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宫内膜干细胞与跟腱细胞在低氧共培养研究宫内膜干细胞的体外分化研究

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宫内膜干细胞与跟腱细胞在低氧共培养研究宫内膜干细胞的体外分化...

2014年浙江省骨科学学术年会

作者：郑亦静洪建军温州医科大学附属第二医院

目的:通过人宫内膜干细胞与人跟腱细胞在低氧环境下共培养及检测宫内膜干细胞的各项特异性指标的表达量,研究共培养以及低氧对人宫内膜干细胞向跟腱细胞定向分化的影响。方法:在无菌条件下获取三例跟腱修复术患者的跟腱标本,去除疤痕组... 详细信息

目的:通过人宫内膜干细胞与人跟腱细胞在低氧环境下共培养及检测宫内膜干细胞的各项特异性指标的表达量,研究共培养以及低氧对人宫内膜干细胞向跟腱细胞定向分化的影响。方法:在无菌条件下获取三例跟腱修复术患者的跟腱标本,去除疤痕组织及腱、鞘膜组织,通过原代细胞培养得到跟腱细胞。利用带有插入层的Transwell 6孔培养板进行细胞非接触式共培养,细胞比例为1:1,将跟腱细胞置于上层,宫内膜干细胞置于下层。并将共培养系统分别置于常氧(20%O2)、低氧(2%O2)环境下进行培养,宫内膜干细胞单独培养作为对照组。每组各自培养1、2、3周后,提取宫内膜干细胞总RNA,利用Real-Time PCR检测其Ⅰ、Ⅲ型胶原、Thrombospondin 4,TENC,SCX基因表达的改变;利用阿新蓝染色法检测蛋白多糖表达量的改变;免疫组化检测Thrombospondin 4的表达;并用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测Ⅰ型胶原与Thrombospondin 4蛋白的表达量。结果:1.共培养后,成功分离提取宫内膜干细胞;Real-Time PCR检测结果显示常氧组与低氧组宫内膜干细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原、Thrombospondin 4,TENC,SCX基因相对表达较对照组显著增加;差异有统计学意义(P<0.01)。2.蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测显示常氧组与低氧组Ⅰ型胶原与Thrombospondin 4蛋白的表达量表达较对照组显著增加;,差异有统计学意义(P<0.01)。3.阿新蓝染色及免疫组化分别显示常氧组与低氧组的蛋白多糖与Thrombospondin 4的表达量较对照组显著增加.4.低氧组与常氧组相比,增加更明显,但是低氧组与常氧组的差异不存在统计学意义(P<0.01)。结论:细胞非接触式共培养能促进人宫内膜干细胞被跟腱细胞诱导分化为类跟腱细胞,低氧组能在一定程度上促进宫内膜干细胞的定向分化。干细胞的定向分化即细胞移植有可能成为治疗跟腱病变的一种有效的治疗方式。

关键词：共培养分化低氧宫内膜干细胞跟腱细胞

来源： cnki会议评论

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低氧时脂肪间充质干细胞如何向跟腱细胞分化

中国组织工程研究 2014年第1期18卷 81-87页

作者：程涛余洋张小磊郑亦静楼宇梁洪建军温州医科大学附属第二医院骨科浙江省温州市325027 浙江大学医学院干细胞与组织工程研究中心浙江省杭州市310058

背景:脂肪间充质干细胞在跟腱组织工程再生领域越来越受到重视,研究其诱导分化的有利环境(氧体积分数)尤为必要。目的:将脂肪间充质干细胞与跟腱细胞在不同氧体积分数条件下间接共培养,比较氧体积分数对脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化... 详细信息

背景:脂肪间充质干细胞在跟腱组织工程再生领域越来越受到重视,研究其诱导分化的有利环境(氧体积分数)尤为必要。目的:将脂肪间充质干细胞与跟腱细胞在不同氧体积分数条件下间接共培养,比较氧体积分数对脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化能力的影响。方法:无菌条件下获取SD大鼠跟腱细胞。SD大鼠脂肪间充质干细胞直接购买,经培养传至第1代后,与跟腱细胞一起在常氧(体积分数20%)和低氧(体积分数2%)条件下经Transwell间接共培养体系共培养。在培养7,14和21 d,实时荧光定量PCR检测跟腱细胞的特异指标胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ,Tenomodulin,Thrombospondin-4,Scleraxis基因相对表达量,免疫荧光染色法检测胶原蛋白Ⅰ和Thrombospondin-4蛋白表达量。结果与结论:脂肪间充质干细胞与跟腱细胞经间接共培养后,低氧组检测到的跟腱细胞的相关特异指标在基因和蛋白水平上表达水平均高于常氧组。提示氧体积分数可显著影响脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的潜能,低氧是脂肪间充质干细胞向跟腱细胞分化的有利条件之一。

