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Construction of Self-Assembled Cartilage Tissue from Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Induced by Hypoxia Combined with GDF-5

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2013年第5期33卷 700-706页

作者：田洪涛张波田青刘勇杨述华邵增务 Department of Orthopedics Union Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology

It is widely known that hypoxia can promote chondrogenesis of human bone marrow de- rived mesenchymal stem cells （hMSCs） in monolayer cultures. However, the direct impact of oxygen tension on hMSC differentiation in three-dimensional cultures is still unknown. This research was de- signed to observe the direct impact of oxygen tension on the ability of hMSCs to ＂self assemble＂ into tissue-engineered cartilage constructs, hMSCs were cultured in chondrogenic medium （CM） containing 100 ng/mL growth differentiation factor 5 （GDF-5） at 5% （hypoxia） and 21% （normoxia） 02 levels in monolayer cultures for 3 weeks. After differentiation, the cells were digested and employed in a self- assembly process to produce tissue-engineered constructs under hypoxic and normoxic conditions in vi- tro. The aggrecan and type ]I collagen expression, and type X collagen in the self-assembled con- structs were assessed by using immunofluorescent and immunochemical staining respectively. The methods of dimethylmethylene blue （DMMB）, hydroxyproline and PicoGreen were used to measure the total collagen content, glycosaminoglycan （GAG） content and the number of viable cells in each con- struct, respectively. The expression of type II collagen and aggrecan under hypoxic conditions was in- creased significantly as compared with that under normoxic conditions. In contrast, type X collagen expression was down-regulated in the hypoxic group. Moreover, the constructs in hypoxic group showed more significantly increased total collagen and GAG than in normoxic group, which were more close to those of the natural cartilage. These findings demonstrated that hypoxia enhanced chondro- genesis of in vitro, scaffold-free, tissue-engineered constructs generated using hMSCs induced by GDF-5. In hypoxic environments, the self-assembled constructs have a Thistological appearance and biochemical parameters similar to those of the natural cartilage.

关键词： hypoxia mesenchymal stem cells chondrogenesis tissue engineering self-assembly growth differentiation factor 5

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单启动子双表达载体pIRES-p14ARF-p53的构建及对骨肉瘤细胞增殖的抑制(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第38期11卷 7680-7684页

作者：李进杨述华邹利军邵增务廖翔华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科湖北省武汉市430022

背景:以往的研究表明,ADp14ARF转染p53阳性的肿瘤细胞系,可以发现明显的细胞增殖受阻现象。而转染p53阴性的肿瘤细胞系,尽管也可见肿瘤细胞增殖受阻,但在程度上明显轻于前者。同时转染p14ARF和p53两种基因,既增强p53表达又加强p53积累,... 详细信息

背景:以往的研究表明,ADp14ARF转染p53阳性的肿瘤细胞系,可以发现明显的细胞增殖受阻现象。而转染p53阴性的肿瘤细胞系,尽管也可见肿瘤细胞增殖受阻,但在程度上明显轻于前者。同时转染p14ARF和p53两种基因,既增强p53表达又加强p53积累,能否更易促进肿瘤细胞凋亡?目的:利用基因工程技术构建双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53,并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的抑制作用。设计:随机对照观察。单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。材料:实验于2005-01/2006-10于华中科技大学同济医学院基础医学院免疫教研室公共实验平台完成。人骨肉瘤MG-63细胞有华中科技大学同济医学院免疫教研室细胞室提供。含p53全长基因序列的质粒pIRES-p53和pIRES载体均购自武汉晶赛生物公司。方法:利用基因工程技术,将从培养的正常人肝细胞系L02细胞中扩增出的p14cDNA(0.5kb)亚克隆至pIRES载体中,通过PCR、限制性内切酶酶切鉴定重组质粒pIRES-p14ARF-p53。通过脂质体介导转染入骨肉瘤MG-63细胞中,并筛选出阳性克隆,将细胞分为3组:空白对照组(MG-63细胞),空载体对照组(稳定转染pIRES-neo细胞),p14ARF-p53组(稳定转染pIRES-p14ARF-p53细胞)。①采用流式细胞仪测定转染前后瘤细胞DNA含量和细胞周期。②逆转录PCR(RT-PCR)和Westernbolt对稳定转染后的瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达进行定性和半定量检测。③采用噻唑蓝比色法与细胞生长曲线观察细胞增殖情况。主要观察指标:①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期。②瘤细胞p53、p14ARF蛋白的表达。③细胞增殖情况。结果:成功构建出双质粒表达载体pIRES-p14ARF-p53。①骨肉瘤细胞DNA含量和细胞周期:流式细胞仪检测发现转染后的瘤细胞多停滞于G1期。②蛋白表达检测结果:RT-PCR与Westernblot检测证实p14ARF、p53基因在靶细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达。③细胞生长情况:转染MG-63后24,48,72,96h瘤细胞生长抑制率分别为33.43%、69.37%、66.19%、75.26%,与空载体对照组差异显著(P<0.01)。结论:野生型p53和p14ARF可协同抑制骨肉瘤细胞的增殖促进瘤细胞的凋亡。

