检索结果-南通市图书馆

作者：孙腾飞浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的探讨MCM2基因对卵巢癌增殖、迁移和侵袭的影响,结合体内外实验研究毛蕊异黄酮(calycosin,CA)与双去甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin,BDMC)的联合作用通过干预MCM2靶点对卵巢癌增殖迁移和侵袭的影响,阐明CA与BDMC影响卵巢癌增殖... 详细信息

目的探讨MCM2基因对卵巢癌增殖、迁移和侵袭的影响,结合体内外实验研究毛蕊异黄酮(calycosin,CA)与双去甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin,BDMC)的联合作用通过干预MCM2靶点对卵巢癌增殖迁移和侵袭的影响,阐明CA与BDMC影响卵巢癌增殖迁移和侵袭的部分机制。方法第一部分:下载GSE18520、GSE52460、GSE54388GEO数据芯片通过数据归一化筛选获得卵巢癌组织与正常卵巢组织差异基因,将差异基因使用KEGG基因富集分析,构建PPI网络和模块分析,选择关键基因进行生存分析,确定所要研究的关键基因。通过慢病毒对SKOV3和Hey卵巢癌细胞的MCM2进行敲低和过表达。将SKOV3和Hey卵巢癌细胞分为敲低细胞组(Control组、sh-NC组、sh-MCM2组)及过表达细胞组(Control 组、OE-NC 组、OE-MCM2 组)。通过Western Blot和RT-qPCR分别检测MCM2敲低和过表达后MCM2蛋白和mRNA表达水平;CCK-8实验检测细胞增殖变化;克隆形成检测细胞集落形成能力和增殖能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的变化;Western Blot和RT-qPCR分别检测细胞周期 CDK4、Cyclin D1、P21 和 EMT 相关 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 的蛋白和mRNA表达的变化。第二部分:通过挖掘TCMSP数据库筛选黄芪和莪术的有效成分与MCM2蛋白分子对接,各选取黄芪和莪术对接结合能最低的生物活性成分CA和BDMC。在SKOV3和Hey卵巢癌细胞中用CCK-8检测各浓度CA与BDMC对细胞的增殖影响和CA与BDMC联合给药效果,计算联合系数(CI)评估协同效应,Western Blot检测CA与BDMC协同对MCM2蛋白表达影响。将SKOV3和Hey卵巢癌细胞分为敲低细胞组(sh-NC 组、sh-NC+CA 组、sh-NC+BDMC 组、sh-NC+CA+BDMC 组、sh-MCM2 组、sh-MCM2+CA 组、sh-MCM2+BDMC 组、sh-MCM2+CA+BDMC 组)及过表达细胞组(OE-NC 组、OE-NC+CA 组、OE-NC+BDMC 组、OE-NC+CA+BDMC 组、OE-MCM2组、OE-MCM2+CA 组、OE-MCM2+BDMC 组、OE-MCM2+CA+BDMC 组)。通过克隆形成检测细胞集落形成能力和增殖能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭的变化;Western Blot检测CDK4、Cyclin D1、P21、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达的变化。选取健康的BALB/c裸鼠40只,皮下注射Hey细胞构建荷瘤裸鼠模型,待长出瘤体后分为Control组、DDP组、CA组、BDMC组、CA+BDMC组。给药期间每3d用游标卡尺测量肿瘤长径(L)和肿瘤短径(W)计算肿瘤体积。给药15d后剖取肿瘤组织,对肿瘤重量称重计算抑瘤率;免疫组化实验检测荷瘤裸鼠瘤体MCM2、CDK4、Cyclin D1、P21变化;Western Blot实验检测 MCM2、CDK4、Cyclin D1、P21、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 蛋白表达的变化。结果第一部分:(1)筛选获得差异基因229个,基因富集、PPI网络构建、模块分析、生存分析后确定关键靶点基因为MCM2。(2)与Control和sh-NC组比较,sh-MCM2组MCM2蛋白与mRNA的水平下降;与Control和OE-NC组比较,OE-MCM2组MCM2蛋白与mRNA的水平上升。(3)与Control和sh-NC组比较,sh-MCM2组细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力下降、G0/G1期比例上升;与Control和OE-NC组比较,OE-MCM2组细胞的增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力上升、G0/G1期比例下降。(4)与Control和sh-NC组比较,sh-MCM2组细胞的CDK4、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin 蛋白和 mRNA 水平下降,P21、E-cadherin 蛋白和mRNA水平上升;与Control和OE-NC组比较,OE-MCM2组细胞的CDK4、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin 蛋白和 mRNA 水平上升,P21、E-cadherin 蛋白和 mRNA 水平下降。第二部分:(1)筛选获得黄芪的活性成分为毛蕊异黄酮(CA),莪术的活性成分为双去甲氧基姜黄素(BDMC)。(2)CA与BDMC联合给药在抑制卵巢癌细胞增

