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作者：邹治情江苏大学

学位级别：硕士

研究背景:在世界范围内,金黄色葡萄球菌是引起重症肺炎和菌血症等医院内侵袭性感染的重要病原体,同时也是社区获得性感染的主要病原体之一。随着临床治疗中抗生素越来越频繁的使用,出现了大量具有多重耐药性的“超级病菌”,即耐甲氧西... 详细信息

研究背景:在世界范围内,金黄色葡萄球菌是引起重症肺炎和菌血症等医院内侵袭性感染的重要病原体,同时也是社区获得性感染的主要病原体之一。随着临床治疗中抗生素越来越频繁的使用,出现了大量具有多重耐药性的“超级病菌”,即耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)。MRSA在临床患者中的大量出现直接导致其治疗更为困难。近年来的研究发现,携带杀伤白细胞素(pvl)基因的MRSA菌毒力更强危害更广,可以造成严重的社区内感染,并严重危及感染者生命,由其引起的坏死性肺炎的死亡率可达75%。目前临床对于携带pvl基因的MRSA菌尚无快速鉴定方法,非常不利于感染者的及时诊断和治疗,因此建立相关快速检测技术极具临床价值。目前对于携带pvl基因的MRSA菌的致病机制仍不明晰,通过其致病机制的研究可以为临床治疗提供新的思路。研究目的:1.建立携带pvl基因的MRSA菌的快速检测技术;2.研究携带pvl基因的MRSA菌诱导巨噬细胞(THP-1细胞)自噬、凋亡和焦亡机制;3.研究携带pvl基因的MRSA菌诱导上皮细胞(A549细胞)的自噬、凋亡和坏死机制。研究方法:1.建立改良碱裂解法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,采用PCR方法检测spa、mecA、femB、pvl基因,并使用LAMP技术检测spa、mecA基因,建立MRSA菌快速检测技术。2.通过大肠杆菌内原核表达技术制备重组杀白细胞素rPVL-S蛋白,免疫新西兰兔制备抗血清,以此抗血清采用Western blotting法检测金黄色葡萄球菌PVL蛋白表达,建立金黄色葡萄球菌PVL蛋白的快速检测技术。3.采用PCR法和Western blotting法检测金黄色葡萄球菌spa、mecA、pvl基因表达,筛选出1株表达PVL的MRSA菌株(MRSA菌株)和一株不表达PVL的MRSA菌株(MRSA菌株)用于后续实验研究。4.分别以MRSA菌株和MRSA菌株与THP-1细胞共培养1 h、3 h、6 h,中止实验后提取细胞总RNA通过RT-PCR法检测自噬相关基因(atg3、atg4B、atg5、atg7、atg12和atg16L1),各种细胞因子(IL-4、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-α和TGF-β)、炎症复合体(NLRP3、Caspase-1和IL-1β)和Toll样受体(TLR-2和TLR-4)的表达量差异;提取细胞总蛋白通过Western blotting法检测自噬相关蛋白Beclin-1和LC-3的表达,PI3K、Akt和mTOR的磷酸化水平,凋亡相关蛋白Caspase-3活化程度,焦亡相关蛋白GSDMD、NLRP3和Caspase-1的表达。5.通过转染NLRP3-siRNA抑制THP-1细胞NLRP3表达,分别以MRSA菌株和MRSA菌株与THP-1细胞共培养1 h、3 h、6 h,提取各时间点细胞总蛋白,通过Western blotting法检测自噬相关蛋白Beclin-1和LC-3B表达量,凋亡相关蛋白Caspase-3活化程度,核因子NF-κB p65蛋白,焦亡相关蛋白GSDMD、NLRP3和Caspase-1表达量。***菌株和MRSA菌株分别与THP-1细胞共培养1 h、3 h、6 h,采用DCFH-DA荧光探针法检测各时间点细胞内活性氧(ROS)表达量,采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率。7.分别使用MRSA菌株和MRSA菌株与A549细胞共培养1 h、3 h、6 h,提取细胞蛋白通过Western blotting法检测自噬相关蛋白Beclin-1和LC-3B表达量,凋亡相关蛋白Caspase-3活化程度。***菌株和MRSA菌株与A549细胞共培养1 h、3 h、6 h,采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)表达量;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率。研究结果:1.分别建立基于PCR法和LAMP法检测金黄色葡萄球菌spa基因和mecA基因的MRSA菌快速检测技术。2.分别建立基于PCR法和Western blotting法的金黄色葡萄球菌PVL快速检测技术。3.经PCR法和Western blotting法筛选鉴定出1株不表达PVL的MRSA菌(MRSA株)和1株表达PVL的MRSA菌(MRSA株),用于后续研究。***株和MRSA株均可以诱导THP-1细胞和A549细胞内产生大量活性氧(ROS),并且随着感染时间的延长,THP-1细胞和A549细胞内ROS积累持续增多,6 h时ROS表达量最高。MRSA株诱导THP-1细胞和A549细胞产生ROS量显著高于MRSA株(P<0.05)。***株和MRS

