBT2(含fbe::ermB基因),将其电转化进入金葡菌RN4220,再次抽提后电转化进入fbe基因阳性... 详细信息

目的构建表皮葡萄球菌(表葡菌)纤维蛋白原结合基因(fbe基因)缺失突变菌株,为fbe基因功能研究提供实验工具。方法采用同源基因重组技术。构建质粒ΔpBT2(含fbe::ermB基因),将其电转化进入金葡菌RN4220,再次抽提后电转化进入fbe基因阳性表葡菌(HB)中。将含有质粒ΔpBT2的表葡菌HB在5mg/L红霉素平板42℃经多次传代,使质粒ΔpBT2裂解,fbe::ermB基因同源重组到表葡菌HB的染色体上,通过红霉素耐药、氯霉素敏感等特性筛选出含有fbe::ermB基因的新表葡菌HB-ermB。结果经酶切鉴定后确认质粒ΔpBT2构建成功以及成功转导入金葡菌RN4220和表葡菌HB中,经PCR方法以及测序确认表葡菌HB的fbe基因缺失突变菌株HB-ermB构建成功。结论采用同源重组的方法完成了表葡菌HB的fbe基因缺失突变菌株的构建。

关键词：表皮葡萄球菌纤维蛋白原结合基因同源重组

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棒状杆菌表达载体pJL23的构建

复旦学报（自然科学版） 2000年第3期39卷 292-296页

作者：陆军唐炯张文波严维耀郑兆鑫复旦大学遗传学研究所常熟高等专科学校生物系常熟215500 复旦大学生命科学学院复旦大学遗传工程国家重点实验室

质粒 pGA46 4带有从谷氨酸棒杆菌染色体上分离到的有启动功能的片段 ,用PCR技术从 pGA46 4中扩增了该片段的关键区域 :启动子PGL.将该启动子经EcoRⅠ BamHⅠ双酶切后 ,与大肠杆菌质粒 pJL0 1的EcoRⅠ BamHⅠ大片段连接 ,再接入XylEg... 详细信息

质粒 pGA46 4带有从谷氨酸棒杆菌染色体上分离到的有启动功能的片段 ,用PCR技术从 pGA46 4中扩增了该片段的关键区域 :启动子PGL.将该启动子经EcoRⅠ BamHⅠ双酶切后 ,与大肠杆菌质粒 pJL0 1的EcoRⅠ BamHⅠ大片段连接 ,再接入XylEgene和棒状杆菌质粒pXZ 10 142 ,构建成棒状杆菌大肠杆菌穿梭表达载体 pJL2 3.用邻苯二酚双加氧酶基因检测表明 ,该表达载体可在棒状杆菌中高效地表达外源基因 .

关键词：启动子 pXZ10142 pJL23 棒状杆菌克隆表达载体