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基于“柔肝养筋”理论探讨小鼠肝脏来源外泌体对膝骨关节炎模型小鼠膝关节软骨的影响

中医正骨 2024年第3期36卷 7-14,22页

作者：廖太阳马振源康俊峰杨楠王培民邢润麟江苏省中医院江苏南京210029

目的:基于“柔肝养筋”理论探讨小鼠肝脏来源外泌体对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型小鼠膝关节软骨的影响。方法:以超速离心法从3月龄(年轻)和22月龄(老年)C57BL/6雄性小鼠肝脏提取外泌体。将48只7周龄SPF级C57BL/6J雄性小... 详细信息

目的:基于“柔肝养筋”理论探讨小鼠肝脏来源外泌体对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型小鼠膝关节软骨的影响。方法:以超速离心法从3月龄(年轻)和22月龄(老年)C57BL/6雄性小鼠肝脏提取外泌体。将48只7周龄SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,每组12只。KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组小鼠采用前交叉韧带横断术进行KOA造模,Sham组小鼠接受手术但不离断前交叉韧带。术后14 d开始,向Young-EVs组和Aged-EVs组小鼠膝关节腔分别注射10μL年轻和老年小鼠肝脏来源外泌体,每周2次,连续注射4周;Sham组和KOA组用同样方法向膝关节腔注射10μL PBS溶液。外泌体干预结束后,对各组小鼠造模侧膝关节进行X线检查;苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色后进行组织病理学观察,并采用国际骨关节炎研究协会(Osteoarthritis Research Society International,OARSI)骨关节炎软骨组织病理学评价系统及Mankin病理评分系统评价小鼠软骨退变程度;免疫组化法检测软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ,COLⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)13和一种具有血小板反应蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs,ADAMTS)5表达量。结果:①小鼠膝关节X线检查结果。Sham组小鼠膝关节关节间隙正常,关节面平整光滑,软骨完整,关节边缘无骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为0级;KOA组小鼠膝关节间隙未见明显狭窄,关节面粗糙,软骨出现部分缺损,关节边缘可见明显骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅱ级;Young-EVs组小鼠膝关节间隙轻微变窄,关节表面稍有粗糙表现,软骨缺损较KOA组减少,关节边缘可见轻微骨赘形成,Kellgren-Lawrence分级为Ⅰ级;Aged-EVs组小鼠膝关节间隙、关节表面粗糙程度、软骨缺损情况、关节内游离体数量较KOA组更为严重,Kellgren-Lawrence分级为Ⅲ级。②小鼠膝关节软骨组织病理学观察结果。4组小鼠膝关节软骨OARSI评分和Mankin评分组间总体比较,差异均有统计学意义[OARSI评分:(0.417±0.376)分,(4.500±0.632)分,(2.417±0.492)分,(5.417±0.492)分,F=116.800,P=0.000;Mankin评分:(1.083±0.665)分,(7.250±0.880)分,(3.583±0.917)分,(8.833±0.683)分,F=117.100,P=0.000]。KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均高于Sham组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均低于KOA组(P=0.000,P=0.000);Aged-EVs组的OARSI评分和Mankin评分均高于KOA组、Young-EVs组(P=0.025,P=0.000;P=0.015,P=0.000)。③小鼠膝关节软骨组织免疫组织化学检测结果。4组小鼠膝关节软骨中COLⅡ和ACAN阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[COLⅡ:(40.050±2.324)%,(26.083±1.119)%,(23.317±2.599)%,(16.717±2.479)%,F=118.500,P=0.000;ACAN:(51.500±3.191)%,(17.700±3.415)%,(19.383±3.924)%,(12.300±1.908)%,F=185.500,P=0.000]。KOA组、Young-EVs组及Aged-EVs组的COLⅡ和ACAN阳性表达面积比均低于Sham组(P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000);Young-EVs组与KOA组COLⅡ、ACAN阳性表达面积比的组间差异均无统计学意义(P=0.167,P=0.799);Aged-EVs组的COLⅡ和ACAN阳性表达面积比均低于KOA组、Young-EVs组(P=0.000,P=0.000;P=0.039,P=0.005)。4组MMP13和ADAMTS5阳性表达面积比组间总体比较,差异均有统计学意义[MMP13:(11.733±2.191)%,(46.150±6.237)%,(34.417±5.027)%,(57.233±4.049)%,F=106.600,P=0.000;

关键词：外泌体软骨骨关节炎,膝小鼠动物实验

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王培民教授从脾论治膝骨关节炎的经验

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中国中医骨伤科杂志 2024年第5期32卷 88-91,96页