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素自噬凋亡焦亡

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慢性腹泻患者艰难梭菌、人芽囊原虫和隐孢子虫感染的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第6期37卷 723-726页

作者：周亚玲吴亮阴晴吴瑶何蕾邹治情戴晓玥夏雯江苏大学附属医院检验科镇江212001 江苏大学医学院镇江212013

收集江苏大学附属医院2018年收治的慢性腹泻患者粪样,涂片镜检并提取粪样DNA,采用多重PCR技术检测粪样中艰难梭菌16S rDNA基因、毒素A(tcdA)基因、毒素B(tcdB)基因和二元毒素(cdtA和cdtB)基因;常规PCR检测人芽囊原虫SSU rRNA基因;巢式PC... 详细信息

收集江苏大学附属医院2018年收治的慢性腹泻患者粪样,涂片镜检并提取粪样DNA,采用多重PCR技术检测粪样中艰难梭菌16S rDNA基因、毒素A(tcdA)基因、毒素B(tcdB)基因和二元毒素(cdtA和cdtB)基因;常规PCR检测人芽囊原虫SSU rRNA基因;巢式PCR检测隐孢子虫SSU rRNA基因。96份慢性腹泻患者粪样中,检出艰难梭菌16S rDNA基因64份,阳性率为66.7%;艰难梭菌阳性粪样中,tcdA基因24例,tcdB基因18例,未检出单独携带tcdB基因粪样,产毒株携带率为37.5%,所有粪样中均未检出cdtA基因和cdtB基因;镜检结果显示,人芽囊原虫粪样16份,检出率为16.7%;PCR结果显示,21份粪样扩增出人芽囊原虫SSU rRNA基因,检出率为21.9%,镜检阳性粪样PCR检测也为阳性;未检测到艰难梭菌和人芽囊原虫混合感染;未检出隐孢子虫SSU rRNA基因。江苏大学附属医院慢性腹泻患者中主要检出的病原体为艰难梭菌和人芽囊原虫。

关键词：慢性腹泻艰难梭菌人芽囊原虫隐孢子虫

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社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体毒素促进THP-1细胞自噬并激活NLRP3炎性体

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第12期36卷 1076-1082页

作者：夏雯戴晓玥吴亮易承学邹治情丁龙坤席月许化溪江苏大学医学院检验系江苏镇江212013 镇江市高等专科学校医药技术学院医学检验系江苏镇江212028

目的研究社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体(Mp)毒素诱导THP-1细胞自噬以及活化含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)炎性体的能力和机制。方法采用原核表达技术获得重组CARDS(rCARDS)Mp毒素,5μg/mL和10μg/m... 详细信息

