检索结果-南通市图书馆

作者：郝婧雯中南大学

学位级别：硕士

目的探讨血脂代谢相关基因甲基化程度与脑梗死及其相关危险因素的关系。方法采用病例-对照研究方法随机抽取湖南汉族人群脑梗死患者及健康对照者各15名。应用亚硫酸氢盐测序技术检测LPL基因启动子区甲基化状态。结果1.病例组和对照组相... 详细信息

目的探讨血脂代谢相关基因甲基化程度与脑梗死及其相关危险因素的关系。方法采用病例-对照研究方法随机抽取湖南汉族人群脑梗死患者及健康对照者各15名。应用亚硫酸氢盐测序技术检测LPL基因启动子区甲基化状态。结果1.病例组和对照组相比,病例组舒张压、血浆LDL-C水平高于对照组,病例组血浆HDL-C水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。颈动脉粥样硬化组与无颈动脉粥样硬化组LPL基因启动子平均甲基化水平(CpGZ%)比较无明显差异(P>0.05)。4.所有研究对象血浆HDL-C水平与LPL基因启动子平均甲基化水平(CpGZ%)存在显著负的直线相关关系(P=0.001)。CpG9～16位点处直线相关性显著,差异有统计学意义(P0.05)。男性病例组与对照组LPL基因启动子平均甲基化水平(CpGZ%)比较存在显著差异(P=0.001)。女性病例组与对照组LPL基因启动子平均甲基化水平(CpGZ%)比较存在显著差异(P=0.024)。结论***基因启动子区高甲基化与脑梗死发病相关,与血浆低HDL-C水平及血浆高LDL-C水平相关。***基因启动子区甲基化可能与梗死灶面积及颈动脉粥样硬化无关。***基因启动子区甲基化水平无性别差异,随年龄增长有升高趋势。

关键词：脑梗死 LPL DNA甲基化

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新媒体语境下美国苗族跨文化传播的研究

新媒体语境下美国苗族跨文化传播的研究

作者：米雯浙江传媒学院

学位级别：硕士

跨文化传播是不同文化背景的人们之间发生的信息传播与文化交往活动。[1]它是人类传播活动的重要组成部分。通过跨文化传播活动,满足了国家与国家之间,族裔与族裔之间,个人与个人之间的交往与互动,维系了社会结构的动态平衡,促进了人类... 详细信息

跨文化传播是不同文化背景的人们之间发生的信息传播与文化交往活动。[1]它是人类传播活动的重要组成部分。通过跨文化传播活动,满足了国家与国家之间,族裔与族裔之间,个人与个人之间的交往与互动,维系了社会结构的动态平衡,促进了人类文化的发展与变迁。苗族是一个跨国界少数民族,由于历史原因,起源于中国的苗族散落在世界各地,他们的足迹遍布了亚洲、美洲、欧洲和澳洲。如今,美国有20多万苗族人口。[2]虽然以战争难民身份进入美国,但现在他们在政治、经济、文化等方面已经取得了明显的进步。在融入美国社会的过程中,也不断发展着自己的文化与传统,在新媒体时代,其构建了诸如Hmong Times Online(苗族时代在线)、Hmong Studies Journal(苗族研究期刊)等一些网络传播平台与各类民间传播组织。但是,其跨文化传播过程遇到了一些障碍,这种障碍不仅来自于自身社区媒体的局限性,还有外界诸如文化霸权等冲击。在面对文化冲突与文化适应问题之时,建立一个高效的对外渠道展现与传播自身优良文化、搭建与外界沟通的桥梁显得尤为重要。在全球化背景下,一个民族想要展示自己的形象、传播自己的信息,就必须借助新媒体的力量扩大其影响力。目前,美国苗族已经在新媒体平台建立自己的传播渠道,其是如何利用新媒体进行对外传播的?取得了哪些成绩?在此过程中又有哪些困境和不足之处?如何利用新媒体的互动、高效、开放等优势克服各种困难进行跨文化传播,是值得美国苗族人去思考的问题。本文研究的就是新媒体语境下美国苗族的跨文化传播,具体如下:第一部分绪论,阐述了本文的选题背景,研究意义,国内外研究现状综述及评价,研究目的和研究方法,研究的重点和难点。第二部分主要是对美国苗族的概述,对苗族进行界定,对其迁移史进行描述,最后对美国的苗族从历史背景、人口分布、融入美国的情况进行介绍。第三部分介绍了关于跨文化传播和新媒体的相关理论,以及加强美国苗族跨文化传播的必要性,介绍其跨文化传播媒介的发展,论述了新媒体在跨文化传播中的优势。第四部分论述了新媒体语境下美国苗族跨文化传播的概况和不足,深入探讨了造成困境的内在因素和外在因素。第五部分在已分析的美国苗族跨文化传播不足的基础上,从新媒体视角出发,提出了解决问题、提高跨文化传播效果的策略。本文所分析的内容不仅针对美国苗族跨文化传播,同时也希望对少数族裔的传播学研究提供一些帮助。

