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siRNA抑制STAT3基因对HepG2细胞辐射敏感性的影响

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中华放射医学与防护杂志 2007年第5期27卷 444-446页

作者：姚雨石潘真郁成雨唐古生秦阳华祝宝让第二军医大学海医系放射医学教研室上海200433

目的研究瞬时转染的siRNA抑制STAT3基因表达对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响。方法以人肝癌HepG2细胞作为研究对象，脂质体包裹化学合成的siRNA进行转染。采用实时RT-PCR和Westernblotting法分别从mRNA水平和蛋白水平检测STAT3基... 详细信息

目的研究瞬时转染的siRNA抑制STAT3基因表达对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性的影响。方法以人肝癌HepG2细胞作为研究对象，脂质体包裹化学合成的siRNA进行转染。采用实时RT-PCR和Westernblotting法分别从mRNA水平和蛋白水平检测STAT3基因的表达及编码蛋白磷酸化活化的改变，用CCK-8法和Hoechst33258DNA染色法检测辐射敏感性的变化。结果STAT3特异性的siRNA转染后HepG2细胞中STAT3基因mRNA拷贝数、STAT3蛋白表达和磷酸化水平均明显降低。mRNA水平的抑制效率可达70％。siRNA转染联合60Coγ射线照射后HepG2细胞增殖活力显著低于对照组（P〈0．05）。结论针对人STAT3基因的siRNA能够抑制HepG2细胞STAT3基因的表达，降低STAT3蛋白活化水平，进而产生辐射增敏作用。

关键词： siRNA STAT3 辐射敏感性

新型高比活力α-N-乙酰半乳糖胺酶应用于人红细胞A→O血型改造

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科学通报 2008年第11期53卷 1288-1295页

作者：郁成雨徐华王立生张建耕章扬培军事医学科学院野战输血研究所血液分子生物学研究室北京100850 陕西省血液中心西安710061 军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室北京100850

α-N-乙酰半乳糖胺酶(α-N-acetylgalactosaminidase,αNAGA)是进行人红细胞(reblood cell,RBC)A→O血型改造的工具酶.采用PCR法从国内临床标本的脑膜脓毒性金黄杆菌中克隆出新型αNAGA基因,应用基因工程和蛋白质纯化技术获得足量高纯... 详细信息

α-N-乙酰半乳糖胺酶(α-N-acetylgalactosaminidase,αNAGA)是进行人红细胞(reblood cell,RBC)A→O血型改造的工具酶.采用PCR法从国内临床标本的脑膜脓毒性金黄杆菌中克隆出新型αNAGA基因,应用基因工程和蛋白质纯化技术获得足量高纯度的重组酶.重组酶分子量为49.6kD,专一性强,比活力高,在25℃及pH6.8条件下,1h内完全酶解1UA1型浓缩RBC(约100mL/U)需1.5mg酶,而1h内完全酶解1UA2型浓缩RBC仅需0.4mg酶.酶解后的A型RBC与抗A单克隆抗体、人源O型血清反应均不凝集,与A,B,O,AB等各型血清的主侧配血实验成功,主要稀有血型不变.流式细胞仪检测结果表明,酶解后A抗原和A1抗原消失,H抗原增加,证明A→O血型改造成功获得的酶解通用型RBC可以安全输给A,B,O,AB等各型受血者,不会因ABO血型不合发生输血反应.脑膜脓毒性金黄杆菌来源的αNAGA是十分理想的A→O血型改造的工具酶,具有良好的应用前景,对于提高输血安全性、消除血液偏型、节约输血成本、增强应急输血保障能力具有重要意义.

关键词：通用型红细胞血型改造 α-N-乙酰半乳糖胺酶输血 A抗原 A1抗原

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同源重组与肿瘤发生

国外医学（肿瘤学分册） 2004年第11期31卷 809-811页

作者：郁成雨潘真闵锐第二军医大学海医系放射医学教研室上海200433

同源重组是真核细胞修复DNA双链断裂损伤的一种重要途径 ,同源重组相关基因的突变导致基因组不稳定 ,增加肿瘤的发生率。近年来对同源重组的分子机制、参与的基因及其功能有了较为全面的认识 ,发现同源重组修复在肿瘤发生中发挥着重要... 详细信息