关键词：卵巢癌 MCM2 毛蕊异黄酮双去甲氧基姜黄素协同效应增殖转移

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HER2/neu-IL12融合基因疫苗的构建及其对小鼠乳腺癌的预防和治疗作用

HER2/neu-IL12融合基因疫苗的构建及其对小鼠乳腺癌的预防和治疗...

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作者：徐腾飞青岛大学

学位级别：硕士

目的:(1)构建人表皮生长因子受体(HER2/neu)胞外区基因的真核表达质粒(pcDNA6-HER2/neu);转染小鼠乳腺癌细胞(EMT6),获得其稳定表达细胞株(EMT6/HER2/neu)。(2)构建HER2neu、IL12融合基因重组核酸疫苗pcDNA6-HER2/neu-IL12。(3)将该疫苗在HER2/neu阳性乳腺癌小鼠体内应用,探讨其预防和治疗作用。方法:(1)HER2/neu重组质粒的构建:用PCR从含HER2/neu全长基因的pcDNA3.1-HER2/neu质粒上扩增HER2/neu胞外区(ECD)基因片段;经酶切、连接构建pcDNA6-HER2/neu,通过酶切及测序鉴定;(2)建立HER2/neu阳性小鼠乳腺癌细胞株(EMT6/HER2/neu):以PEI法将pcDNA6-HER2/neu导入小鼠乳腺癌细胞(EMT6)中,经杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选,获得抗性克隆EMT6/HER2/neu;用RT-PCR检测EMT6/HER2/neu中HER2/neu mRNA,免疫组化法检测其HER2/neu蛋白的表达。(3)pcDNA6-HER2/neu-IL12的构建:用PCR方法从pcDNA6-IL12质粒上扩增IL12序列;同样进行酶切、连接、转化、筛选;将其插入pcDNA6-HER2/neu质粒中HER2/neu基因下游,获得pcDNA6-HER2/neu-IL12;对其进行酶切及测序鉴定。(4)pcDNA6-HER2/neu-IL12对HER2/neu阳性小鼠乳腺癌的防治作用:①预防组:选6-8周体重16-18g昆明种小鼠30只,随机分成5组。Ⅰ组:pcDNA6-HER2/neu组;Ⅱ组:pcDNA6-IL12组;Ⅲ组:pcDNA6-HER2/neu+pcDNA6-IL12组;Ⅳ组:pcDNA6-HER2/neu-IL12组;Ⅴ组:生理盐水组。各组小鼠每隔两周在其股四头肌注射相应质粒(1ug/ul)或生理盐水50ul,共免疫3次。于最后免疫两周后在小鼠右胸皮下接种EMT6/HER2/neu细胞(2×10～6个/ml,100ul/只),分别于第7、10、14、17、20、24天测量肿瘤大小,第24天处死小鼠,剥取瘤体、脾脏并称重;分离小鼠脾淋巴细胞,分别检测其特异性淋巴细胞增生反应(MTT法)、淋巴细胞杀伤活性(LDH释放法)和特异性IFN-γ释放(ELISA)等细胞免疫学指标。②治疗组:另选6-8周体重16-18g昆明种小鼠30只,分组方法同预防组(命名为A、B、C、D和E)。全部小鼠于右胸皮下接种EMT6/HER2/neu细胞(2×10～6个/ml,100ul/只)致瘤,分别于第7、10、14、17、20天给予瘤内注射相应质粒(1ug/ul)或生理盐水100ul,并测量肿瘤大小,第24天处死小鼠,检测的免疫学指标同预防组。结果:(1)HER2/neu PCR产物大小与预期一致(1896bp);pcDNA6-HER2/neu经酶切、琼脂糖凝胶电泳后,可见与PCR产物大小相同的片段;DNA测序结果显示,pcDNA6-HER2/neu中HER2/neu基因序列无误,读框正确。(2)用RT-PCR可在EMT6/HER2/neu中检测到HER2/neu mRNA;经免疫组化染色证实,EMT6/HER2/neu中有HER2/neu的阳性信号。(3)对pcDNA6-HER2/neu-IL12融合基因重组质粒的酶切及测序结果表明,HER2/neu和IL12两段基因序列无误,连接方向及读框正确。(4)动物实验结果显示,单独应用HER2/neu和IL12基因疫苗或二者联合应用对HER2/neu阳性乳腺癌(预防组Ⅰ-Ⅳ;治疗组A-D)均获得显著的预防和治疗作用;而应用pcDNA6-HER2/neu-IL12表现更为强大的抗肿瘤作用;多项免疫学指标检测结果显示,pcDNA6-HER2/neu-IL12可显著提高实验小鼠特异性抗肿瘤细胞免疫力。pcDNA6-HER2/neu-IL-12的抗肿瘤效应与pcDNA6-HER2/neu和pcDNA6-IL12联合应用组相当。该融合基因疫苗比两种重组质粒联合应用具有易制备、使用简单、成本低廉等优点。结论:本研究成功地构建了HER2/neu胞外区真核表达质粒(pcDNA6-HER2/neu)和HER2/neu-IL12融合基因疫苗(pcDNA6-HER2/neu-IL12);获得了稳定表达HER/neu基因的小鼠乳腺癌细胞株(EMT6/HER2/neu);pcDNA6-HER2/neu-IL12对HER2/neu阳性乳腺癌具有理想的预防和治疗作用。