关键词：美国苗族跨文化传播新媒体传播策略

磷酸基团靶向的分子印迹材料制备及其应用研究

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磷酸基团靶向的分子印迹材料制备及其应用研究

作者：赵凯雯吉林大学

学位级别：硕士

磷酸基团广泛存在于非生命形式和生命形式中,在某些药物分子中,磷酸基团的引入能良好地改善药物分子的水溶性,在生物体内,磷酸基团参与核酸和细胞膜骨架等结构的组成。在细胞信号转导过程中,蛋白质中存在的酪氨酸可逆磷酸化,在真核生物... 详细信息

磷酸基团广泛存在于非生命形式和生命形式中,在某些药物分子中,磷酸基团的引入能良好地改善药物分子的水溶性,在生物体内,磷酸基团参与核酸和细胞膜骨架等结构的组成。在细胞信号转导过程中,蛋白质中存在的酪氨酸可逆磷酸化,在真核生物的细胞生长控制、细胞周期调控、基因转录、细胞凋亡、运动和代谢等生命活动中起着关键的调控作用。因此,本论文开发了一种靶向磷酸基团的分子印迹新方法。分子印迹技术是一种仿生识别技术,利用此技术制备的分子印迹聚合物(Molecularly imprinted polymers,MIPs)能特异性识别目标分子。定向表面分子印迹技术是一种新兴的分子印迹技术,原理是在载体颗粒上修饰功能基团,模板分子与功能基团通过作用力结合而被固定在载体颗粒表面上,在此基础上聚合形成印迹层,洗脱模板分子得到MIPs。表位印迹策略是在定向表面分子印迹技术基础上建立的新方法,通过对一段特征序列进行印迹来识别完整的目标蛋白质。磁纳米粒子具有磁分离特性和生物相容性,广泛运用于生物研究领域。本论文通过在磁纳米粒子修饰上一层TiO功能基团,将带有磷酸基团的物质通过静电作用定向固定在磁纳米粒子表面,然后在功能单体3-氨基丙基三乙氧基硅烷(UPTES)和交联剂正硅酸乙酯(TEOS)的作用下形成印迹层,模板分子洗脱后得到MIPs。MIPs具有特定的印迹空腔,形状大小和空间结构与模板分子适配,因此对模板分子具有吸附特异性。同时,在吸附过程中,印迹空腔内的钛离子通过静电作用结合模板分子的磷酸基团,提升了MIPs对于模板分子的吸附能力。本论文的工作集中在三个方面:1.采用定向表面印迹策略,以小分子物质单磷酸胞苷(CMP)作为模板分子,优化了定向印迹条件,明确了在磁纳米粒子表面进行TiO修饰以及在模板与TiO结合后洗去多余模板分子皆能提高MIPs的吸附能力。在磁纳米粒子表面进行TiO修饰后,吸附量提升了2.92倍,在模板与TiO结合后洗去多余模板分子,吸附量提升了0.70倍。2.运用优化后的印迹策略制备地塞米松磷酸钠MIPs,用透射电镜(TEM)表征MIPs的形貌,显示MIPs呈球形且具有核壳结构。优化了MIPs制备过程中硅烷化试剂(TEOS:UPTES)的比例,探究了印迹时间对于MIPs吸附性能的影响,当TEOS:UPTES=9.4:0.6,印迹时间为45 min时,印迹因子(imprinting factor,IF)为4.44达到最高。该MIPs在反复使用五次后,富集效率仅下降了7.31%,说明其具有良好的重复使用性,同时在储存六个月后富集效率仅下降13.8%,说明其具有良好的稳定性。最后,测试了MIPs在实际样本中的富集效率,在尿液中加入地塞米松磷酸钠的标准品,再利用MIPs对其进行富集,富集效率可达74.5%。3.采用表位印迹策略,以酪氨酸磷酸肽的表位苯基膦酸(PPA)为模板制备MIPs。该MIPs具有良好的选择特异性,能够从混合标准肽段溶液(酪氨酸磷酸肽:丝氨酸磷酸肽:苏氨酸磷酸肽=1:1:1)中选择性富集酪氨酸磷酸肽。总之,本论文围绕磷酸基团物质的富集问题,将分子印迹技术与磁性纳米颗粒结合,制备出了磷酸基团靶向的分子印迹材料,为磷酸化物质的选择性富集与鉴定提供了一种新的研究方法。

