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15种常见食(药)用菌的3种总DNA提取方法比较研究

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食品科学 2004年第5期25卷 36-40页

作者：江树勋邵碧英陈文炳李寿崧王泽生朱晓南廖剑华福建出入境检验检疫局技术中心福建福州350001 福建省轻工业研究所双孢蘑菇菌种研究推广站福建福州350005

本文研究了15种主要食(药)用菌共16个样品的3种总DNA提取方法之比较,它们分别是CTAB法、食品DNA提取试剂盒法和QIAGEN试剂盒法。提取结果分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及RAPD检测。紫外检测结果表明3种方法提取到的总DNA质量均不理想... 详细信息

本文研究了15种主要食(药)用菌共16个样品的3种总DNA提取方法之比较,它们分别是CTAB法、食品DNA提取试剂盒法和QIAGEN试剂盒法。提取结果分别经过核酸蛋白分析仪、电泳以及RAPD检测。紫外检测结果表明3种方法提取到的总DNA质量均不理想,电泳结果表明3种方法均能提取出小平菇、红菇、香菇、双孢蘑菇、竹荪、黑木耳、姬松茸等7种食(药)用菌总DNA,RAPD检测结果表明CTAB法适用于所有15种食(药)用菌提取用于PCR的总DNA。根据以上结果,我们认为可以选用CTAB法作为在检测这些食(药)用菌的转基因成分时的总DNA提取方法。

关键词：食用菌药用菌总DNA 提取方法比较研究 CTAB法食品DNA提取试剂盒法 QIAGEN试剂盒法

免疫磁珠捕获-通用引物PCR快速检测食品中致病菌的研究

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中国食品学报 2010年第1期10卷 175-180页

作者：张体银邵碧英郑晶黄晓蓉黄嫦娇陈彬福建出入境检验检疫局福建福州350001

为了提高食品中致病菌的检出率和灵敏度,利用免疫磁珠捕获结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IMC-UPPCR)检测食品中的致病菌。结果显示,采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,IC-UPPCR检测致病... 详细信息

为了提高食品中致病菌的检出率和灵敏度,利用免疫磁珠捕获结合经典PCR技术建立免疫捕捉通用引物PCR(IMC-UPPCR)检测食品中的致病菌。结果显示,采用细菌16SrRNA基因保守区设计特异性引物,建立通用引物PCR技术是可行的,IC-UPPCR检测致病菌的最低检测限可达10 cfu,检测致病菌的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。采用本方法与国标方法分别对50种不同样品进行3种致病菌检测,结果显示两种方法的符合率达100%,特异性相当。与国标方法相比,本方法灵敏度更高,并具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,可以满足大批样品致病菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫等领域。

关键词：免疫磁珠捕捉通用引物 PCR 致病菌食品

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河豚毒素DNA适配子的筛选与结构分析

中国食品学报 2012年第2期12卷 137-143页

作者：邵碧英高兴杨方陈文炳缪婷玉彭娟福建出入境检验检疫局福州350001 福州大学化学化工学院福州350002

人工合成113个碱基的随机ssDNA文库,以河豚毒素为靶物质,采用SELEX技术进行12轮筛选,测定各轮富集文库与河豚毒素的亲和力,其中第10轮富集文库与河豚毒素的亲和力最高。将第10轮富集文库进行克隆、测序,用DNAMAN软件分析克隆子的一级和... 详细信息

人工合成113个碱基的随机ssDNA文库,以河豚毒素为靶物质,采用SELEX技术进行12轮筛选,测定各轮富集文库与河豚毒素的亲和力,其中第10轮富集文库与河豚毒素的亲和力最高。将第10轮富集文库进行克隆、测序,用DNAMAN软件分析克隆子的一级和二级结构,并测定克隆子与河豚毒素的亲和力。结果表明:与河豚毒素结合力高的DNA适配子经过10轮筛选后得到富集,成功筛选到最高亲和力的DNA适配子G10。

关键词：河豚毒素适配子 SELEX 诱变PCR

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河豚毒素DNA适配子的制备及应用

食品科学 2014年第24期35卷 205-208页

作者：邵碧英陈彬陈文炳杨方缪婷玉彭娟福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心福建省检验检疫技术研究重点实验室福建福州350001

人工合成78个碱基的随机ss DNA文库,采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)结合的方法,通过筛选富集、克隆、测序,获得了与河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配... 详细信息

人工合成78个碱基的随机ss DNA文库,采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)结合的方法,通过筛选富集、克隆、测序,获得了与河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配子A3的二级结构主要为茎环结构,与TTX的亲和力为1.254。对适配子和TTX结合的磷酸盐缓冲液p H值、荧光染料结合时间进行优化,结果表明,最适p H值为7.5,最佳结合时间为10 min。建立的快速筛选检测TTX的DNA适配子-荧光染料法对TTX的检出限为10-6 mo1/L。

关键词：河豚毒素适配子荧光染料检测

河豚鱼Cyt b基因部分DNA序列分析与应用

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食品科学 2012年第20期33卷 227-232页

作者：陈文炳林少华邵碧英赵晨江树勋闫诚郑晶福建出入境检验检疫局技术中心福建福州350001 漳州片仔癀药业股份有限公司福建漳州363000 福建省产品质量检验研究院福建福州350001

建立河豚鱼物种DNA鉴别技术,根据GenBank公布的河豚鱼细胞色素b基因序列,应用软件Primer Premier5.00版设计上游引物HT1-F与下游HT1-R,对3属9种福建省搜集的常见的河豚鱼与2种未知物种名称且外观无法进行形态学判断的河豚鱼样品的细胞色... 详细信息