关键词：干细胞脂肪干细胞跟腱细胞低氧常氧共培养腱向分化

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黄宾虹与故宫鉴画

新美术 2024年第2期45卷 253-258页

作者：郑亦山中国美术学院

1935年12月11日,黄宾虹收到了首都(南京)地方法院检察处的聘书,聘书附“选任鉴定人条件”一纸:一、鉴定书画全部。二、期间暂定为六个月,于必要时得延长或辞退之。三、鉴定费,每一鉴定人每月至多不得过五百元。四、鉴定首应依刑事诉讼... 详细信息

1935年12月11日,黄宾虹收到了首都(南京)地方法院检察处的聘书,聘书附“选任鉴定人条件”一纸:一、鉴定书画全部。二、期间暂定为六个月,于必要时得延长或辞退之。三、鉴定费,每一鉴定人每月至多不得过五百元。四、鉴定首应依刑事诉讼法第一百八十九条之规定具结。五、须作鉴定报告。六、每日鉴定时间以中央银行开库时为准。

关键词：地方法院中央银行黄宾虹鉴定人刑事诉讼法鉴定报告鉴定时间检察处

微创经皮锁定重建钢板与弹性髓内钉治疗锁骨中段骨折的对比研究

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中华手外科杂志 2016年第4期32卷 260-263页

作者：冯永增水小龙郑亦静陈龙汤骏郭晓山洪建军温州医科大学附属第二医院骨科温州325027

目的对应用微创经皮锁定重建钢板与弹性髓内钉治疗锁骨中段骨折的疗效进行对比分析。方法自2010年1月至2014年8月收治62例锁骨中段骨折病例，34例行经皮锁定重建钢板固定（钢板组），28例行经皮弹性髓内钉固定（弹性钉组），对两组病例... 详细信息

目的对应用微创经皮锁定重建钢板与弹性髓内钉治疗锁骨中段骨折的疗效进行对比分析。方法自2010年1月至2014年8月收治62例锁骨中段骨折病例，34例行经皮锁定重建钢板固定（钢板组），28例行经皮弹性髓内钉固定（弹性钉组），对两组病例术中情况，术后第三天疼痛评分、骨折愈合时间、临床疗效及并发症进行对比分析。结果两组在术中C臂机照射时间、术后第三天疼痛评分、A型骨折的愈合时间方面比较，差异均无统计学意义。弹性钉组手术时间短于钢板组，而钢板组B型骨折的愈合时间短于弹性钉组，差异均有统计学意义。术后6个月时，两组的DASH和Constant-Murley评分分别进行比较，A型骨折病例差异均无统计学意义；钢板组B型骨折病例的评分均优于弹性钉组，差异有统计学意义。术后12个月时，两组A型和B型骨折病例的DASH和Constant-Murley评分分别进行比较，差异均无统计学意义。弹性钉组术后更易出现皮肤激惹，而在内固定松动、创口感染、再骨折方面两组差异均无统计学意义。结论经皮锁定重建钢板与弹性髓内钉都是治疗锁骨中段骨折的有效微创内固定方式。但从B型骨折的愈合时间、术后6个月的功能评分及术后并发症来看，经皮锁定重建钢板固定在粉碎性锁骨中段骨折的治疗中更具优势。

关键词：锁骨骨折固定术,内锁定重建钢板弹性髓内钉

经皮复位内固定结合硫酸钙骨水泥植骨治疗跟骨关节内骨折

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浙江创伤外科 2012年第6期17卷 771-773页

作者：卢晓郎洪建军郑亦静叶超程涛温州医学院附属第二医院温州325000

目的探讨经皮复位内固定结合硫酸钙骨水泥植骨治疗跟骨关节内骨折的适应证及优缺点。方法 2007年5月至2010年5月,在C臂机辅助下采用闭合复位经皮螺钉内固定结合硫酸钙骨水泥植骨治疗单侧跟骨关节内骨折15例。结果本组所有病例均恢复Boeh... 详细信息

目的探讨经皮复位内固定结合硫酸钙骨水泥植骨治疗跟骨关节内骨折的适应证及优缺点。方法 2007年5月至2010年5月,在C臂机辅助下采用闭合复位经皮螺钉内固定结合硫酸钙骨水泥植骨治疗单侧跟骨关节内骨折15例。结果本组所有病例均恢复Boehler角和Gissane角,跟骨长宽高均满意,与术前相比均有显著性差异,随访复查Boehler角和Gissane角均未丢失。术后无创口感染、创口延迟愈合及皮肤坏死。根据美国足踝协会AOFAS评分评价术后足踝功能,15例病人评分结果为85～100,平均91.5。优良率为100%。结论经皮复位内固定结合硫酸钙骨水泥植骨治疗跟骨关节内骨折的治疗,可获得良好的复位和可靠的固定,明显降低软组织损伤等并发症的发生率,并可促进骨折愈合,加快患者负重功能锻炼的时间;是一种经济、有效、可行的微创治疗方法。