关键词：磷酸基团分子印迹技术分子识别磷酸化肽

共情视域下保护濒危动物主题数字绘本设计研究

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共情视域下保护濒危动物主题数字绘本设计研究

作者：李若雯北京林业大学

学位级别：硕士

随着信息技术和数字艺术的发展,阅读便捷的数字阅读媒介正在逐渐影响着受众的阅读和体验方式。基于人机交互技术的儿童数字绘本逐渐占据市场,广大受众群体开始注重阅读时的体验感与沉浸感,形成一种以纸质绘本为主、交互体验为辅的新的... 详细信息

随着信息技术和数字艺术的发展,阅读便捷的数字阅读媒介正在逐渐影响着受众的阅读和体验方式。基于人机交互技术的儿童数字绘本逐渐占据市场,广大受众群体开始注重阅读时的体验感与沉浸感,形成一种以纸质绘本为主、交互体验为辅的新的绘本体验形式。数字绘本的艺术表现形式和交互体验设计,相较于传统纸质绘本更加多样化,更能激发儿童的阅读兴趣,进而提高学习效率。在教育需求和市场需求的推动下,数字绘本设计开发逐步进入成熟阶段,但依然存在部分数字绘本作品缺少情绪情感元素和沉浸式体验、交互体验效果差等问题。本研究基于共情理论设计理念,以儿童用户为研究主体,从情绪共情与认知共情的角度出发,根据儿童感官特征、共情能力发展特点,通过结合儿童受众的阅读习惯,视觉元素创造了沉浸式的阅读体验,听觉元素引导故事情节发展,触觉元素建立情境游戏和互动,创造内容深刻的数字绘本内容,激发儿童共情体验的产生。课题主要目的是运用共情理论增加用户对绘本内容的理解,以现存濒危鸟类的生存困境为出发点,引导用户与绘本中的角色通过阅读及交互和感官体验产生共情,从而增强用户濒危动物保护意识。论文首先通过梳理共情理论和共情能力的概念,总结并归纳娱乐媒体对个体共情能力的影响,明确共情理论设计实践能够应用于数字绘本作品设计的结论。其次对绘本用户进行调研,采用实证研究、统计研究和文献研究等方法对国内6—10岁儿童的共情能力进行汇总分析,通过访谈法对9—10岁接触过电子绘本的儿童阅读兴趣进行调研,调研结果用以总结用户特征和需求。随后分析归纳数字绘本呈现特征,分别从情绪共情和认知共情的角度作为切入点,对国内外优秀的数字绘本作品进行综合解析。最后从认知心理、情感教育、交互设计等多方面探索共情理论应用于濒危动物保护绘本设计创作,并得出情感代入激发共情、沉浸式阅读深入共情、角色扮演共情对话的设计策略,以原创儿童数字交互绘本《小青脚鹬迁飞之旅》为例,利用游戏交互设计融合绘本故事情节、科普候鸟迁飞知识、科普候鸟环志流程,达到增加儿童的参与互动目的。通过对数字绘本中的情感交互模式设计与应用,进一步阐述以激发共情为目标的数字绘本设计方法。本文所提出的基于共情理论结合视觉、听觉、触觉在对儿童数字绘本中的交互体验研究具有一定的借鉴和参考价值,并为相关领域的创作者提供新的交互设计思路与创作方向。