关键词： HER2/neu IL12 核酸疫苗乳腺癌

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西安市浐河湿地公园景观生态规划设计研究

西安市浐河湿地公园景观生态规划设计研究

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作者：王腾飞河南农业大学

学位级别：硕士

湿地在自然界中拥有极高的生物多样性,其生态系统的稳定健康发展能持续提供小气候调节、防洪蓄水、水体净化等功能效益。随着城市化进程、人类人口和经济高速发展,湿地资源受到的开发利用和干扰愈发强烈。城郊湿地受到城市和乡村发展的... 详细信息

湿地在自然界中拥有极高的生物多样性,其生态系统的稳定健康发展能持续提供小气候调节、防洪蓄水、水体净化等功能效益。随着城市化进程、人类人口和经济高速发展,湿地资源受到的开发利用和干扰愈发强烈。城郊湿地受到城市和乡村发展的双重影响,湿地被围垦造田、牧渔养殖、交通和建设用地等侵占,生产和生活垃圾、工业废水等纷纷把湿地当作承泄地和填埋场,湿地的正常功能被严重破坏,自然生态环境正在退化甚至丧失。随着我国生态文明建设的推进,对湿地的保护和修复也越来越重视,开展了一系列的生态工程、修复工程、保护工程,并划定湿地自然保护区来保护重要的湿地资源。其中湿地公园是湿地保护的重要形式之一,能有效保护湿地资源避免受到更大范围和更高强度的破坏,同时湿地公园具有科普科教、休闲游憩的功能,可以有效提高人们保护湿地的意识,协调湿地与人的发展矛盾。通过相关理论和案例的学习与分析,结合资料搜集、现场调研、无人机正射影像采集和高精度卫星影像对场地进行机解和人工目视解译,综合前期研究基础,在西安市浐河湿地公园生态环境保护和修复的探索下,基于浐河湿地公园现状资源和基础条件,将场地分为建设用地、交通用地、裸地、耕地、林地、草地、水体、坑塘和滩涂等9个一级地类及包含的39个二级地类,并分别对各地类进行现状分析。其中耕地、林地和坑塘是优势土地利用类型,坑塘现状问题较多,河流和滩涂等湿地也急需与场地各地类进行统筹优化。以生态保护优先、尊重自然修复、以人为本、整体统筹和地域适应性以及景观美学为原则,修复湿地各地类生态环境,挖掘地域历史文化,提升湿地景观效果,形成一个满足人们休憩娱乐、科普科教、展示特色文化的窗口以及成为城市和乡村之间的绿色保护屏障。对西安市浐河湿地公园景观生态规划设计从总体、分区、专项等规划设计和修复进行研究:(1)总体规划设计:根据场地的湿地特点及不同的节点,总体构成“两带汇一脉,三心协多点”的规划结构,并形成以湿地科普教育和游憩、自然风光欣赏和体验、生态农业体验和观光功能为主的十个功能分区。(2)分区规划设计:根据场地自然资源条件,对不同的功能分区规划设计节点,修复景观环境的同时优化提升景观空间。(3)专项规划设计:对驳岸、坑塘和湿地植物进行修复设计,对水体网络、林带绿廊、交通游览及基础设施等进行规划设计布局。通过将理论研究、无人机正射影像采集和实地调研、高清卫星影像等相结合进行土地利用解译,并对场地问题进行分析,从西安市浐河湿地公园的总体、分区和专项上进行生态保护、修复以及景观提升和利用,提出城郊型湿地公园规划设计建设的策略,丰富了研究理论,对城郊湿地公园的发展提供借鉴和参考。