建立河豚鱼物种DNA鉴别技术,根据GenBank公布的河豚鱼细胞色素b基因序列,应用软件Primer Premier5.00版设计上游引物HT1-F与下游HT1-R,对3属9种福建省搜集的常见的河豚鱼与2种未知物种名称且外观无法进行形态学判断的河豚鱼样品的细胞色素b基因序列中的部分片段进行PCR扩增,PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳确证、纯化后,进行DNA碱基序列测定,序列长度均为423bp。应用DNA MANN软件进行样品间DNA序列同源性比对分析,建立样品间系统关系树状图,供试11个样品被划分为3个类群,第Ⅰ组与第Ⅱ组之间的同源率为89%,这2组与第Ⅲ组之间的同源率为85%。根据序列同源性分析结果,可推测2个未知种名的样品为腹刺鲀属或东方鲀属。

关键词：河豚鱼 PCR检测 DNA测序物种鉴定

饲料、动物产品中牛、羊源性成分的多重PCR检测

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饲料、动物产品中牛、羊源性成分的多重PCR检测

动物油脂中DNA的提取及牛、羊源性成分的PCR检测

中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：邵碧英陈文炳杨婕福建出入境检验检疫局技术中心

以鱼粉、奶粉、牛奶、果乳、鱼油及牛油为试验材料,重新合成扩增牛源性成分的引物,进行了18S rDNA片段、牛源性成分和羊源性成分之间的多重PCR检测。多重PCR检测结果与单一PCR检测结果完全一致。结果表明,多重PCR 方法用于进出口饲料及... 详细信息

以鱼粉、奶粉、牛奶、果乳、鱼油及牛油为试验材料,重新合成扩增牛源性成分的引物,进行了18S rDNA片段、牛源性成分和羊源性成分之间的多重PCR检测。多重PCR检测结果与单一PCR检测结果完全一致。结果表明,多重PCR 方法用于进出口饲料及动物产品中牛、羊源性成分的同时检测是可行的。

关键词：多重PCR 疯牛炳羊痒病牛源性成分羊源性成分

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国兽医学报 2006年第3期26卷 300-302页

作者：邵碧英张体银李志方郑腾陈文炳福建出入境检验检疫局福建福州350003

用异硫氰酸胍法提取鱼油、加入牛肉DNA的鱼油、加入山羊肉DNA的鱼油和牛油中的DNA。18SrDNA片段以及牛、羊源性成分的PCR扩增结果表明,建立的动物油脂DNA提取方法是可行的。用建立的DNA提取方法提取3份送检鱼油的DNA,牛、羊源性成分的PC... 详细信息

用异硫氰酸胍法提取鱼油、加入牛肉DNA的鱼油、加入山羊肉DNA的鱼油和牛油中的DNA。18SrDNA片段以及牛、羊源性成分的PCR扩增结果表明,建立的动物油脂DNA提取方法是可行的。用建立的DNA提取方法提取3份送检鱼油的DNA,牛、羊源性成分的PCR检测结果均为阴性。

关键词：动物油脂 DNA提取牛羊源性成分 PCR

影响米粉干转基因成分荧光PCR检测的若干因素分析

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食品工业科技 2014年第21期35卷 154-158页

作者：江树勋张冰邵碧英缪婷玉彭娟陈文炳福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心、福建省检验检疫技术研究重点实验室福建福州350001 福建农林大学福建福州350003 厦门塔斯曼生物工程公司福建厦门361023

为提高米制品中转基因成分实时荧光PCR检测的灵敏度与检出率,以及优化样品中转基因成分的检出效果,以添加不同转基因含量的米制品(米粉干)为模拟转基因样品,对影响检测效果的因素包括样品颗粒细度、DNA提取过程中样品在CTAB裂解缓冲液... 详细信息

为提高米制品中转基因成分实时荧光PCR检测的灵敏度与检出率,以及优化样品中转基因成分的检出效果,以添加不同转基因含量的米制品(米粉干)为模拟转基因样品,对影响检测效果的因素包括样品颗粒细度、DNA提取过程中样品在CTAB裂解缓冲液中温育时间等因素进行分析。结果显示,当样品颗粒细度>100目、CTAB温育时间达到8h条件下,样品DNA提取及荧光PCR检测结果最好;在最优化的条件组合下,样品转基因成分的检出限可达到0.001%转基因含量,是通常认为的荧光PCR检出限0.01%的10倍。

关键词：米制品(米粉干) 转基因成分实时荧光PCR 检出限

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沙门氏菌DNA提取及PCR反应条件的优化

食品科学 2007年第7期28卷 331-334页

作者：邵碧英陈彬汤敏英吴谦张体银福建出入境检验检疫局技术中心福建福州350001

分别采用煮沸法和CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA,紫外测定和电泳结果表明CTAB/NaCl法提取到的DNA的浓度和纯度较煮沸法理想。合成分别扩增沙门氏菌属特异基因hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基... 详细信息

分别采用煮沸法和CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA,紫外测定和电泳结果表明CTAB/NaCl法提取到的DNA的浓度和纯度较煮沸法理想。合成分别扩增沙门氏菌属特异基因hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)的引物,对PCR反应条件进行了优化。结果表明可同时用于这四种基因检测的PCR反应条件为:94℃预变性5min;94℃变性40s,60℃退火40s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸5min。

关键词：沙门氏菌基因组DNA PCR 优化