关键词：数字绘本共情体验情绪共情认知共情交互设计

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兰州黄河风情线管理综合执法研究

兰州黄河风情线管理综合执法研究

作者：杨晨雯兰州大学

学位级别：硕士

改革开放以来,随着我国城市化进程的加快,城市管理工作日益繁重,城管执法应运而生。城管执法的先天不足导致城管体制不顺、职责不明、无法可依,在实际执法工作中遇到不少难题。城管的执法对象多为城市弱势群体,管理权与生存权的利益冲... 详细信息

改革开放以来,随着我国城市化进程的加快,城市管理工作日益繁重,城管执法应运而生。城管执法的先天不足导致城管体制不顺、职责不明、无法可依,在实际执法工作中遇到不少难题。城管的执法对象多为城市弱势群体,管理权与生存权的利益冲突造成公权力与私权利的激烈碰撞,执法行为不规范、执法对象较为偏执、执法环境不好等因素又引燃了矛盾,加之部分不良媒体的报道,城管被高度关注,负面新闻频出,形象一落千丈。虽然各级城管部门采取诸如举牌执法、眼神执法等新的执法方式,依然效果不佳。因此找出城管综合执法问题的根源,提出解决办法,对加强城管执法工作,树立执法队伍形象有着重要意义。本文以兰州黄河风情线管理综合执法为研究对象,通过阅读文献、实地调研、人物访谈和归纳整理,结合城市治理理论和新公共服务理论,从体制机制、法律法规、人员管理和管理思想四个方面切入,全面分析兰州黄河风情线管理综合执法面临的突出问题及成因。同时,充分借鉴国内外城市管理的经验,认真梳理美国、英国、法国、香港、武汉、江苏、南京等地立法先行、依法治理、联合执法、灵活管理、强化处罚等先进做法,启示黄河风情线执法工作。笔者认为,做好兰州黄河风情线的综合执法工作,就必须在理顺管理体制,加大立法保障,健全沟通和监督制度的同时,整合部门规划,科学合理设置经营场所,打造智慧城管平台,动员社会广泛参与,营造良好社会氛围。通过全社会、多方位、宽领域的共同推动,促进黄河风情线执法工作科学化、法制化、规范化、人性化。

关键词：兰州黄河风情线城市管理综合行政执法相对集中行政处罚权

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基底神经节网络同步和振荡的动力学研究

基底神经节网络同步和振荡的动力学研究

作者：杜丹雯北京邮电大学

学位级别：硕士

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的产生主要与黑质中的多巴胺能神经元的变性死亡有关,其发病区域主要在基底神经节(Basal Ganglia,BG)。帕金森震颤是帕金森病的主要症状之一,影响70%的帕金森病患者,主要为静止性震颤。基底神经节中... 详细信息