关键词：湿地公园生态保护生态修复可持续发展规划设计

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基于系统动力学的闭环供应链电子废弃物回收模式研究

基于系统动力学的闭环供应链电子废弃物回收模式研究

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作者：王腾飞哈尔滨理工大学

学位级别：硕士

随着电子信息产业和先进制造技术的不断发展,电子废弃物的数量也在逐年增加,这给环境保护带来了巨大的压力。与此同时,社会经济的发展和公众环保意识的提升,使得人们越来越注重资源的循环利用和生态环境的可持续发展。电子废弃物中蕴藏... 详细信息

随着电子信息产业和先进制造技术的不断发展,电子废弃物的数量也在逐年增加,这给环境保护带来了巨大的压力。与此同时,社会经济的发展和公众环保意识的提升,使得人们越来越注重资源的循环利用和生态环境的可持续发展。电子废弃物中蕴藏着多种珍贵的资源,具有极高的回收再利用价值。因此如何实现电子废弃物的资源化回收利用已成为全社会关注的焦点问题。本文首先介绍了我国电子废弃物的回收处理背景,通过对现有相关文献的归纳和总结,分析系统动力学及其在电子产业回收领域的应用研究现状,进而提出了合理设计和应用闭环供应链回收模式的必要性。在此基础上,构建了三种电子废弃物回收模式,分别是制造商主导回收模式、零售商主导回收模式和第三方企业主导回收模式;并引入系统动力学方法对三种回收模式模型的建模目的、假设以及系统边界等进行分析,运用Vensim软件构建相应的因果回路图以及系统动力学流图。采用参数估计测试、极端条件测试、敏感性测试等方法对模型的有效性进行了验证,测试结果表明模型能够严谨地反应现实规律,可以用来进行模拟仿真分析。结合格力集团电子废弃物回收处理情况的实际案例,分析实施三种回收模式对电子废弃物回收处理系统的影响。通过对总收益、市场份额以及电子废弃物回收效果的对比分析,评价了实施制造商主导、零售商主导以及第三方企业主导三种回收模式的政策效果。研究结果表明:在市场需求随机的情况下,制造商主导回收模式的总收益是高于零售商和第三方企业的;而第三方企业主导回收模式的市场份额以及电子废弃物的回收效果是优于制造商和零售商的。最后,根据仿真结果对各回收主体提出相应的政策实施建议。

关键词：电子废弃物系统动力学供应链管理闭环供应链回收模式

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虚假注资行为审验与监管研究 ——基于利益相关者视角

虚假注资行为审验与监管研究 ——基于...