同源重组是真核细胞修复DNA双链断裂损伤的一种重要途径 ,同源重组相关基因的突变导致基因组不稳定 ,增加肿瘤的发生率。近年来对同源重组的分子机制、参与的基因及其功能有了较为全面的认识 ,发现同源重组修复在肿瘤发生中发挥着重要作用。

关键词：肿瘤 DNA损伤 DNA修复基因重组

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RNA损伤修复

生命的化学 2004年第4期24卷 286-287页

作者：郁成雨潘真闵锐第二军医大学海医系放射医学教研室上海200433

传统的观念认为RNA损伤修复远不如DNA损伤修复重要 ,然而 ,随着RNA甲基化损伤修复机制及RNA修复酶的发现 ,这一观点受到了巨大的挑战。RNA损伤可以诱导细胞周期阻滞和凋亡 ,RNA修复可能是一种细胞防御机制 ,在细胞损伤应激反应中发挥重... 详细信息

传统的观念认为RNA损伤修复远不如DNA损伤修复重要 ,然而 ,随着RNA甲基化损伤修复机制及RNA修复酶的发现 ,这一观点受到了巨大的挑战。RNA损伤可以诱导细胞周期阻滞和凋亡 ,RNA修复可能是一种细胞防御机制 ,在细胞损伤应激反应中发挥重要作用。

关键词： RNA损伤 RNA修复 hABH3 肿瘤

^(60)Coγ射线照射对脆性组氨酸三联体基因表达的影响

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第二军医大学学报 2003年第7期24卷 738-741页

作者：林亚华潘真韩玲蔡建明黄越承赵芳高建国郁成雨第二军医大学海军医学系放射医学教研室上海200433

目的 :研究脆性组氨酸三联体 (fragile histidine triad,FHIT)基因在电离辐射损伤和辐射致癌早期过程中的作用。方法 :将 4 0只 BAL B/ c小鼠随机分成对照组和 1.8、3.6、5 .4、7.2 Gy照射组共 5组 ,每组 8只动物。照射后 1个月用乙醚... 详细信息

目的 :研究脆性组氨酸三联体 (fragile histidine triad,FHIT)基因在电离辐射损伤和辐射致癌早期过程中的作用。方法 :将 4 0只 BAL B/ c小鼠随机分成对照组和 1.8、3.6、5 .4、7.2 Gy照射组共 5组 ,每组 8只动物。照射后 1个月用乙醚麻醉小鼠 ,心脏抽血 ,再解剖取胸腺及骨髓细胞 ,抽提其总 RNA。采用巢式 RT- PCR方法及 PCR产物直接测序法检测 FHIT基因的表达情况。结果 :对照组血液、胸腺及骨髓均未出现异常 FHIT转录本的表达 ,不同剂量照射组中血液、胸腺及骨髓均有部分样品出现相对分子质量较小的异常 FHIT转录本的表达。测序证实异常转录本缺失 2个或 2个以上的 FHIT外显子。结论 :电离辐射可引起 FHIT基因的缺失。

关键词：电离辐射损伤辐射致癌 ^60Coγ射线脆性组氨酸三联体基因表达肿瘤

联合应用α-半乳糖苷酶和α-N-乙酰半乳糖胺酶实现红细胞AB→O血型转变

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中国输血杂志 2008年第12期21卷 917-920页

作者：徐华郁成雨章扬培军事医学科学院野战输血研究所血液分子生物学研究室北京100850 陕西省血液中心

目的研究酶解去除AB型红细胞表面的A和B抗原、实现AB→O血型转变的方法,以获得通用型红细胞。方法联合应用α-半乳糖苷酶和α-N-乙酰半乳糖胺酶酶解AB型红细胞,用单克隆抗-A、抗-A1和抗-B抗体检测酶解效果,用稀有血型抗体检测酶解前后... 详细信息