关键词： pIRES-p14ARF-p53 凋亡基因治疗生长抑制

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自噬在骨肉瘤中作用的研究进展

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华中科技大学学报（医学版） 2018年第3期47卷 367-371页

作者：黄欣师德尧邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科医院武汉430022

骨肉瘤是一种起源于原始间充质细胞的最为常见的原发性恶性骨肿瘤,特点是瘤细胞直接形成骨样组织,也称成骨肉瘤。本病好发于儿童和青少年,其生长迅速,容易复发和转移,并且易对放化疗无效,或对化疗耐药。目前临床上通过术前新辅助化疗、... 详细信息

骨肉瘤是一种起源于原始间充质细胞的最为常见的原发性恶性骨肿瘤,特点是瘤细胞直接形成骨样组织,也称成骨肉瘤。本病好发于儿童和青少年,其生长迅速,容易复发和转移,并且易对放化疗无效,或对化疗耐药。目前临床上通过术前新辅助化疗、手术切除及术后辅助化疗的方案综合治疗骨肉瘤。

关键词：自噬骨肉瘤微小RNA 细胞凋亡

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p19^(ARF)和p16^(INK4a)在人骨肉瘤中表达的比较研究

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肿瘤防治研究 2006年第12期33卷 887-889页

作者：邓超邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科武汉430022

目的比较p16INK4a和p19ARF两种抑癌基因在可切除的人骨肉瘤组织中的表达形式,探讨其在人骨肉瘤的发生、发展中的意义。方法人骨肉瘤切除石蜡标本37例,用单克隆抗体间接免疫荧光法同时测定肿瘤组织的p16、p19蛋白的表达。结果p16INK4a表... 详细信息

目的比较p16INK4a和p19ARF两种抑癌基因在可切除的人骨肉瘤组织中的表达形式,探讨其在人骨肉瘤的发生、发展中的意义。方法人骨肉瘤切除石蜡标本37例,用单克隆抗体间接免疫荧光法同时测定肿瘤组织的p16、p19蛋白的表达。结果p16INK4a表达率56.8%(21/37),p19ARF表达率40.5%(15/37);p16与p19表达无相关性;p16和p19与骨肉瘤的外科分期、病理分级、血管浸润和肺部转移均无显著相关。结论p16、p19的下调都很可能是骨肉瘤发生发展的重要原因之一,未发现这两种抑癌基因之间的表达有显著关系。

关键词：人骨肉瘤 p16^INK4a p19^ARF 周期蛋白依赖激酶抑制剂

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干细胞技术用于椎间盘再生的研究进展及挑战

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中国组织工程研究 2017年第19期21卷 3063-3071页

作者：梁航邓享誉邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科医院湖北省武汉市430022

背景:椎间盘退变与下腰痛密切相关,被认为是椎间盘突出症等椎间盘退行性疾病的病理基础,严重影响人们的生活质量。目前无论是保守治疗还是手术治疗都不能从根本上逆转或阻止椎间盘退变的病理发展。目的:归纳、总结近几年干细胞移植治疗... 详细信息