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的产生主要与黑质中的多巴胺能神经元的变性死亡有关,其发病区域主要在基底神经节(Basal Ganglia,BG)。帕金森震颤是帕金森病的主要症状之一,影响70%的帕金森病患者,主要为静止性震颤。基底神经节中的异常同步和低频振荡活动(3-9 Hz)是帕金森震颤的关键,但是这些异常同步振荡活动的机制和来源尚不清楚。本文主要利用Hodgkin-Huxley(H-H)模型,模拟基底神经节网络,从动力学角度分析基底神经节各个通路以及纹状体对网络同步和振荡的作用,进而探讨基底神经节异常同步和震颤振荡活动产生的机制。论文的主要内容与结论如下:在第三章中,我们基于改进的H-H模型,对基底神经节-丘脑网络的四种神经核团建模,分析多巴胺缺失后间接通路和超直接通路对网络同步和震颤振荡的作用。首先单独分析间接通路的作用,调节纹状体对外苍白球(Globus Pallidus External,GPe)的抑制性电流,结果表明增加纹状体对外苍白球的抑制性输入会增强网络的同步和震颤振荡。其次单独分析超直接通路的作用,调节皮层(Cortex,CTX)对丘脑底核(Subthalamic Nucleus,STN)的兴奋性电流,结果表明皮层强烈的高频伽玛输入可以显著的增加网络的同步和震颤振荡活动。这进一步说明了皮层的高频伽玛节律与丘脑底核-外苍白球网络中的低频振荡相互作用,可能导致震颤振荡的产生。最后分析两条通路的共同作用,同时调节间接通路纹状体抑制和超直接通路皮层兴奋性电流,结果表明当两条通路的作用不平衡时,网络会变得高度同步和震颤。相反,当两条通路的作用相对平衡时,网络的同步和震颤活动会减少。此外,当皮层的输入频率在theta频段时,网络的同步和震颤会降低,所以在临床治疗中,可以通过将皮层的输入频率控制在theta波段来减轻帕金森病的症状。在第四章中,我们加入了对纹状体中等多棘神经元(Medium Spiny Neurons,MSN)的建模,分为直接纹状体(Dl MSN)和间接纹状体(D2 MSN),探究了纹状体对基底神经节的主要输出核团(Internal Globus Pallidus,GPi)的震颤振荡的作用。首先探究直接通路和间接通路纹状体的作用,结果表明当直接通路和间接通路纹状体的作用相对平衡时,网络的震颤活动会减少;而当两条通路的作用相对不平衡时,网络的震颤活动会增加。其次探讨直接MSN和间接MSN神经元中M电流的作用,结果表明减小M电流的突触电导会使GPi中的震颤活动增加。最后探究了纹状体中抑制性连接的作用,结果表明减小直接和间接纹状体中的GABA电流电导会增加GPi的震颤振荡,并且直接和间接纹状体之间的连接对GPi的震颤振荡具有重要影响。以上研究结果表明今后在临床应用中可以通过将纹状体网络中的抑制电流控制在中等强度来治疗帕金森震颤症状。

关键词：基底神经节帕金森震颤同步振荡通路纹状体

基于用户体验提高iPhone平台效率型应用软件（APP）使用持续性的研究

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基于用户体验提高iPhone平台效率型应用软件（APP）使用持续性的...

作者：柴玮雯华东理工大学

学位级别：硕士

2007年iPhone掀起了以用户为中心设计的浪潮,它提供了一个用户和第三方应用软件(APP)开发者能直接高效的接触和交流的平台。然而在这个新兴的世界里,在国内开发的APP中只有二成可以被用户持续使用并得到盈利。因此“用户体验”,旨在研... 详细信息

2007年iPhone掀起了以用户为中心设计的浪潮,它提供了一个用户和第三方应用软件(APP)开发者能直接高效的接触和交流的平台。然而在这个新兴的世界里,在国内开发的APP中只有二成可以被用户持续使用并得到盈利。因此“用户体验”,旨在研究用户使用产品过程中建立起来感受的学科,近年来越来越受到国内外企业的关注。用户体验对于产品用户满意度有着关键性的指导意义,也往往决定了一款产品能否持续受到用户的喜爱并得到盈利。本篇论文将通过对用户体验所涉及的“感知心理学—感官体验”、“认知心理学—交互体验”、“动机心理学—行动体验”三个方面深入的理论探讨。在这三个领域,通过用户调研进行用户体验具体指标的收集、定性和定量的分析进行用户体验建模。最后基于这个用户体验模型,本论文将针对一款APP案例进行用户评估及优先权分析,找到能提高综合用户满意度的改进点,帮助指导设计师进行已有产品的改良设计,达到提高产品持续使用性的目的。本文中通过用户体验建模进行用户综合满意度改良的方法,同样也可以应用到以用户体验为目标的其他平台的应用软件中去,例如工业产品、计算机系统、网站等软件设计和研究中。