关键词：经皮植骨内固定跟骨骨折

微创经皮锁定钢板与切开复位重建钢板内固定在治疗锁骨骨折中的疗效比较

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中华手外科杂志 2013年第4期29卷 225-227页

作者：郑亦静洪建军程涛叶超赖红燕卢晓郎楼宇梁温州医学院附属第二医院骨科 325027

目的评价微创经皮锁定钢板内固定（㈣）与切开复位重建钢板内固定（ORIF）两种方法治疗锁骨骨折的疗效。方法2011年1月至2012年6月，对42例锁骨骨折患者，分别采用MIPPO和ORIF两种方法治疗，观察术中出血量、手术时间、住院时间、术后... 详细信息

目的评价微创经皮锁定钢板内固定（㈣）与切开复位重建钢板内固定（ORIF）两种方法治疗锁骨骨折的疗效。方法2011年1月至2012年6月，对42例锁骨骨折患者，分别采用MIPPO和ORIF两种方法治疗，观察术中出血量、手术时间、住院时间、术后并发症发生率以及骨折愈合时间、肩关节功能（Neer评分），并进行对比研究。结果两组的手术时间、术后并发症发生率比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；术中出血量、住院时间比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。术后42例随访6—12个月，平均9个月。MIPPO组骨性愈合时间平均（11．6±1．6）周，ORIF组平均（13．0±2．1）周，两组差异有统计学意义（P〈0．05）。功能评定按照Neer肩关节评分标准，MIPPO组总体优良率为91．7％，ORIF组总体优良率为86．7％，两组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论经皮锁定钢板内固定较切开复位重建钢板内固定治疗锁骨骨折具有术中出血少、住院时间短、手术创伤小、骨折愈合快、功能恢复好的优点。

关键词：锁骨骨折固定术,内治疗结果

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细胞自噬在糖尿病大鼠椎间盘退变中的作用

中国病理生理杂志 2013年第11期29卷 2011-2016页

作者：郑旭浩张小磊江立波胡旭琪金永龙郑亦静吴畏徐华梓温州医科大学附属第二医院脊柱外科浙江温州325000

目的:探讨凋亡和自噬水平在糖尿病大鼠椎间盘髓核组织中的变化及其作用。方法:SD大鼠注射链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病模型16周后,完整获取大鼠腰椎间盘,经石蜡包埋切片、苏木素-伊红(HE)染色和阿里新蓝染色,在组织水平检测椎间盘病理变化... 详细信息

目的:探讨凋亡和自噬水平在糖尿病大鼠椎间盘髓核组织中的变化及其作用。方法:SD大鼠注射链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病模型16周后,完整获取大鼠腰椎间盘,经石蜡包埋切片、苏木素-伊红(HE)染色和阿里新蓝染色,在组织水平检测椎间盘病理变化。DNA原位末端标记法(TUNEL)检测髓核细胞凋亡率,免疫组织化学及Western blotting方法检测髓核组织凋亡和自噬水平。结果:HE和阿里新蓝染色显示糖尿病大鼠椎间盘发生退变。和正常组相比,caspase-3阳性细胞比例在糖尿病大鼠椎间盘中明显增加。TUNEL结果显示糖尿病大鼠椎间盘髓核细胞凋亡率升高。Western blotting和免疫组织化学检测发现自噬指标LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin-1表达量在糖尿病大鼠组均高于正常组。结论:STZ诱导的糖尿病可加速大鼠椎间盘退变,并且提高了髓核组织中凋亡和自噬水平。

关键词：椎间盘退变糖尿病自噬细胞凋亡

双抗体靶向阿霉素纳米药物的研制及其靶向抗骨肉瘤作用

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温州医学院学报 2015年第8期45卷 547-551页

作者：郑亦静张小磊林焱武垚森张琼温州医科大学附属第二医院骨科浙江温州325027

目的:合成双抗体(抗壳聚糖抗体、抗HER2抗体)-阿霉素-壳聚糖纳米粒,研究其体外肿瘤细胞摄取实验及骨肉瘤裸鼠体内的靶向特性。方法:采用壳聚糖衍生物乙二醇壳聚糖制备双抗体-阿霉素-壳聚糖(Abc-GC-Dox)纳米粒、阿霉素-壳聚糖纳米粒。在... 详细信息