作者：王泽恩张农山许华宁茆军邢润麟廖太阳陈智宇于利凯田地王培民南京中医药大学附属医院南京210029

膝骨关节炎是一种慢性退行性疾病,其主要临床表现为膝关节疼痛与功能障碍。王培民教授认为,膝骨关节炎的病机多以脾肾阳虚为本,寒湿痹阻为标,其发生发展与肌肉关系密切,并基于“脾主肌肉”等中医理论,形成了从脾论治膝骨关节炎的治疗理... 详细信息

膝骨关节炎是一种慢性退行性疾病,其主要临床表现为膝关节疼痛与功能障碍。王培民教授认为,膝骨关节炎的病机多以脾肾阳虚为本,寒湿痹阻为标,其发生发展与肌肉关系密切,并基于“脾主肌肉”等中医理论,形成了从脾论治膝骨关节炎的治疗理念,遣方用药时强调温补脾肾、健脾祛湿、固护脾胃。

关键词：膝骨关节炎脾肾阳虚脾主肌肉从脾论治

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基于柔肝养筋理论研究肝外泌体减少膝骨关节炎软骨凋亡及木瓜的疗效机制

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中华中医药杂志 2022年第10期37卷 6031-6036页

作者：廖太阳李晓辰张力王培民邢润麟南京中医药大学附属医院江苏省中医院南京210029

目的:研究衰老肝细胞外泌体对炎症软骨细胞的影响及木瓜的干预效应。方法:用0.3 mmol/L过氧化氢(H2O2)诱导肝细胞衰老,以木瓜煎剂冻干粉干预小鼠肝原代细胞,采用CCK8法检测细胞存活率,分组为正常组、衰老组、木瓜组,Western blot和qRT-... 详细信息

目的:研究衰老肝细胞外泌体对炎症软骨细胞的影响及木瓜的干预效应。方法:用0.3 mmol/L过氧化氢(H2O2)诱导肝细胞衰老,以木瓜煎剂冻干粉干预小鼠肝原代细胞,采用CCK8法检测细胞存活率,分组为正常组、衰老组、木瓜组,Western blot和qRT-PCR检测肝细胞衰老相关p16、p21、p53蛋白及基因表达;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性。超速离心法提取肝细胞分泌的外泌体,电镜、粒径分析、标志蛋白CD9、HSP70、TSG101鉴定外泌体。提取小鼠软骨细胞,LPS刺激以构建膝骨关节炎(KOA)炎症细胞模型,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量验证炎症模型。PKH67荧光检测外泌体摄取情况。将各组肝细胞外泌体干预LPS致炎软骨细胞,Western Blot和qRT-PCR检测凋亡相关Bax、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9蛋白及基因表达水平。结果:外泌体呈椭圆形或圆形的囊泡样结构,直径约30~130 nm。衰老组p16、p21、p53蛋白、基因及LDH含量表达显著高于正常组(P<0.05),低于木瓜组(P<0.05)。软骨细胞上清液中TNF-α和IL-1β的含量均在LPS刺激后较刺激前升高(P<0.05)。木瓜组肝细胞外泌体干预抑制LPS诱导所致的促凋亡蛋白Bax、Caspase-3和Caspase-9表达水平的上升(P<0.05),同时升高抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05)。结论:木瓜具有减缓肝细胞衰老及损伤的功能,衰老肝细胞外泌体加剧炎症软骨细胞凋亡,经木瓜干预的肝细胞外泌体可以减少软骨细胞凋亡,从而发挥保护软骨细胞的功效。

关键词：柔肝养筋衰老外泌体软骨细胞木瓜

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白芍总苷经活性氧-线粒体途径改善骨关节炎软骨细胞自噬性死亡

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医学研究与战创伤救治 2023年第4期36卷 337-342页

作者：廖太阳李晓辰杨楠茆军王培民邢润麟南京中医药大学附属医院(江苏省中医院)骨伤科南京210029

目的探讨白芍总苷(TGP)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导小鼠关节软骨细胞(MACs)的保护作用及可能机制。方法体外培养MACs细胞并通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定;CCK-8检测TGP对MACs细胞活性的影响,根据检测结果确定后续实验的... 详细信息

