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猪流行性腹泻病毒nsp5宿主细胞互作蛋白的筛选与鉴定

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猪流行性腹泻病毒nsp5宿主细胞互作蛋白的筛选与鉴定

作者：邵长浩东北农业大学

学位级别：硕士

猪流行性腹泻(PED)是目前危害世界养猪业主的要疾病之一。该病是一种以呕吐、腹泻、脱水、厌食为主要特征的急性、高度传染性肠道疾病,引起仔猪严重腹泻和高死亡率,给世界养猪业造成了严重威胁。该病的病原是猪流行性腹泻病毒(PEDV),是... 详细信息

猪流行性腹泻(PED)是目前危害世界养猪业主的要疾病之一。该病是一种以呕吐、腹泻、脱水、厌食为主要特征的急性、高度传染性肠道疾病,引起仔猪严重腹泻和高死亡率,给世界养猪业造成了严重威胁。该病的病原是猪流行性腹泻病毒(PEDV),是一种单股正链RNA病毒。PEDV基因组全长约28000 nt,总共含有7个开放阅读框(ORF)分别为ORF1a、ORF1b、S、ORF3、E、M和N基因。其中位于N端的ORF1a和ORF1b基因负责2个复制酶多聚蛋白前体(pp1a和pp1ab)的编码,这两个复制酶多聚蛋白前体随后被相关的酶切割加工,最终形成16个非结构蛋白。PEDV nsp5是一种水解酶,也被称为3C样蛋白酶(3CLpro),在C端有保守的功能结构域和催化残基位点,3CLpro在冠状病毒的多聚蛋白的加工过程发挥至关重要的作用。在病毒感染细胞复制产生新一代子代病毒时,发挥其水解酶功能将复制酶多聚蛋白进行切割,最终形成12个非结构蛋白(nsp5～nsp16)。此外,nsp5还是一种关键的干扰素拮抗蛋白,存在于多种不同的病毒家族中,对其宿主互作蛋白的筛选和特性研究对于阐明该蛋白的生物学功能及其在PEDV致病机制中的作用意义重大。本实验采用大肠杆菌表达系统体外表达了PEDV nsp5。为了获得水溶性的nsp5,对构建的两种p GEX-6P-1-nsp5和pET-30a-nsp5重组表达质粒的诱导条件进行了优化,最终获得了高效表达的水溶性GST-nsp5蛋白,通过GST标签亲和纯化方式获得了高纯度的nsp5蛋白,随后用上述纯化的nsp5蛋白混合佐剂免疫健康新西兰大白兔,最终制备了可以识别nsp5的兔多克隆抗体。ELISA方法检测其效价可达:1:10。Western blot和IFA检测均表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性,既能识别pCMV-HA-N-nsp5转染细胞产生的HA-nsp5,也可以与PEDV感染宿主细胞后病毒自身产生的nsp5发生反应。采用GST pull-down方法体外筛选了与PEDV nsp5蛋白相互作用的IPEC-J2宿主细胞靶蛋白。pull-down产物经质谱鉴定并且排除与GST标签互作的无关蛋白后,共获得43个可能与nsp5发生互作的蛋白。GO分析发现这43个蛋白主要参与细胞内翻译和核糖体大亚基装配的生化过程,在细胞中主要分布在胞核、膜系统以及胞浆的核糖体亚基,蛋白分子功能主要是结合RNA以及构成核糖体的主要组成成分。KEGG pathway分析表明这43个蛋白主要富集在核糖体信号通路。最后从这43个蛋白挑选出了RPL11和PSMD7这2个蛋白进行了生物学功能的验证。间接免疫荧光试验表明RPL11和PSMD7这两种蛋白均可与nsp5蛋白共定位,免疫共沉淀结果显示RPL11和PSMD7这2种蛋白也可和nsp5发生了反应。综上所述PEDV nsp5蛋白可与宿主细胞RPL11和PSMD7两种蛋白发生相互作用,可能参与病毒在感染细胞中的复制和增殖,并可能在病毒损伤细胞的过程中发挥重要的生物学功能。