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作者：邬方方贵州财经大学

学位级别：硕士

我国是大陆法系国家，奉行较为严格的法定注册资本制度。验资是我国特有的法定业务，根据相关法律法规及独立审计准则的要求，所有需要设立、变更注册资本的公司或企业在注册登记前均要经过专业的注册会计师对其注册资本进行审验。目的... 详细信息

我国是大陆法系国家，奉行较为严格的法定注册资本制度。验资是我国特有的法定业务，根据相关法律法规及独立审计准则的要求，所有需要设立、变更注册资本的公司或企业在注册登记前均要经过专业的注册会计师对其注册资本进行审验。目的是明确出资人的责任，保障债权人的利益，维护社会经济秩序。然而近年来虚报注资、虚假出资、抽逃出资的事件频发不止，致使债权人利益严重受损，扰乱了社会经济秩序。会计师事务所也屡遭虚假验资、注册会计师职业道德沦丧等问题的重创，诉讼频率逐年上升，公信力逐年下降。工商行政管理部门的监管力度在众多虚假注资的案件的发生上也显得十分无力。那么如何改变这种现状，俨然已成为当下非常重要的课题。本文就虚假注册资本行为为研究对象展开。从不同利益相关者角度出发，利用博弈的分析方法，找出影响虚假注资的行为产生的因素。进而对这些影响因素进行深入剖析，提出制止和管控虚假注资行为的措施。本文诣站在不同的利益相关者角度，俯视整体看个体，跳出个体观整体，以达到“跳出验资谈验资”、“跳出监管谈监管”的目的。本文第一部分是绪论，大体介绍了我国注册资本制度以及我国特殊的验资制度;第二部分介绍了验资的基本理论以及虚假注册资本行为的经济实质与法律实质;第三部分进入注册资本审验中的博弈分析阶段，是本文最核心的内容。该部分利用完全信息静态、动态博弈，以及混合战略博弈和不完全信息博弈方法找到了影响虚假注资行为的因素：工商行政管理部门的复核力度、复核质量，法律法规规定的惩罚成本，会计师事务所的验资态度等。最后从法律法规、工商行政管理部门、会计师事务所角度提出管控虚假注资行为的对策。

关键词：虚假注资验资利益相关者博弈监管

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两宋风云

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作者：袁腾飞

来源：南通市图书馆图书评论

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一种新型抗折调节材料的合成及性能研究

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现代化工 2015年第8期35卷 118-120页

作者：王文平江腾飞赵怀华合肥工业大学化学与化工学院安徽合肥230009

在对粉煤灰进行表面功能化（主要包括表面羟基化、偶联KH-570）的基础上，以聚乙二醇单甲醚丙烯酸酯（MPA）为聚合改性单体，过硫酸铵（APS）为引发剂，合成聚乙二醇单甲醚丙烯酸酯改性粉煤灰。研究结果表明，改性后的粉煤灰工作性能较... 详细信息

在对粉煤灰进行表面功能化（主要包括表面羟基化、偶联KH-570）的基础上，以聚乙二醇单甲醚丙烯酸酯（MPA）为聚合改性单体，过硫酸铵（APS）为引发剂，合成聚乙二醇单甲醚丙烯酸酯改性粉煤灰。研究结果表明，改性后的粉煤灰工作性能较好，28d抗压强度提高4％～8％，28d抗折强度提高5％～12％，当改性粉煤灰质量占胶凝材料质量为15％时，抗压及抗折强度达到最大。