目的探讨白芍总苷(TGP)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导小鼠关节软骨细胞(MACs)的保护作用及可能机制。方法体外培养MACs细胞并通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定;CCK-8检测TGP对MACs细胞活性的影响,根据检测结果确定后续实验的TGP剂量范围;采用10 ng/mL的IL-1β构建MACs细胞OA模型,予以不同剂量TGP(10、20及50μmol/L)处理细胞48 h,分组为:空白组,模型组,低、中、高剂量TGP干预组,DCFH-DA荧光探针检测MACs细胞中ROS荧光强度;JC-1荧光探针观察MACs细胞线粒体电位变化;流式检测MACs细胞死亡率;RT-PCR检测Beclin 1、LC3、MMP-3和MMP-13基因表达水平。结果与空白组细胞死亡率[(6.58±1.65)%]比较,模型组[(26.77±0.93)%]显著上升(P<0.05),TGP干预后,细胞死亡率显著下降;与空白组ROS荧光强度[(1.90±0.56)%]比较,模型组[(39.10±0.36)%]显著增强(P<0.05),应用TGP后ROS荧光强度显著下降(P<0.05);与空白组比较,模型组线粒体膜电位下降,而TGP组线粒体膜电位较模型组上升(P<0.05);此外,模型组Beclin 1及LC3 mRNA表达水平较空白组降低,而TGP组较模型组升高,差异具有统计学意义(P<0.05);模型组MMP-3及MMP-13 mRNA表达水平较空白组升高,而TGP组较模型组降低(P<0.05)。结论白芍总苷可通过活性氧-线粒体途径改善骨关节炎软骨细胞自噬性死亡,发挥软骨保护功效。

关键词：白芍总苷活性氧线粒体小鼠关节软骨细胞骨关节炎

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基于中医整体观对骨质疏松椎体骨折强化术疗效与脊柱矢状面平衡关系的研究

基于中医整体观对骨质疏松椎体骨折强化术疗效与脊柱矢状面平衡关...

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作者：邢润麟广州中医药大学

学位级别：硕士

目的：1.研究脊柱-骨盆矢状面平衡对骨质疏松性椎体骨折椎体强化术疗效的影响。2.探讨各平衡参数与骨质疏松性椎体骨折椎体强化术疗效之间的关系。3.基于上述研究,探讨中医学传统理论对骨质疏松性椎体骨折治疗的指导作用。方法：1.收集2... 详细信息

目的：1.研究脊柱-骨盆矢状面平衡对骨质疏松性椎体骨折椎体强化术疗效的影响。2.探讨各平衡参数与骨质疏松性椎体骨折椎体强化术疗效之间的关系。3.基于上述研究,探讨中医学传统理论对骨质疏松性椎体骨折治疗的指导作用。方法：1.收集2011年6月至2013年6月在广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科住院,临床诊断为骨质疏松性椎体压缩性骨折、并于住院期间接受了椎体成形术的患者。共有68例患者获得完整的手术前后影像学资料及随访问卷评分而纳入。采用Barrey的SVA相对值法将病例分为三组：A组(正常平衡组)、B组(代偿平衡组)、C组(失平衡组)。其中A组共32例,男13例,女19例;B组共25例,男7例,女18例;C组共11例,男3例,女8例。记录随访12-18个月的①视觉模拟疼痛评分(visual analogue scale pain score, VAS)评价疼痛情况;②日常生活活动能力(ADL)量表(Barthel指数)评价患者日常活动功能;③Berg平衡量表评价患者平衡控制能力;④继发新鲜椎体骨折及强化伤椎明显高度再次丢失者。2.测量上述患者胸椎后凸角(thoracic kyphosis, TK)、胸腰段后凸角(thoracolumbar junction kyphosis, TLJ)、腰椎前凸角(lumbar lordosis, LL)、骨盆入射角(pelvic incidence, PI)、骶骨倾斜角(sacrum slope, SS)、骨盆倾斜角(pelvic tilt, PT).对比分析各平衡参数与骨质疏松性椎体骨折椎体强化术疗效之间的关系。结果：1.术后随访疼痛VAS评分对比,A组小于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05),B组小于C组,差异有统计学意义(P<0.05);日常活动能力对比A组优于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);B组优于C组,差异有统计学意义(P<0.05);机体平衡控制能力A、B组间无差异,但A、B组结果优于C组,差异差异有统计学意义(P<0.05)。2.A组中继发新鲜OVCFs发生率(4例/32例)低于B组(8例／25例)和C组(5例/11例);强化椎再塌陷A组未发现,B组(3例/25例)、C组(2例/11例)存在;随访中腰弯异常增大超过10。者,A组未发现,B组(10例／25例)、C组(8例/11例)存在。3.骨折的Cobb角越大,TK和TLJ增大,B组以明显增加的LL来维持矢状面平衡,其中LL增加角度约与伤椎Cobb角、TLJ增加角度相当;SS和PT的改变与伤椎Cobb以及TK, TLJ的变化值之间无显著相关性。C组各局部平衡参数的变化规律基本同B组,但LL增加角度明显不足骨折椎Cobb角及TLJ增加角度,疑与矢状面失平衡相关。结论：1.脊柱-骨盆矢状面平衡与OVCFs椎体强化术后疗效显著相关,矢状面平衡情况差的患者,术后残留顽固性疼痛、日常活动功能、机体平衡能力情况均相对较差。2.脊柱-骨盆矢状面平衡的异常对OVCFs椎体强化术后的继发新鲜OVCFs、伤椎再塌陷等有一定的预测价值。3.脊柱-骨盆矢状面平衡在异常状态下的代偿,以脊柱的代偿机制为主,其中LL的适应性改变尤为关键。PI作为固定的解剖参数,能够评估这种代偿能力。4.对于OVCFs的治疗,应当注重中医学整体观的指导。