背景:椎间盘退变与下腰痛密切相关,被认为是椎间盘突出症等椎间盘退行性疾病的病理基础,严重影响人们的生活质量。目前无论是保守治疗还是手术治疗都不能从根本上逆转或阻止椎间盘退变的病理发展。目的:归纳、总结近几年干细胞移植治疗退行性椎间盘疾病的研究进展,并分析所面临的挑战及潜在的解决方案。方法:通过检索数据库Pub Med查阅2016年9月之前的相关文献,纳入干细胞移植治疗椎间盘退变在体外实验、动物实验及临床试验方面的相关研究,分析该疗法所面临的主要问题。结果与结论:(1)干细胞移植的生物学修复技术为椎间盘退行性疾病提供新的治疗策略,迄今已在大量体外实验及动物模型中开展研究,并逐渐跨越至临床试验阶段,均取得显著成果;(2)然而,如何使干细胞移植后适应退变椎间盘的微环境、选择何种干细胞、如何掌握治疗的适应证等一系列问题对研究人员提出巨大挑战。

关键词：干细胞椎间盘退化细胞移植再生医学组织工程骨科植入物脊柱植入物椎间盘退变

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Targeted Silencing of Heparanase Gene by Small Interfering RNA Inhibits Invasiveness and Metastasis of Osteosarcoma Cells

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2011年第3期31卷 348-352页

作者：范磊吴强邢晓娟刘郁东邵增务 Department of Orthopaedics Union HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and Technology Southeast Forensic Science Service

The effects of targeted silencing of heparanase gene by small interfering RNA（siRNA） on invasiveness and metastasis of osteosarcoma cells（MG63 cells） were investigated in the present *** complementary oligonucleotide strands were synthesized and inserted into pGenesil-1 vector based on the mRNA sequence of heparanase *** expression vector containing short hairpin RNA（pGenesil-shRNA） was constructed ***63 cells were randomly allocated into 3 groups：blank group,empty vector（pGenesil） transfected group and expression vector（pGenesil-shRNA） transfected *** the induction of Lipofectamine 2000,the recombinants were transfected into MG63 *** gene expression level was detected by RT-PCR and Western *** prolifera-tion was measured by MTT *** invasiveness and metastasis were examined by cell adhesion and Transwell-ECM *** migration assay was applied for the detection of *** compared with negative controls,the mRNA and protein expression levels of heparanase were down-regulated by 76.1%（P0.01） and 75.3%（P0.01） respectively in the pGenesil-shRNA transfected ***,the proliferation,adhesiveness,invasiveness and angiogenesis properties of MG63 cells were all significantly *** was suggested that targeted silencing of heparanase gene by siRNA could dramatically inhibit the invasiveness and metastasis of osteosarcoma cells.

关键词： siRNA shRNA heparanase gene silencing osteosarcoma gene expression invasion metastasis

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82/H517钻头流道的冲蚀失效与改进措施

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石油机械 2000年第5期28卷 36-38页

作者：孙红珍邵增元江汉石油钻头股份有限公司

1992～ 1996年 82只流道冲蚀刺穿的 8 H5 17钻头的统计数据表明 ,冲蚀失效钻头的年投诉率达 5 0 %左右。针对该型钻头流道的结构缺陷 ,提出了改进措施 :(1)改进钻头流道形状 ,增加分流结构 ,使流道截面积变化平缓 ;(2 )适当调整水孔入... 详细信息

1992～ 1996年 82只流道冲蚀刺穿的 8 H5 17钻头的统计数据表明 ,冲蚀失效钻头的年投诉率达 5 0 %左右。针对该型钻头流道的结构缺陷 ,提出了改进措施 :(1)改进钻头流道形状 ,增加分流结构 ,使流道截面积变化平缓 ;(2 )适当调整水孔入口段的直径 ,使其与喷嘴入口的台肩从升坎变为降坎 ;(3)修改喷嘴的装配尺寸及其公差 ,减小喷嘴的轴向间隙和径向间隙 ,并适当增大喷嘴密封圈的最小压缩量 ;(4)用螺纹环取代卡簧锁紧喷嘴 ,以消除喷嘴的轴向间隙 ;(5 )增大水孔入口处圆弧的曲率半径 ,尽可能减小凸台 ,使流线更趋平缓。改进后的钻头纯钻时 70h以上未出现流道冲蚀失效现象 ,耐冲蚀寿命比改进前提高近

关键词：钻头流道结构设计耐冲蚀石油钻井

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组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人骨肉瘤细胞抑制增殖和诱导分化的研究