目的研究社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS)肺炎支原体(Mp)毒素诱导THP-1细胞自噬以及活化含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)炎性体的能力和机制。方法采用原核表达技术获得重组CARDS(rCARDS)Mp毒素,5μg/mL和10μg/mL rCARDS Mp毒素作用THP-1细胞20 min、40 min、1 h、2 h和3 h。Western blot法检测THP-1细胞自噬相关蛋白beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和P62表达水平,实时定量PCR检测THP-1细胞NLRP3、胱天蛋白酶1(caspase-1)和白细胞介素1β(IL-1β)的mRNA水平,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯染色检测THP-1细胞活性氧(ROS)水平。结果与正常细胞对照组相比,rCARDS毒素作用1 h内,THP-1细胞beclin-1、LC3和P62表达量随着作用时间延长明显增加;rCARDS毒素作用2 h和3 h时,beclin-1、LC3和P62表达量降低。rCARDS Mp毒素作用THP-1细胞20 min和40 min时,5μg/mL、10μg/mL rCARDS Mp毒素组细胞NLRP3表达量无显著差别,但在各时间点,rCARDS Mp毒素处理的THP-1细胞NLRP3 mRNA水平均显著高于正常对照组,且作用1 h和2 h时,10μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平显著高于5μg/mL组,而3 h时5μg/mL组和10μg/mL组细胞NLRP3 mRNA水平均低于2 h时。rCARDS Mp毒素作用40 min、1 h和2 h时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞caspase-1 mRNA水平均高于正常细胞对照组,作用40 min、1 h、2 h和3 h时,10μg/mL组细胞caspase-1 mRNA水平均显著高于5μg/mL组。与正常细胞对照组相比,rCARDS Mp毒素作用20 min和40 min时,不同剂量rCARDS Mp毒素组细胞IL-1βmRNA水平变化不明显,rCARDS Mp毒素作用1 h^3 h时,各组细胞IL-1βmRNA和ROS水平显著增加并呈剂量依赖性。结论CARDS肺炎支原体毒素可以激活THP-1细胞NLRP3炎性体活化并诱导细胞自噬。

关键词：肺炎支原体毒素社区获得性呼吸窘迫综合征(CARDS) 自噬含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族3(NLRP3)

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某院ICU医院获得性肺炎患者痰分离MRSA耐药基因和pvl基因携带情况

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中国感染控制杂志 2019年第6期18卷 525-530页

作者：夏雯吴亮阴晴戴晓玥邹治情吴瑶周亚玲何蕾江苏大学医学院江苏镇江212013 江苏大学附属医院检验科江苏镇江212000

目的了解医院获得性肺炎患者痰中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因和毒力因子pvl基因携带情况。方法对来源于某院重症监护病房(ICU)医院获得性肺炎患者痰中的46株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)检测细菌耐药基因(mecA、aacA-D、tetK... 详细信息

目的了解医院获得性肺炎患者痰中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因和毒力因子pvl基因携带情况。方法对来源于某院重症监护病房(ICU)医院获得性肺炎患者痰中的46株MRSA,采用聚合酶链反应(PCR)检测细菌耐药基因(mecA、aacA-D、tetK、tet M、msrA、msrB、ermA、ermC、vatA、vatB、vatC、femB和linA)和毒力因子pvl基因,并以PCR法分析MRSA菌株SCCmec型别。结果 46株MRSA中,耐药基因mecA、aacA-D、tetK、msrA、ermA、ermC、femB和linA的检出率分别为100%、54.35%、36.96%、13.04%、36.96%、52.17%、71.74%和10.87%,所有菌株均未检出tet M、msrB、vatA、vatB和vatC基因;毒力基因pvl携带率为65.22%。46株MRSA共检出4种SCCmec基因型,其中SCCmecⅡ型、Ⅲ型、IVc型、V型分别为26.09%、52.17%、2.17%和2.17%。结论医院获得性肺炎患者痰中MRSA携带多种耐药基因,且毒力基因pvl携带率较高,SCCmec基因型以Ⅲ型为主,临床医务人员对此情况应高度重视。

关键词：金黄色葡萄球菌耐药基因医院获得性肺炎 pvl基因 SCCmec分型

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自制多抗检测金黄色葡萄球菌PVL蛋白的研究

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临床医学进展 2022年第4期12卷 2463-2468页

