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表达猪肺炎支原体免疫原性基因的重组猪霍乱沙门氏菌对小鼠的免疫原性

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微生物学报 2011年第9期51卷 1270-1277页

作者：马丰英邹浩勇何启盖农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院武汉430070

【目的】构建表达猪肺炎支原体免疫原性基因的重组猪霍乱沙门氏菌,对重组菌株的生物学特性以及对小鼠的免疫原性进行研究。【方法】分别将猪肺炎支原体的免疫原性基因p36、p46、p65和p97R1-Nrdf克隆到pYA3493,得到重组质粒pYA-36、pYA-4... 详细信息

【目的】构建表达猪肺炎支原体免疫原性基因的重组猪霍乱沙门氏菌,对重组菌株的生物学特性以及对小鼠的免疫原性进行研究。【方法】分别将猪肺炎支原体的免疫原性基因p36、p46、p65和p97R1-Nrdf克隆到pYA3493,得到重组质粒pYA-36、pYA-46、pYA-65和pYA-97R1-Nrdf。重组质粒和空质粒pYA3493分别电转asd基因缺失株C500ˉ,获得重组菌株C36(pYA-36)、C46(pYA-46)、C65(pYA-65)、C97R1-Nrdf(pYA-97R1-Nrdf)和空质粒菌株CpYA(pYA3493)。研究重组菌株的生物学特性,并以小鼠为动物模型评价重组菌株在口服、肌注两种不同免疫途径下的免疫原性。【结果】成功构建表达猪肺炎支原体免疫原性基因的重组猪霍乱沙门氏菌,重组菌株能表达外源蛋白,生化和生长特性未发生改变,插入的外源基因亦稳定存在。小鼠的免疫原性结果显示:口服C36+C46+C65+C97R1-Nrdf组的猪肺炎支原体抗体极显著高于口服C36+C46+C65组和肌注商品疫苗组(P0.05);IFN-γ为肌注C36+C46+C65组显著高于肌注商品疫苗组(P0.05);IL-4水平为口服C36+C46+C65组>口服C36+C46+C65+C97R1-Nrdf组>肌注商品疫苗组>肌注C36+C46+C65组,但各组之间差异均不显著(P>0.05)。对照组的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ以及IL-4均与试验组差异极显著(P<0.01)。【结论】构建的表达猪肺炎支原体免疫原性基因的重组猪霍乱沙门氏菌,采用肌注免疫时具有较好的免疫原性,有望发展为猪肺炎支原体的基因工程疫苗。

关键词：猪肺炎支原体重组猪霍乱沙门氏菌免疫原性抗体 IFN-γ IL-4

三种猪支原体肺炎疫苗在规模化猪场中的临床应用对比试验

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黑龙江畜牧兽医 2018年第18期 188-191页

作者：朱蓓蓓邹浩勇恩施职业技术学院湖北恩施445000 武汉生物制品研究所有限责任公司武汉430070

猪肺炎支原体在猪场中的高感染率和普遍流行,引起猪只生长速率减慢和饲料报酬下降而造成的直接损失[1],以及感染后诱发的一系列继发混合感染而产生的死淘率升高所造成的间接损失[2],严重损害了生猪养殖的经济效益。有研究结果表明,猪肺... 详细信息

猪肺炎支原体在猪场中的高感染率和普遍流行,引起猪只生长速率减慢和饲料报酬下降而造成的直接损失[1],以及感染后诱发的一系列继发混合感染而产生的死淘率升高所造成的间接损失[2],严重损害了生猪养殖的经济效益。有研究结果表明,猪肺炎支原体主要是通过入侵机体呼吸道黏膜而产生致病作用的。

关键词：规模化猪场猪支原体肺炎对比试验临床应用猪肺炎支原体疫苗直接损失饲料报酬

五种抗生素对猪肺炎支原体的最小抑菌浓度试验

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黑龙江畜牧兽医 2017年第2期 210-213,297页

作者：朱蓓蓓邹浩勇向大育恩施职业技术学院湖北恩施445000 武汉生物制品研究所有限责任公司武汉430207

猪支原体肺炎（mycoplasmalpneumoniaofswine，MPS）又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）引起的一种高发病率、低死亡率的慢性呼吸道传染病。猪肺炎支原体和其他肺部病原体（如猪繁殖与呼吸综合征病毒、多... 详细信息

猪支原体肺炎（mycoplasmalpneumoniaofswine，MPS）又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp）引起的一种高发病率、低死亡率的慢性呼吸道传染病。猪肺炎支原体和其他肺部病原体（如猪繁殖与呼吸综合征病毒、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪流感病毒、猪圆环病毒2型等）共存的情况下，产生猪呼吸综合征，