关键词：猪流行性腹泻病毒非结构蛋白5 猪小肠上皮细胞质谱分析互作蛋白

基于CFD的航空发动机离心通风器的优化设计研究

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基于CFD的航空发动机离心通风器的优化设计研究

作者：邵长浩沈阳航空航天大学

学位级别：硕士

航空发动机离心通风器是航空发动机机械润滑系统中滑油回收的主要部件，离心通风器的通风阻力和分离效率直接影响润滑系统的滑油回收率和工作特性。基于国内外对此的研究，利用CFD软件对离心通风器内的油气混合气的两相流动进行数值模... 详细信息

航空发动机离心通风器是航空发动机机械润滑系统中滑油回收的主要部件，离心通风器的通风阻力和分离效率直接影响润滑系统的滑油回收率和工作特性。基于国内外对此的研究，利用CFD软件对离心通风器内的油气混合气的两相流动进行数值模拟。对气流流动的湍流模拟采用适应雷诺应力各向异性的雷诺应力模型。油滴颗粒的初始喷射和运动轨迹的模拟采用DPM模型，模拟颗粒在离心通风器内受各项作用力下的运动情况。连续相壁面边界采用标准壁面函数，模拟气流的边界层流动。离散相的壁面边界采用壁面液膜模型，模拟油滴颗粒与壁面上油膜的相互作用。计算方案分别计算了不同通风流量;不同旋转轴转速;不同通风孔偏心距;不同辐板顶圆半径下的各通风阻力与分离效率。结果表明：通风流量与旋转轴转速的增加都会带来更大的通风阻力，流量的增大不利于分离效率的提高，分离效率随转速的增加会有所提高。增大辐板顶圆半径通风阻力增大，分离效率提高。通风孔偏心设计有助于减小通风阻力，并削弱出口回流现象，但分效率有一定的降低。此外，通风器内气流流线弯曲回转明显，部分区域存在较大的流体旋涡，流体旋涡的结构特性对分离效率有一定的影响。离心通风器气体的湍流强度增强有助于分离效率的提高。对壁面油膜厚度的分析表明，壁面油膜厚度受壁面剪切应力的影响，剪切应力高的地方油膜厚度薄。在剪切应力的驱动下部分油膜会向壁面边缘迁移，最后被甩离壁面形成较大的油滴颗粒从新回到气流当中。

关键词：航空发动机离心通风器油气分离数值模拟 DPM 壁面液膜

基于核心素养在探究式分组实验教学中的实践与思考---以“氢氧化钠变质”探究式分组实验教学为例

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学苑教育 2022年第28期 67-68,71页

作者：邵长浩江苏省兴化市楚水初级中学

科学探究与创新意识是化学学科重要的核心素养之一,探索以素养为本的课堂教学已成为一种迫切的需要。本文以“氢氧化钠变质”探究式分组实验教学为载体,在合理分组的前提下通过任务式管理,进行合作探究与学习,旨在为提升学生的创新能力... 详细信息

科学探究与创新意识是化学学科重要的核心素养之一,探索以素养为本的课堂教学已成为一种迫切的需要。本文以“氢氧化钠变质”探究式分组实验教学为载体,在合理分组的前提下通过任务式管理,进行合作探究与学习,旨在为提升学生的创新能力、合作能力等方面提供一些借鉴与思考。

关键词：核心素养探究实验分组实验教学

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航空润滑油过滤器特性的数值模拟

润滑与密封 2014年第2期39卷 80-83页

作者：徐让书常柱宇牛玲邵长浩沈阳航空航天大学航空航天工程学部辽宁沈阳110136

采用计算流体力学(CFD)的方法建立网式航空滑油滤的数学模型。利用多孔介质模型来模拟滤网的阻力效应,用多孔阶跃面代替滤网来模拟滤网的压降;应用离散相模型模拟过滤效率,在多孔阶跃面上应用用户自定义函数(UDF)对颗粒进行捕集,对该模... 详细信息

采用计算流体力学(CFD)的方法建立网式航空滑油滤的数学模型。利用多孔介质模型来模拟滤网的阻力效应,用多孔阶跃面代替滤网来模拟滤网的压降;应用离散相模型模拟过滤效率,在多孔阶跃面上应用用户自定义函数(UDF)对颗粒进行捕集,对该模型进行计算,得到过滤器的三维内部流场分布及其压力损失和过滤效率与润滑油进口速度的关系,为航空滑油滤的优化设计提供了参考。