关键词： iPhoneAPP 人机交互用户体验建模优先权分析评估

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中国全球城市的发展格局研究

中国全球城市的发展格局研究

作者：孙越雯东北师范大学

学位级别：硕士

在全球化、信息化浪潮中，相继涌现出一批具有强大控制能力的全球城市。全球城市在全球城市网络中，处于重要的节点，并且在全球经济、社会、文化中发挥重要作用。在长期发展与演变过程中，全球城市格局逐渐形成。全球城市的发展与其所... 详细信息

在全球化、信息化浪潮中，相继涌现出一批具有强大控制能力的全球城市。全球城市在全球城市网络中，处于重要的节点，并且在全球经济、社会、文化中发挥重要作用。在长期发展与演变过程中，全球城市格局逐渐形成。全球城市的发展与其所在的国家或地区的经济高速发展具有高关联性，同时也与其在全球经济发展中所处地位的提升有着必然的联系。改革开放以来，中国的经济持续且高速增长，城市化、工业化水平不断提高，中国已成为世界经济发展最具活力的地区之一，显示出巨大的经济发展潜力，现在中国的一些城市已经成为全球复杂经济网络的重要组成部分，国内外的经济环境已经迫切需要我们建设全球城市。本论文上述宏观背景下，立足于中国全球城市的发展研究。通过对全球城市研究状况的梳理，以及国外全球城市空间结构的发展历程和空间布局特征，总结全球城市空间发展的规律，为我国全球城市的分析提供借鉴。在此基础上，论述我国全球城市的形成过程，概括其形成背景、形成机制。挖掘目前哪些城市是我国全球城市，未来哪些城市可能进入全球城市体系。并重点研究我国全球城市的功能与空间布局特征。全文共分六章。各章节内容概括如下：第一章绪论。主要阐明本论文的研究背景、目的以及研究的理论意义和现实意义。主要研究思路和所用方法。第二章全球城市理论的研究进展。分析相关概念和全球城市研究的历程。总结国内外的研究综述。第三章全球城市的空间结构与布局特征。对伦敦、巴黎、东京等全球城市的空间发展阶段进行论述，总结全球城市空间发展历程和空间布局特点。第四章我国全球城市的形成背景及机制。论述我国全球城市的形成背景，我国全球城市的区位选择，以及我国全球城市的形成机制。第五章我国全球城市的功能与空间布局。论述我国全球功能分类以及我国全球城市的空间结构特点。第六章结语。总结本论文的主要结论，说明论文的不足之处。

关键词：全球城市中国空间结构功能

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《内经》饮食理论研究

《内经》饮食理论研究

作者：刘昊雯山东中医药大学

学位级别：硕士

《内经》饮食理论以整体观念为指导思想,以中国传统文化为背景,以阴阳五行学说、脏腑气血理论为论理工具,阐明了饮食理论的具体应用原则及临床意义。本研究主要采用文化哲学、文献学方法,从“人与天地相应”角度对《内经》饮食理论进行... 详细信息

《内经》饮食理论以整体观念为指导思想,以中国传统文化为背景,以阴阳五行学说、脏腑气血理论为论理工具,阐明了饮食理论的具体应用原则及临床意义。本研究主要采用文化哲学、文献学方法,从“人与天地相应”角度对《内经》饮食理论进行探讨。首先,剖析了《内经》饮食理论的指导思想——整体观念;其次,考察《内经》饮食理论产生的文化背景和理论基础,指出《内经》饮食理论是建立在阴阳五行学说和脏腑气血理论的基础上,并吸收的儒道文化的相关精髓;再次,分析了《内经》饮食理论的调摄原则和具体应用方法;最后,阐明了《内经》饮食理论的临床意义。《内经》饮食理论构建了一种立足于整体观念的健康饮食模式,体现了饮食养生、疗疾的原理原则和方法。

关键词：整体观念饮食理论阴阳五行

亚致死浓度虫酰肼及Methoprene对亚洲玉米螟幼虫多巴脱羧酶基因表达的影响

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亚致死浓度虫酰肼及Methoprene对亚洲玉米螟幼虫多巴脱羧酶基因表...