关键词：猪肺炎支原体最小抑菌浓度猪繁殖与呼吸综合征病毒抗生素慢性呼吸道传染病胸膜肺炎放线杆菌多杀性巴氏杆菌猪圆环病毒2型

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猪支原体肺炎亚单位疫苗的免疫应答

中国兽医学报 2012年第4期32卷 529-533页

作者：马丰英姚睿玉邹浩勇刘新军何启盖华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐... 详细信息

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐剂为空白对照组来免疫BALB/c小鼠。检测小鼠血清、肺脏以及经蛋白刺激脾淋巴细胞的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4。结果显示,Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体水平极显著高于Ⅰ、Ⅲ组(PⅠ组>Ⅲ组>对照组;而经刺激脾淋巴细胞检测结果为Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体和IFN-γ水平最高,而IL-4水平为Ⅲ组最高。由此可见,Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫途径,产生的猪支原体肺炎抗体水平最高;Ⅰ组亦能通过这2种免疫途径达到与Ⅲ组同样的免疫效果。

关键词：猪支原体肺炎亚单位疫苗免疫效果抗体 IFN-γ IL-4

人免疫球蛋白类制品中IgA残留量ELISA检测方法的验证及应用

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中国生物制品学杂志 2020年第6期33卷 695-698页

作者：邹浩勇喻剑虹龚钦彭焱国药集团武汉血液制品有限责任公司湖北武汉430207

目的验证人免疫球蛋白类制品中IgA残留量的ELISA检测方法,并进行应用。方法用IgA国际标准品建立与ELISA检测试剂盒相匹配的标准曲线,并验证方法的准确性、专属性、精密度及线性范围。分别采用ELISA法、紫外法和免疫比浊法检测4批静注人... 详细信息

目的验证人免疫球蛋白类制品中IgA残留量的ELISA检测方法,并进行应用。方法用IgA国际标准品建立与ELISA检测试剂盒相匹配的标准曲线,并验证方法的准确性、专属性、精密度及线性范围。分别采用ELISA法、紫外法和免疫比浊法检测4批静注人免疫球蛋白(pH 4)成品。同时用经验证的ELISA法检测35批静注人免疫球蛋白(pH 4)成品中的IgA含量。结果加入0.5、1、2 IU/L标准品的样品平均回收率分别为90.33%、94.43%、93.37%,CV分别为4.5%、1.8%、3.1%;标准品加入100、50、25 mg/L麦芽糖的回收率分别为99.44%、99.38%、99.67%,CV分别为0.16%、0.13%、0.11%;两个时间点6次重复测定结果的CV均0.05);IgA浓度在0.5~8 IU/L范围内与A450呈良好的线性关系,回归方程为y=0.0887 x^2-0.1115 x+0.188,R^2=0.9999。与紫外法和免疫比浊法比较,ELISA法检测结果偏低,紫外法最高,3种方法间差异有统计学意义(P<0.05)。35批静注人免疫球蛋白(pH 4)成品中IgA含量均值为(22.4±2.24)IU/mL,CV<10%。结论ELISA检测方法具有良好的准确性、专属性及精密度,且快速、灵敏,操作简便,可用于人免疫球蛋白类制品中IgA含量的质量监测。

关键词：酶联免疫法 IgA 残留量人免疫球蛋白

胸膜肺炎放线杆菌血清10型apxIC^-／P36^＋弱毒株的构建与鉴定

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微生物学报 2009年第9期49卷 1209-1216页

作者：邹浩勇陈杨刘新军何启盖陈品周锐马丰英汪洋华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

【目的】构建血清10型胸膜肺炎放线杆菌弱毒菌株,为胸膜肺炎放线杆菌减毒活疫苗研究奠定基础。【方法】通过细菌接合转移和SacB负向筛选标记完成突变株的构建与筛选,用PCR、Western blot、重组位点序列对突变株进行鉴定分析。首先构建... 详细信息