关键词：压力损失过滤效率过滤器航空润滑油

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工况因素对离心通风器穿透率影响的数值研究

沈阳航空航天大学学报 2013年第6期30卷 8-10,20页

作者：邵长浩徐让书沈阳航空航天大学航空航天工程学部(院) 沈阳110136

离心通风器是航空发动机润滑系统中回收滑油的主要部件,工作时转速和通风流量对其分离滑油效率有一定的影响。以离心通风器内空气与滑油颗粒组成的两相流为研究对象,计算不同工况下滑油油珠的穿透率。采用DPM模型模拟颗粒相喷射源,应用... 详细信息

离心通风器是航空发动机润滑系统中回收滑油的主要部件,工作时转速和通风流量对其分离滑油效率有一定的影响。以离心通风器内空气与滑油颗粒组成的两相流为研究对象,计算不同工况下滑油油珠的穿透率。采用DPM模型模拟颗粒相喷射源,应用雷诺应力模型计算连续相湍流流动。计算结果表明,提高转速可以减小穿透率,保障滑油的回收。加大通风流量时,离心通风器的穿透率增加。

关键词：润滑系统离心通风器转速通风流量穿透率

应用大型底栖动物完整性指数评价呼兰河的生态健康状况

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水产学杂志 2023年第5期36卷 100-111页

作者：宋聃都雪王乐王慧博窦乾明金星邵长浩霍堂斌中国水产科学研究院黑龙江水产研究所寒地水域水生生物保护与生态修复重点实验室黑龙江哈尔滨150070 黑龙江流域渔业生态省野外科学观测研究站黑龙江哈尔滨150070 东北农业大学黑龙江哈尔滨150038

本文于2018年夏季(8月)、秋季(10月)和2019年春季(5月),根据呼兰河干支流等级和生态环境特征全流域设置28个采样点,采集大型无脊椎底栖动物和水环境样品,构建呼兰河底栖动物完整性指数,评价和分析寒温带山区河流呼兰河的生态健康现状及... 详细信息

本文于2018年夏季(8月)、秋季(10月)和2019年春季(5月),根据呼兰河干支流等级和生态环境特征全流域设置28个采样点,采集大型无脊椎底栖动物和水环境样品,构建呼兰河底栖动物完整性指数,评价和分析寒温带山区河流呼兰河的生态健康现状及其主要威胁。结果共采集到大型底栖动物14目32科57种,筛选毛翅目分类单元数、EPT(蜉蝣目、襀翅目和毛翅目)分类单元数、EPT个体相对丰度、耐污类群分类单元数、生物指数、刮食者个体相对丰度6个参数作为呼兰河大型底栖动物完整性指数(B-IBI)核心指标,以比值法确定健康标准值为4.42,B-IBI评价结果表明:呼兰河整体健康水平“一般”,评价等级为“健康”的点位仅占调查点位总数的17.9%。水环境和土地利用数据分析表明,城镇化和农业生产是呼兰河生态系统健康面临的最主要威胁。

关键词：河流健康土地利用环境因子底栖动物完整性指数

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大辽河口红狼牙■虎鱼生物学初步研究

水产学杂志 2018年第5期31卷 29-33页

作者：霍堂斌赵荣伟郑文军李耕邵长浩代尚英中国水产科学研究院黑龙江水产研究所农业部黑龙江流域渔业资源与环境重点野外科学观测试验站黑龙江哈尔滨150070 哈尔滨市水产技术推广站黑龙江哈尔滨150076 中国水产科学研究院营口增殖实验站辽宁营口115004 东北农业大学黑龙江哈尔滨150040

2015年和2016年5—9月间,用底层定置网具在大辽河口水域采集233尾红狼牙■虎鱼Odontamblyopus rubicundus,活体测量全长、体质量后,取一侧矢耳石鉴定年龄,取消化道等研究红狼牙■虎鱼的生物学。结果表明,红狼牙■虎鱼由1～4龄组成,2^+～... 详细信息