目的研究酶解去除AB型红细胞表面的A和B抗原、实现AB→O血型转变的方法,以获得通用型红细胞。方法联合应用α-半乳糖苷酶和α-N-乙酰半乳糖胺酶酶解AB型红细胞,用单克隆抗-A、抗-A1和抗-B抗体检测酶解效果,用稀有血型抗体检测酶解前后红细胞表面的稀有血型,用流式细胞术检测酶解前后红细胞表面A、B、H抗原,原子力显微镜观察酶解前后红细胞形态,主侧配血试验检测酶解红细胞是否符合临床输血要求。结果A1B和A2B亚型红细胞的A、A1和B抗原均能够完全被酶解去除,酶解前后红细胞的稀有血型抗原不变;流式细胞术显示,酶解后AB型红细胞表面的A和B抗原消失,而H抗原明显增加,和O型红细胞相当;酶解不影响红细胞的形态;主侧配血试验证明酶解改造后的AB型红细胞可以安全输给O、A、B、AB等各型受血者。结论联合应用α-半乳糖苷酶和α-N-乙酰半乳糖胺酶成功实现了AB→O血型转变,获得酶解通用型红细胞。

关键词： α-半乳糖苷酶 α-N-乙酰半乳糖胺酶血型转变通用型红细胞

重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种稳定性研究

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中国输血杂志 2011年第3期24卷 197-200页

作者：高红伟李素波金泗虎王玲燕王颖丽张丽郁成雨季守平宫锋军事医学科学院野战输血研究所北京100850

目的探讨重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种的遗传稳定性。方法在有选择压力(AMP+)条件下,将重组a-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌株在LB固体培养基上采用划线法连续传60代,每隔20代取样保存菌种,最后同时进行菌体形态、生长速度和抗生素抗... 详细信息

目的探讨重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种的遗传稳定性。方法在有选择压力(AMP+)条件下,将重组a-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌株在LB固体培养基上采用划线法连续传60代,每隔20代取样保存菌种,最后同时进行菌体形态、生长速度和抗生素抗性、质粒稳定性、限制酶切图谱、测序、表达量和酶活力及Westernblotting检测。结果第0、20、40、60代菌的菌体形态、生长速度和抗生素抗性等与原代菌株无明显差异;LB固体培养基上传60代后质粒稳定性接近100%;DNA测序未见α-N-乙酰半乳糖胺酶基因变异;SDS-PAGE图谱显示,α-NAGA表达水平无明显差别。Western blotting检测显示重组α-NAGA能与抗His的单抗特异结合。结论α-N-乙酰半乳糖胺酶重组质粒pET22b-α-NAGA在工程菌株中具有良好的遗传稳定性。

关键词： α-N-乙酰半乳糖胺酶重组工程菌菌种遗传稳定性传代

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国家科技计划体系现状分析

中华医学科研管理杂志 2010年第2期23卷 78-80,F0003页

作者：张玉华唐颖郁成雨薛荃郑晋普周虹军事医学科学院野战输血研究所北京100850 军事医学科学院科技部

国家科技计划体系是随着国民经济和社会发展而不断调整完善的，“十一五”国家科技计划体系在“十五”国家科技计划体系的基础上形成，本文重点介绍了“十一五”国家科技计划体系的总体布局，并分析其特点，提出了一些思考和建议。

关键词： “十一五” 国家科技计划体系

自制酸奶乳脂中c9,t11-共轭亚油酸对小鼠免疫调节作用的影响

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食品科学 2010年第5期31卷 288-292页

作者：王璇琳檀英霞郁成雨李素波贺敏李伟静陈炳卿于群北京军事医学科学院野战输血研究所北京100850 哈尔滨医科大学公共卫生学院黑龙江哈尔滨150086

应用乳酸菌发酵法,添加适当底物和营养物质,实验室自制含共轭亚油酸(CLA)的酸奶,经过提取乳脂、气相色谱检测并对CLA定量后,确定给予小鼠受试物剂量组,进行共轭亚油酸酸奶的免疫调节功能实验。结果表明:灌胃给予小鼠含0.05g/(kgbw·d)c9... 详细信息

应用乳酸菌发酵法,添加适当底物和营养物质,实验室自制含共轭亚油酸(CLA)的酸奶,经过提取乳脂、气相色谱检测并对CLA定量后,确定给予小鼠受试物剂量组,进行共轭亚油酸酸奶的免疫调节功能实验。结果表明:灌胃给予小鼠含0.05g/(kgbw·d)c9,t11-CLA的乳脂,30d后可增强小鼠的免疫调节功能,说明酸奶中的c9,t11-CLA能够显著增加小鼠免疫调节能力。

关键词：乳酸菌发酵共轭亚油酸乳脂免疫调节