作者：陈述邹治情张海丁龙坤席月闫曼孙畅吴亮江苏大学附属医院普外科江苏镇江上海市嘉定区安亭医院上海江苏大学医学院医学检验系江苏镇江江苏大学医学院医学检验系江苏镇江

目的:携带杀伤白细胞素(pvl)基因的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌毒力强,可以诱发高致死率的社区获得性肺炎,但目前仍缺少快速简便的检测方法。本研究拟制备抗PVL多克隆抗体用于其快速检测。方法:本研究通过将金黄色葡萄球菌PVL蛋白S亚基... 详细信息

目的:携带杀伤白细胞素(pvl)基因的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌毒力强,可以诱发高致死率的社区获得性肺炎,但目前仍缺少快速简便的检测方法。本研究拟制备抗PVL多克隆抗体用于其快速检测。方法:本研究通过将金黄色葡萄球菌PVL蛋白S亚基的重组质粒LukS-PV/pET28a导入大肠杆菌诱导表达重组蛋白,再经免疫新西兰兔制备抗血清,以Western blotting法检测金黄色葡萄球菌PVL蛋白表达。结果:成功纯化出重组LukS-PV蛋白,并制备抗LukS-PV抗血清。通过Western blotting法采用自制多克隆抗体成功检测出金黄色葡萄球菌PVL表达。结论:自制抗PVL多克隆抗体可以检测金黄色葡萄球菌PVL表达,为下一步试剂盒制备奠定技术基础。

关键词：金黄色葡萄球菌杀白细胞素多克隆抗体检测

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表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1单核细胞自噬和凋亡

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第5期37卷 406-414页

作者：陆娟邹治情夏雯戴晓玥席月丁龙坤张敏吴亮阴晴许化溪江南大学附属医院检验科江苏无锡214062 江苏大学医学院检验系江苏镇江212013 江苏大学附属医院检验科江苏镇江212001

目的研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制。方法在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清。采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄... 详细信息

目的研究表达Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)的金黄色葡萄球菌诱导人THP-1细胞自噬和凋亡机制。方法在大肠杆菌中表达重组杀白细胞素(rPVL),并免疫家兔制备多克隆抗血清。采用反转录PCR和Western blot法鉴定表达PVL的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。分别使用表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL+))和不表达PVL的MRSA(MRSA^(PVL-))感染THP-1细胞,于感染后1、3、6 h收集细胞,采用实时定量PCR检测自噬相关基因3(ATG3)、ATG4B、ATG5、ATG7、ATG12;Western blot法检测beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、caspase-3的蛋白水平;二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针负载法检测细胞活性氧(ROS)水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功制备PVL多克隆抗体,鉴定出1株MRSA^(PVL-)菌和1株MRSA^(PVL+)菌。分别以两株菌与THP-1细胞共培养1 h,MRSA^(PVL+)组仅ATG7表达量显著高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组;共培养3 h,MRSA^(PVL+)组ATG7和ATG12表达量高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,其他基因表达量变化不明显。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于MRSA^(PVL-)感染组和正常对照组;感染1 h和3 h,MRSA^(PVL-)感染组细胞PI3K、AKT和mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组;感染6 h,MRSA^(PVL-)菌感染组细胞mTOR磷酸化水平显著低于正常对照组。感染1、3、6 h,MRSA^(PVL+)组细胞ROS水平和凋亡率均高于MRSA^(PVL-)组和正常对照组,且随着感染时间的延长细胞ROS水平和凋亡率持续增加;MRSA^(PVL-)组细胞ROS水平和凋亡率也高于正常对照组。结论MRSA^(PVL+)对THP-1细胞PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制作用更强,可促进ATG12/ATG7/ATG5自噬通路活化增加THP-1细胞自噬;同时,MRSA^(PVL+)诱导THP-1细胞ROS产生增加,促进细胞凋亡。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) Panton-Valentine杀白细胞素(PVL) 巨噬细胞自噬凋亡