关键词：粉煤灰聚乙二醇单甲醚丙烯酸酯水泥基复合材料抗折强度

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维普期刊数据库

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宁波市城市生活垃圾治理之价格应对策略研究

宁波市城市生活垃圾治理之价格应对策略研究

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作者：邬晓红华东师范大学

学位级别：硕士

随着我国经济的发展、人民生活水平的提高和城市人口的急剧增长,城市生活垃圾排放量也随之迅速激增。由于城市垃圾处理投资渠道单一,缺少必要的设施建设、运行和维护资金,处理设施严重不足,处理水平普遍不高,相当一部分城市土壤、水体... 详细信息

随着我国经济的发展、人民生活水平的提高和城市人口的急剧增长,城市生活垃圾排放量也随之迅速激增。由于城市垃圾处理投资渠道单一,缺少必要的设施建设、运行和维护资金,处理设施严重不足,处理水平普遍不高,相当一部分城市土壤、水体、大气受到生活垃圾的污染,使生态环境和人民群众生活受到影响。解决城市生活垃圾问题已成为社会关注的热点问题。对此,本课题将以宁波市为实例,从宁波市城市生活垃圾收集、运输、焚烧和填埋等各环节处理入手,分析存在问题的原因,提出以经济手段之一的价格调控手段治理城市生活垃圾,引导城市生活垃圾减量化、资源化及市场化方向发展,促进城市生活垃圾行业产业化、市场化。本课题共分五章: 第一章为绪论。本章通过对宁波市城市生活垃圾处理作深入细致的现场调查和资料收集的基础上,对城市生活垃圾的排放量、成分特性、物流体系及其管理政策等现状进行深层次解剖分析研究,找出了城市生活垃圾处理存在的问题,即:管理体制被动性、资金渠道单一性、对策视点局限性、资源化程度不到位和法规体系不健全。在此基础上,提出解决城市生活垃圾的问题的前提条件是必须建立科学的城市生活垃圾处理价格机制。第二章为改革宁波市城市生活垃圾处理价格机制之思考。本章分别从理论和实际角度对改革宁波市城市生活垃圾处理价格机制之必要性、可行性进行深层次解剖分析,指出现行宁波市城市生活垃圾处理价格机制存四大主要问题,即收费性质模糊、收费标准偏低、收费范围狭窄、收费载体缺乏。提出了改革城市生活垃圾价格机制应达到目标及其基本原则,其基本原则主要有:①建立适当的收费载体,提高征收管理效益;②改革城市生活垃圾价格制度,要有利于城市生活垃圾产业化、市场化方向发展;③改革城市生活垃圾价格制度,要利于提高城市生活垃圾资源化利用程度;④改革城市生活垃圾价格制度,要引导城市生活垃圾减量化方向发展;⑤实行分步到位价格政策的原则;⑥加强收费的清理整顿,减轻企业和居民的经济负担第三章为构建宁波市城市生活垃圾处理价格定价模型及其模式。本章介绍了国内外城市生活垃圾处理价格体系情况,意在取他人所长,补我之短。在此基础上,构筑了宁波市城市生活垃圾处理定价模型,并对影响价格形成的成本、利润、劳动生产率、政府价格补贴、税金和价格调整周期等因素进行了剖析,并利用城市生活垃圾处理成本调查成果,提出建立宁波市城市生活垃圾处理价格机制分步

关键词：生活垃圾治理价格对策

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中药附子抑制乳腺癌细胞生长的机制研究

中药附子抑制乳腺癌细胞生长的机制研究

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作者：邬璠昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]我国女性恶性肿瘤发病谱之首是乳腺癌,在我国乳腺癌的发病率及死亡率呈上现升趋势,也是最常见的女性好发恶性肿瘤之一。中医认为乳腺癌的本质是阳虚不化、阴毒积聚。所以,提倡温阳药物的应用。附子作为临床常用温阳药,被广泛地... 详细信息