作者：徐秋雯扬州大学

学位级别：硕士

为研究亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenee)幼虫体内一种与昆虫黑化相关的多巴脱羧酶(dopa decarboxylase,DDC)的分子功能,本文利用RACE技术从亚洲玉米螟幼虫体内克隆得到DDC的cDNA序列,对DDC基因序列进行了生物信息学分析,对DDC原... 详细信息

为研究亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenee)幼虫体内一种与昆虫黑化相关的多巴脱羧酶(dopa decarboxylase,DDC)的分子功能,本文利用RACE技术从亚洲玉米螟幼虫体内克隆得到DDC的cDNA序列,对DDC基因序列进行了生物信息学分析,对DDC原核表达表达条件进行优化,采用Western blot对表达的目标蛋白进行了鉴定,对玉米螟5龄幼虫进行亚致死浓度虫酰肼饲喂处理以及methoprene点滴处理,通过Real time PCR检测了虫酰肼和methoprene处理前后DDC基因mRNA水平上的表达变化情况,主要研究结果如下:(1)采用RT-PCR及RACE技术从亚洲玉米螟幼虫中获得了 DDC基因全长cDNA序列。该基因全长1688 bp(GenBank 登录号:KT428965),包含一个1431 bp的开放阅读框(ORF),一个202 bp的5'非编码区(5'UTR)和一个55 bp的3'非编码区(3'UTR)。开放阅读框从第203个核苷酸开始,终止于第1633个核苷酸,起始密码子ATG,终始密码子TGA,由其推导的氨基酸序列长为476个氨基酸。Of-DDC的计算分子量约为53.8 kDa,估测等电点pI为5.95。生物信息学分析表明:DDC蛋白无跨膜结构域,N端不含有信号肽,有1个糖基化位点,位于32位,含有36个磷酸化位点,均匀分布于整个多肽链中。BlastP分析结果表明:(Of-DDC的氨基酸序列与甜菜夜蛾Spodoptera exigua、豆天蛾Clanis bilinata、水稻粘虫Mythimna separata、天蚕Antheraea ynaamai、大红斑蝶Danus plexippus、冬尺蠖蛾 Operophtera brumata、斜纹夜蛾Spodoptera ltura等昆虫的DDC基因高度同源。(2)采用pET-28a表达系统对DDC基因编码的蛋白进行了原核表达,结果显示,Of-DDC重组蛋白在不同的IPTG诱导之后在上清和沉淀中均有表达,重组表达蛋白质的分子量大小与预测结果一致,约为53 kDa。pET-28a-Of-DDC在16℃、1.2 mmol/LIPTG诱导;28℃、1.2 mmol/L IPTG 诱导;和 37℃、1.0 mmol/L 和 1.2 mmol/L IPTG 诱导条件下,均可在碎菌上清中有明显的蛋白表达。Western blot鉴定结果表明可实现DDC蛋白的体外可溶表达。(3)通过Real time PCR分别检测了亚致死浓度虫酰肼和methoprene处理后亚洲玉米螟5龄幼虫不同时间(0h、12h、24h、36h、48h、60h、72h)后DDC基因mRNA水平上的表达变化情况。结果表明:随着时间的延长,对照组Of-DDC基因表达水平不断上升,处理48h后,对照组Of-DDC基因表达水平开始下降。与对照组相比,虫酰肼LC30处理后,Of-DDC基因在转录水平的表达在处理后0-24 h与对照组无明显差异,在处理后36 h水平稍高于对照组,但处理后48h至72hOf-DDC的基因表达明显被抑制(p<0.05)。与对照组相比methoprene LC30处理后,初期(0-24h)Of-DDC基因表达水平呈现上升趋势;在处理后72 h Of-DDC基因表达水平达到峰值,为对照组表达量的3.38倍。

关键词：亚洲玉米螟多巴脱羧酶 cDNA克隆生物信息学分析原核表达 Western blot 亚致死浓度虫酰肼 methoprene 荧光定量PCR