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镇江地区人乳头状瘤病毒16型E6基因变异分析

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临床医学进展 2018年第10期8卷 935-943页

作者：吴瑶吴亮阴晴周亚玲邹治情戴晓玥姜旭淦陈盛霞江苏大学附属医院检验科江苏镇江江苏大学医学院江苏镇江

目的:研究镇江地区人乳头瘤病毒16型(HPV-16) E6基因变异情况,为HPV防治提供流行病学数据。方法:采用HPV分型检测试剂盒筛选我院女性患者宫颈脱落细胞样本中HPV-16型病毒阳性标本,并利用E6基因特异性引物扩增HPV-16型病毒阳性标本中病... 详细信息

目的:研究镇江地区人乳头瘤病毒16型(HPV-16) E6基因变异情况,为HPV防治提供流行病学数据。方法:采用HPV分型检测试剂盒筛选我院女性患者宫颈脱落细胞样本中HPV-16型病毒阳性标本,并利用E6基因特异性引物扩增HPV-16型病毒阳性标本中病毒E6基因全长。PCR产物经测序后,采用BLAST比对分析基因突变位点,并使用软件MEGA 5.0以邻接法(Neighbor Joining, NJ)进行进化树分析。结果:从650例样本检出35例HPV-16型病毒阳性,感染率为27.3%。在35例HPV-16型病毒样本中,20例样本的E6基因在220位核苷酸发生碱基错义突变,突变频率为57%;14例样本的E6基因在178位核苷酸发生碱基错义突变,突变频率为40%;另有8例样本的E6基因在702位核苷酸发生碱基同义突变,突变频率为23%。进化树分析结果表明,镇江地区流行株主要为亚洲变异型,没有发现非洲1型,非洲2型,亚洲美洲及北美洲变异型。结论:镇江地区HPV-16型病毒的E6基因普遍存在突变,该突变可能导致感染者癌变概率的增加,同时分析本地区HPV病毒突变热点区域和保守区域也可以为研究针对中国人群的宫颈癌疫苗的研制提供线索。

关键词： HPV-16 E6基因基因变异

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4种方法提取金黄色葡萄球菌基因DNA效果的比较

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生物医学 2019年第4期9卷 154-161页

作者：邹治情张敏戴晓玥夏雯周亚玲何蕾白佳玉苏叶 Dinesh KumarKesavan 吴亮阴晴许化溪江苏大学医学院江苏镇江江苏大学附属医院江苏镇江

目的:比较4种方法,包括煮沸法、改良碱裂解法、磁珠法和吸附柱法提取金黄色葡萄球菌基因DNA效果,为临床金黄色葡萄球菌感染的快速检测提供技术支撑。方法:选取20株临床分离耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,分别使用煮沸法、改良碱裂解法、... 详细信息

目的:比较4种方法,包括煮沸法、改良碱裂解法、磁珠法和吸附柱法提取金黄色葡萄球菌基因DNA效果,为临床金黄色葡萄球菌感染的快速检测提供技术支撑。方法:选取20株临床分离耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,分别使用煮沸法、改良碱裂解法、磁珠法和吸附柱法提取基因DNA。通过PCR法扩增所提取DNA模板中金黄色葡萄球菌spa基因、mecA基因和femB基因,以评估4种方法提取效果。结果:磁珠法制备的模板中,PCR法可以扩增出所有标本的spa基因、mecA基因和femB基因;吸附柱法制备的模板中,所有标本均可扩增出spa基因和mecA基因,而仅19个标本扩增出femB基因;以改良手工碱裂解法制备的模板,所有标本均可扩增出mecA基因,19标本可以扩增出spa基因和femB基因;煮沸法制备的模板中,PCR法可以分别扩增出7个标本的spa基因,8个标本的mecA基因,所有标本均未扩增出femB基因。结论:改良碱裂解法、吸附柱法和磁珠法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA均可以用于PCR扩增,直接煮沸法提取效果较差,不适合用于临床金黄色葡萄球菌基因组DNA提取;磁珠法用时最短,更适合于大量快速自动化提取。