2015年和2016年5—9月间,用底层定置网具在大辽河口水域采集233尾红狼牙■虎鱼Odontamblyopus rubicundus,活体测量全长、体质量后,取一侧矢耳石鉴定年龄,取消化道等研究红狼牙■虎鱼的生物学。结果表明,红狼牙■虎鱼由1～4龄组成,2^+～3^+龄个体占90.56%;全长6.47～30.70 cm,平均为(19.25±3.32)cm,体质量2.24～41.27g,平均为(17.67±5.67)g;全长与体质量的关系式W=0.0389L2.0654(R2=0.97061);渐近全长L∞为84.30cm,渐近体质量W∞为369.45g,体质量生长的拐点在7.81龄,所对应的体长和体质量分别为43.45cm和50.60g。在红狼牙■虎鱼消化道中共发现8种饵料生物,中国毛虾Acetes chinensis出现的频次最高,为95.45%,相对重要性指标(IRI%)为7 782.85%;其次为棱鳀Thrissa sp.(IRI%=1 483.53%)和纹缟虎鱼Tridentiger trigonocephalus (IRI%=612.98%)。红狼牙■虎鱼摄食率较高为79.17%,平均饱满指数变化较大(0.01～7.65),Shannon-Weiner多样性指数H'变化在0～1.794之间,Pielou均匀度指数J'在0～1.1145之间。

关键词：大辽河口红狼牙[鱼叚]虎鱼生物学食性

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自然吸气汽油机部分负荷换气特性研究

汽车实用技术 2016年第11期13卷 39-42页

作者：李一邵长浩霍东波乔鑫华晨汽车工程研究院 CAE工程室辽宁沈阳110141

基于原型样机搭建的一维发动机热力学分析模型,对发动机部分负荷换气特性进行研究,主要考虑了气门运动规律的影响。主要对常用工况范围内5个特定工况点进行了动力性与经济性的对比分析,阐述了排气门滞后关闭和凸轮型线更改对部分负荷换... 详细信息

基于原型样机搭建的一维发动机热力学分析模型,对发动机部分负荷换气特性进行研究,主要考虑了气门运动规律的影响。主要对常用工况范围内5个特定工况点进行了动力性与经济性的对比分析,阐述了排气门滞后关闭和凸轮型线更改对部分负荷换气过程影响。排气门滞后关闭,增大了残余废气量,提升了实际循环的压缩比,减小了泵气损失,提升了部分负荷的动力性,比油耗降低2%-5%左右。凸轮型线升程和包角增加有益于上述获益的增大。

关键词：部分负荷可变气门正时残余废气换气特性

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海浪河细鳞鲑食性研究

水产学杂志 2021年第6期34卷 11-17页

作者：宋聃都雪王慧博黄晓丽王乐张澜澜邵长浩霍堂斌中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 黑龙江省水产技术推广总站黑龙江哈尔滨150010 东北农业大学黑龙江哈尔滨15003

2019年1月、5月、7月和10月,用定制多网目三层复合刺网于松花江二级支流的海浪河长汀以上河段采集细鳞鲑Brachymystax lenok成鱼样本132尾,分析其食性。结果显示:细鳞鲑的食物组成以水生昆虫中的毛翅目和襀翅目,以及小型鲤科鱼类为主;... 详细信息

2019年1月、5月、7月和10月,用定制多网目三层复合刺网于松花江二级支流的海浪河长汀以上河段采集细鳞鲑Brachymystax lenok成鱼样本132尾,分析其食性。结果显示:细鳞鲑的食物组成以水生昆虫中的毛翅目和襀翅目,以及小型鲤科鱼类为主;饵料生物中水生昆虫和小型鱼类的质量分别为44.91%和38.61%;主食种类为洛氏鱥Phoxinus lagowskii、萨卡林大石蝇Pteronarcys sachalina和大石蝇Pteronarcys sp.成虫。结果发现:细鳞鲑摄食强度存在季节性变化,摄食高峰期为夏季和秋季(5月和7月),摄食率分别为94.29%和95.56%,充塞度等级大于Ⅲ的个体比例秋季最高(66.67%),春季繁殖期具有停止摄食的行为特征(空肠率83.33%)。

关键词：细鳞鲑海浪河食性水生昆虫