目的:合成双抗体(抗壳聚糖抗体、抗HER2抗体)-阿霉素-壳聚糖纳米粒,研究其体外肿瘤细胞摄取实验及骨肉瘤裸鼠体内的靶向特性。方法:采用壳聚糖衍生物乙二醇壳聚糖制备双抗体-阿霉素-壳聚糖(Abc-GC-Dox)纳米粒、阿霉素-壳聚糖纳米粒。在体外将药物作用于HER2+裸鼠骨肉瘤细胞系MG-63细胞,研究体外肿瘤细胞摄取实验,并采用免疫荧光的方法对其进行研究;14只骨肉瘤裸鼠随机分为2组,尾静脉注射不同药物,观察裸鼠体内皮下骨肉瘤的靶向分布差异。结果:本实验制得了稳定的双抗体靶向阿霉素纳米粒,包封率为89.73%,载药量为9.96%。通过体内外实验,双抗体纳米靶向药物的靶向聚集浓度明显高于无抗体纳米药物,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:本实验成功制备了双抗体靶向阿霉素纳米药物(Abc-GC-Dox),并证明该双抗体纳米粒提高了抗肿瘤药物在骨肉瘤细胞内的靶向分布,明显提高了药物浓度,并降低了药物的不良反应,为临床治疗骨肉瘤提供了一种新的治疗方法。

关键词：双抗体联合阿霉素乙二醇壳聚糖纳米粒靶向治疗骨肉瘤裸鼠

Endobutton与螺钉内固定治疗下胫腓联合分离的临床疗效分析

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中国骨伤 2016年第8期29卷 729-733页

作者：楼宇梁洪建军邵希文卢晓郎郑亦静赖红燕杭州市萧山区中医院骨科杭州萧山321000 温州医学院附属第二医院骨科浙江温州325027

目的：探讨采用Endobutton纽扣钢板线缆系统与皮质骨螺钉内固定治疗下胫腓联合韧带损伤分离的临床疗效。方法：回顾性分析2011年10月至2013年10月,手术治疗的38例踝关节骨折合并下胫腓联合分离者患者,按术中内固定材料,分为皮质螺钉内... 详细信息

目的：探讨采用Endobutton纽扣钢板线缆系统与皮质骨螺钉内固定治疗下胫腓联合韧带损伤分离的临床疗效。方法：回顾性分析2011年10月至2013年10月,手术治疗的38例踝关节骨折合并下胫腓联合分离者患者,按术中内固定材料,分为皮质螺钉内固定（A组）和Endobutton纽扣钢板线缆系统固定（B组）。其中A组26例,男16例,女10例;年龄19~63岁,平均（37.90±4.67）岁;左侧14例,右侧12例;按Danis-Weber分型：B型8例,C型18例;按照Lauge-Hanson分型：旋后外旋（SER）9例,旋前外展（PAB）10例,旋前外旋（PER）7例。B组12例,男7例,女5例;年龄20~55岁,平均（38.70±6.03）岁;左侧6例,右侧6例;按Danis-Weber分型：B型4例,C型8例;按Lauge-Hanson分型：旋后外旋3例,旋前外展2例,旋前外旋7例。记录并比较两组患者手术时间、术中出血量、手术费用、住院时间、术后1个月疼痛评分、创口愈合情况及术后负重时间,定期复查X线片评估两组患者骨折愈合情况。术后采用美国足踝外科协会（AOFAS）踝与后足评分系统对患者进行踝关节功能评价。结果：38例患者获得随访,时间8~18个月,平均13.5个月。术后A组比B组的手术时间更长、经济费用更高（P〈0.05）;两组患者术中失血量、住院时间、术后1个月疼痛评分、负重时间比较差异无统计学意义（P〉0.05）;两组的胫腓骨重叠宽度、胫腓骨间隙、内踝间隙比较差异无统计学意义（P〉0.05）。术后X线片随访,A组骨折愈合良好,1例患者术后8周螺钉断裂,踝穴无移位,B组病例骨折愈合良好,无装置脱落,踝穴无移位。术后AOFAS评分：A组（87.50±8.67）分,优18例,良4例,可4例;B组（86.23±7.42）分,优7例,良4例,可1例。两组AOFAS评分比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：Endobutton纽扣钢板线缆系统是一种治疗下胫腓联合韧带损伤分离的弹性固定装置,其固定效果与螺钉内固定相似,但避免了螺钉断裂风险,术后无须常规取出,有利于患者提前进行负重功能锻炼。

关键词：下胫腓联合踝关节骨折固定术,内