关键词：金黄色葡萄球菌 DNA提取 PCR检测

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改良碱裂解法和煮沸法提取金黄色葡萄球菌DNA效果的比较

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江苏大学学报（医学版） 2018年第3期28卷 267-270页

作者：邹治情王俊玲陈思谢雨 Dinsh Kumar K 吴亮姜旭淦阴晴陈盛霞许化溪江苏大学医学院江苏镇江212013 江苏大学附属医院检验科江苏镇江212001

目的:建立一种简便经济的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法。方法:选取10株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,预先以终浓度2 mg/mL溶菌酶处理6 h,再以改良碱裂解法提取细菌基因组DNA。同时以常规煮沸法制备上述细菌基因组DNA。采用PCR法扩增... 详细信息

目的:建立一种简便经济的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法。方法:选取10株耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌,预先以终浓度2 mg/mL溶菌酶处理6 h,再以改良碱裂解法提取细菌基因组DNA。同时以常规煮沸法制备上述细菌基因组DNA。采用PCR法扩增两种模板中金黄色葡萄球菌spa基因、mecA基因和femB基因,比较两种方法提取DNA的效果。结果:以改良碱裂解法制备DNA为模板,所有10株标本均可扩增出spa基因和mecA基因,4个标本扩增出femB基因;以直接煮沸法制备DNA为模板,仅1个标本扩增出spa基因,2个标本扩增出mecA基因,所有标本未扩增出femB基因。结论:改良碱裂解法提取基因组DNA效果优于直接煮沸法,所提取基因组DNA可以满足PCR扩增的要求。

关键词：金黄色葡萄球菌 PCR检测标本处理 DNA提取

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肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析

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临床检验杂志 2020年第1期38卷 60-65页

作者：戴晓玥吴亮阴晴夏雯邹治情周亚玲何蕾 Dinsh Kumar K 许化溪江苏大学医学院江苏大学附属医院检验科

目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。... 详细信息

目的:分析呼吸内科肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌携带β-内酰胺酶基因及主动外排泵基因情况。方法:收集经生化鉴定为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的菌株160株,将鲍曼不动杆菌特异性片段(Ab-ITS)的二重PCR法确认为鲍曼不动杆菌者纳入研究。用PCR法检测鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因和主动外排泵基因,包括A类β-内酰胺酶(blaTEM、blaPER和blaCARB)、B类β-内酰胺酶(blaIMP和blaVIM)、C类β-内酰胺酶(blaADC和blaDHA)、D类β-内酰胺酶(blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51和blaOXA-58)和主动外排泵相关基因(adeB、adeJ、macB、emrB、emrA、abeS、abeM和craA)。以微量肉汤稀释法检测加入外排泵抑制剂羰基氰化氯苯腙(CCCP)前后,携带adeB基因鲍曼不动杆菌对亚胺培南的最低抑菌浓度(MIC)的变化。结果:临床分离160株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体中鲍曼不动杆菌143株(占90%),包括亚胺培南耐药株119株(占83.2%)和敏感株24株(占16.8%)。所有鲍曼不动杆菌均检出blaOXA-51基因,其中,亚胺培南耐药株中检出blaOXA-23(98.3%)、blaTEM(41.4%)、blaADC(98.3%)和blaDHA(0.7%),blaPER、blaCARB、blaIMP、blaVIM、blaOXA-24和blaOXA-58均未检出;敏感株中未检出blaOXA-23。adeJ、macB、abeM和craA基因在143株鲍曼不动杆菌中的携带率均为100%;emrB、emrA和abeS基因携带率均超过80%。adeB基因在亚胺培南耐药株中检出117株(98.3%)。在CCCP干预试验中,携带adeB基因的鲍曼不动杆菌MIC50降低1/2。结论:呼吸内科鲍曼不动杆菌主要携带blaOXA-23和adeB主动外排泵基因,可能与亚胺培南耐药密切相关。

关键词：鲍曼不动杆菌耐药 blaOXA-23 adeB

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