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中国矫形外科杂志 2010年第13期18卷 1111-1114页

作者：丁凡邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科武汉430022

[目的]观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。[方法]不同浓度的TSA作用MG-63细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、倒置相差显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞生长曲线;软琼脂集落形成实验观察... 详细信息

[目的]观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。[方法]不同浓度的TSA作用MG-63细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、倒置相差显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞生长曲线;软琼脂集落形成实验观察细胞生长和侵袭能力的变化;流式细胞仪测定细胞周期变化。[结果]TSA可明显抑制MG-63细胞增殖,并呈现剂量和时间的依赖性;细胞形态呈明显的良性分化;瘤细胞的软琼脂集落形成率明显降低;TSA能够延缓细胞周期G1-S进程,阻滞细胞于G1期,停留在G2/M期。[结论]TSA对MG-63细胞有明显的抑制增殖和诱导分化作用。

关键词：骨肉瘤组蛋白去乙酰化酶曲古抑菌素A 分化

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STAT3在骨肉瘤中的研究进展

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华中科技大学学报（医学版） 2021年第3期50卷 398-403页

作者：钟彬龙邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科医院武汉430022

骨肉瘤是最常见的骨源性恶性肿瘤,具有极高的致残率和致死率,目前临床治疗效果仍不理想。信号转导和活化转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)是细胞内信号转导的重要分子之一,参与增殖、凋亡、迁移... 详细信息

骨肉瘤是最常见的骨源性恶性肿瘤,具有极高的致残率和致死率,目前临床治疗效果仍不理想。信号转导和活化转录因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)是细胞内信号转导的重要分子之一,参与增殖、凋亡、迁移、新生血管形成等一系列细胞生物行为。近年来诸多研究表明STAT3在骨肉瘤的发生发展中起关键作用,是治疗骨肉瘤的一个潜在靶标,具有重要的价值和广阔的应用前景。该文综述了STAT3表达在骨肉瘤诊断、预后预测中的作用,以及STAT3对骨肉瘤细胞生物学功能的调控作用,总结了STAT3抑制剂在骨肉瘤靶向治疗中的研究进展,为日后对STAT3的深入研究提供参考。

关键词：信号转导和活化转录因子3 骨肉瘤 STAT3抑制剂

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关节镜下同种异体胫前肌肌腱重建膝关节前后交叉韧带损伤的疗效观察

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中国修复重建外科杂志 2009年第5期23卷 627-630页

作者：王洪孟春庆段德宇杨述华叶树南邵增务华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科武汉430022

目的探讨关节镜下同种异体胫前肌肌腱移植重建前交叉韧带(anterio rcruciate ligament,ACL)和后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)的手术方法及疗效。方法2005年2月-2006年7月,收治10例ACL及PCL同时断裂患者。男7例,女3例;年... 详细信息

目的探讨关节镜下同种异体胫前肌肌腱移植重建前交叉韧带(anterio rcruciate ligament,ACL)和后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)的手术方法及疗效。方法2005年2月-2006年7月,收治10例ACL及PCL同时断裂患者。男7例,女3例;年龄18～45岁,平均30.2岁。左膝6例,右膝4例。均有明确外伤史。病程1～3周,平均1.8周。关节镜下取26～28cm同种异体胫前肌肌腱重建ACL及PCL。术后伸膝位支具制动4周,4周后开始0～90°主动屈膝功能锻炼,6周后主动屈膝>90°。结果手术均顺利完成,术中未发生血管、神经损伤。手术时间90～110min,平均100min。切口均Ⅰ期愈合,无早期并发症发生。10例均获随访,随访时间12～15个月,平均13.5个月。行走步态正常,关节活动度为0～135°。10例膝关节前抽屉试验及内外侧应力试验均为阴性;后抽屉试验8例阴性,2例分级Ⅰ度。2例术后4d出现膝关节积液,经抽液和注射透明质酸钠后消失。Lysholm膝关节功能评分由术前(24.89±5.39)分升至术后12个月的(96.00±4.59)分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论关节镜下同种异体胫前肌肌腱重建ACL及PCL,手术时间短、并发症少、临床效果好。

关键词：前交叉韧带损伤后交叉韧带损伤同种异体胫前肌肌腱移植关节镜修复重建

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