[目的]我国女性恶性肿瘤发病谱之首是乳腺癌,在我国乳腺癌的发病率及死亡率呈上现升趋势,也是最常见的女性好发恶性肿瘤之一。中医认为乳腺癌的本质是阳虚不化、阴毒积聚。所以,提倡温阳药物的应用。附子作为临床常用温阳药,被广泛地应用于乳腺癌的中药治疗。但附子治疗乳腺癌的相关分子机制并不明确。为了进一步明确附子与乳腺癌的关系,我们从流行病学和细胞学这两个宏观到微观的层次寻找证据,以期获得更全面的认识。研究附子通过相应的信号转导途径抑制乳腺癌细胞生长的分子机制,将为深入认识附子在乳腺癌治疗中的作用增加理论支持,也有助于附子在临床上的精准应用和发展,为中药在肿瘤治疗中的应用拓展道路、提供依据。[方法]1.附子种植分布与乳腺癌发病之间关系的流行病学调查。2018年初,我们通过医院病案室,系统收集了我校第一附属医院、第二附属医院、第三附属医院(云南省肿瘤医院)2017年首次入院治疗的乳腺癌病人病历,排除了重复病例及省外病例,开展云南省附子种植分布与乳腺癌发病之间关系的流行病学调查研究。2.细胞增殖检测。用浓度梯度为0.05mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL和0.8mg/mL的附子处理细胞;通过MTT分别在2h、4h、6h、12h和24h等不同时间点,检测了乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF10A的增殖情况。3.细胞划痕实验和transwell实验检测附子对乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF10A迁移的影响。4.运用Annexin V-FITC/PI和Hoechst 33342/PI染色来检测附子是否是通过凋亡途径抑制了乳腺癌细胞增殖。实验中,阴性对照为DMSO作用于MDA-MB-231细胞;阳性对照为50μM H2O2处理MDA-MB-231细胞;实验组分别用0.05mg/mL和0.1mg/mL附子处理MDA-MB-231细胞,作用时间都为24h。同样分组检测Caspase3和Caspase9活性。5.分别用0.05mg/mL和0.1mg/mL附子处理MDA-MB-231细胞,运用流式细胞仪和共聚焦显微镜检测细胞内DCFH-DA的荧光强度,以便分析乳腺癌细胞的ROS水平。6.通过real time PCR检测附子对凋亡内源通路和外部通路中涉及到的一系列蛋白表达的影响。以检测附子是否在ROS介导下诱导了乳腺癌细胞的凋亡。[结果]1.流行病学调查表明附子分布区域乳腺癌发病率明显低于非附子分布区域。2.细胞实验证明附子抑制了乳腺癌细胞的恶性表型但对正常乳腺细胞没有影响。3.附子对乳腺癌细胞的迁移有抑制作用但对正常乳腺细胞没有影响。4.附子能够诱导乳腺癌细胞凋亡,随附子浓度的增加,细胞凋亡率增加。5.适度的附子能够提高乳腺癌细胞的ROS水平,ROS作为第二信使触发了细胞凋亡的内源通路或者外部通路,诱使乳腺癌细胞凋亡,从而发挥治疗乳腺癌的作用。[结论]本课题利用乳腺癌细胞模型检测附子作用后细胞凋亡与氧化还原状态等一系列指标的变化,研究附子抑制乳腺癌细胞生长的分子机制、凋亡通路以及ROS在其中的作用。以期揭示附子通过改变乳腺癌细胞氧化还原状态,诱导乳腺癌细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞恶性表型的分子机制,有助于更全面地认识附子在乳腺癌治疗中发挥的作用,为附子科学合理地应用与优化提供依据,也有助于其应用潜力地发掘,同时为附子有效成分的确定寻找线索。也为“ROS+ROS”策略在中药治疗肿瘤中的开发应用探索道路。

关键词：附子乳腺癌凋亡活性氧

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云南省昭通市2004年国民经济和社会发展报告

云南省昭通市2004年国民经济和社会发展报告

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2004年

作者：邬永飞

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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汇雅图书（南通市图书馆）

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