【目的】构建血清10型胸膜肺炎放线杆菌弱毒菌株,为胸膜肺炎放线杆菌减毒活疫苗研究奠定基础。【方法】通过细菌接合转移和SacB负向筛选标记完成突变株的构建与筛选,用PCR、Western blot、重组位点序列对突变株进行鉴定分析。首先构建含肺炎支原体P36基因的pEICALDH重组转移质粒,并转化供体大肠杆菌(***7213),将转化的阳性克隆子与野生型APP血清10型亲本菌混合培养6h;然后涂至含氯霉素抗性和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的TSA培养基培养,挑取阳性克隆,接种至无抗性的含NAD的TSB液体培养基,培养6～8h后涂至含10%的蔗糖及NAD的TSA培养基,培养24h后挑取蔗糖抗性的克隆,即得到目的突变株。【结果】小鼠毒力试验结果表明突变株比亲本株的毒力显著降低;生长特性分析结果显示突变株与亲本株的增殖能力无显著差异;同时免疫试验结果表明突变株与安全剂量的亲本株均可诱导小鼠产生较好的免疫反应,证明apxIC基因缺失并不影响APP的免疫活性。【结论】成功构建了含猪肺炎支原体P36基因的胸膜肺炎放线杆菌血清10型突变株,所获得的突变株有望成为猪传染性胸膜肺炎弱毒疫苗株。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌 apxIC基因猪肺炎支原体 P36基因接合转移负向筛选

不同种类预过滤膜对纳米膜（DV20 nm）过滤人免疫球蛋白效果的影响

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中国生物制品学杂志 2019年第12期32卷 1418-1420,1424页

作者：彭焱李陶敬邹浩勇陈克金胡勇国药集团武汉血液制品有限公司科研开发部

目的比较不同种类预过滤膜对纳米膜(DV20 nm)过滤人免疫球蛋白效果的影响。方法以A、B、C厂家生产的纳米膜(DV20 nm)和不同预过滤膜对1 000 mL 5. 3%IgG样品进行膜通量筛选实验,比较蛋白回收率及通量;应用筛选的预过滤膜和纳米膜对样品... 详细信息

目的比较不同种类预过滤膜对纳米膜(DV20 nm)过滤人免疫球蛋白效果的影响。方法以A、B、C厂家生产的纳米膜(DV20 nm)和不同预过滤膜对1 000 mL 5. 3%IgG样品进行膜通量筛选实验,比较蛋白回收率及通量;应用筛选的预过滤膜和纳米膜对样品中滴度为6. 50 LgTCID50/0.1 mL猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)进行去除病毒验证。结果选取A厂Minisart预过滤膜,120 min通量为7. 68 L/(m^2·h),蛋白回收率为96. 1%;B厂FTKDJL预过滤膜,120、300及400 min通量分别为9.87、3. 93和1. 85 L/(m^2·h),蛋白回收率为97. 6%。A及B厂的纳米膜过滤约1 200 min,通量分别为2. 39和3. 74 L/(m^2·h),指示病毒PPV下降滴度分别为≥4. 63和≥4.25 LgTCID50/0. 1 mL,均能在有效过滤量之内完全去除PPV,蛋白回收率均在96%以上。结论不同预过滤膜对纳米膜过滤通量有明显影响,筛选的预过滤膜及纳米膜均可有效去除PPV,可用于人免疫球蛋白规模化生产工艺。

关键词：预过滤膜纳米膜人免疫球蛋白猪细小病毒通量

猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立

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华中农业大学学报 2008年第1期27卷 12-18页

作者：刘辉熊金凤邹浩勇陈杨杨维红何启盖华中农业大学农业微生物学国家重点实验室/预防兽医学湖北省重点实验室武汉430070

根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp4、30 bp和1 015 bp目的片段。以纯培养病毒抽... 详细信息

根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp4、30 bp和1 015 bp目的片段。以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR。CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性。以-βactin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%。同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒。结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测。

关键词：多重RT-PCR 猪瘟病毒猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒乙型脑炎病毒

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猪喘气病的危害与防控措施

兽医导刊 2009年第12期 16-17,24页

作者：马丰英邹浩勇何启盖农业微生物学国家重点实验室华中农业大学动物医学院湖北武汉430070

猪支原体肺炎又称猪喘气病、猪地方流行性肺炎，是一种常被低估的、顽固性、慢性传染病，被认为是最常发生、最广流行、最难净化的原发性疾病。我国该病的发病率在50％左右，而规模化猪场约有90％感染猪肺炎支原体，因而造成重大的经济... 详细信息

猪支原体肺炎又称猪喘气病、猪地方流行性肺炎，是一种常被低估的、顽固性、慢性传染病，被认为是最常发生、最广流行、最难净化的原发性疾病。我国该病的发病率在50％左右，而规模化猪场约有90％感染猪肺炎支原体，因而造成重大的经济损失，严重危害着养猪业的发展。因此，正确认识猪芰原体肺炎的危害，并且采取有效的防控措施，是提高养猪业经济效益的关键措施之一。

关键词：猪喘气病防控措施危害猪支原体肺炎地方流行性肺炎猪肺炎支原体慢性传染病规模化猪场