关键词：脊柱-骨盆矢状面平衡骨质疏松性椎体压缩骨折椎体强化术疗效

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衰老视角阐释膝骨关节炎虚实夹杂病机的科学内涵

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世界中医药 2023年第23期18卷 3382-3385页

作者：邢润麟廖太阳王培民南京中医药大学附属医院/江苏省中医院南京210029

膝骨关节炎是骨伤科常见的退行性疾病,症状以膝关节疼痛、肿胀、活动受限为主。既往中医并无关节炎病名,对此病的认识多依据症状,早期归入“痹证”“膝痹”,后期归入“痿证”范畴。病因病机方面总体认为本病属于本虚标实,本虚主要是肝... 详细信息

膝骨关节炎是骨伤科常见的退行性疾病,症状以膝关节疼痛、肿胀、活动受限为主。既往中医并无关节炎病名,对此病的认识多依据症状,早期归入“痹证”“膝痹”,后期归入“痿证”范畴。病因病机方面总体认为本病属于本虚标实,本虚主要是肝肾不足、气血亏虚,标实主要是气血痹阻、寒凝痰结等。因此,在治法方面,各家经验虽然治法、用药不一,但多数强调治法的攻补兼施。膝骨关节炎本质上是骨关节的衰老,结合中医对于衰老的认识,以及现代医学对于组织细胞衰老的认识,从细胞衰老及其在组织间扩散的机制认识膝骨关节炎“虚实夹杂”的科学内涵,对临床和科研具有启发性意义。

关键词：膝骨关节炎膝痹退行性疾病虚实夹杂病机学细胞衰老科学内涵防治

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以痛为枢、截断扭转诊治膝骨关节炎理论研究

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南京中医药大学学报 2016年第6期32卷 501-505页

作者：王培民邢润麟南京中医药大学附属医院江苏南京210029

膝骨关节炎(KOA)是老年常见病,疼痛是KOA最常见的症状,超过65%的患者临床以疼痛为主要表现。目前KOA发病机制尚不十分明确,亦无特效治疗,保守治疗主要是从控制炎症和延缓软骨退变入手,目的是控制疼痛等临床症状。KOA属中医"骨痹""痹症"... 详细信息

膝骨关节炎(KOA)是老年常见病,疼痛是KOA最常见的症状,超过65%的患者临床以疼痛为主要表现。目前KOA发病机制尚不十分明确,亦无特效治疗,保守治疗主要是从控制炎症和延缓软骨退变入手,目的是控制疼痛等临床症状。KOA属中医"骨痹""痹症"范畴,回顾既往文献所报道的传统中医伤科学治疗KOA的经验,结合本院骨伤科经验,提出以控制KOA顽固性疼痛为核心的诊疗理念和以截断扭转、寒温并用为指导思想的治法体系。

关键词：膝骨性关节炎以痛为枢截断扭转寒温并用

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羌活-独活治疗膝骨关节炎的作用机制

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中国骨质疏松杂志 2022年第2期28卷 262-268页

作者：吴鹏时孝晴廖太阳王培民张农山黄正泉丁亮邢润麟茆军南京中医药大学附属医院江苏南京210029

目的基于网络药理学筛选羌活-独活的主要活性化学成分,查找其对应靶点,构建羌活-独活治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)潜在靶点网络,探讨羌活-独活治疗膝骨关节炎的作用机制。方法在中药系统药理数据库(TCMSP)中通过口服生物利... 详细信息

目的基于网络药理学筛选羌活-独活的主要活性化学成分,查找其对应靶点,构建羌活-独活治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)潜在靶点网络,探讨羌活-独活治疗膝骨关节炎的作用机制。方法在中药系统药理数据库(TCMSP)中通过口服生物利用度和药物相似性筛选羌活-独活的主要活性成分;再通过GeneCard、OMIM、PharmGkb、Therapeutic Targets和DrugBank数据库构建膝骨关节炎的靶标数据库;通过STRING数据库和Cytoscape 3.8.0构建潜在靶点及靶点间蛋白的相互关系;对核心靶点进行KEGG通路富集分析和GO生物学功能分析;通过Discovery Studio将羌活-独活的活性成分与KOA相关的前3个核心靶点进行分子对接。结果从羌活-独活中筛选出12个活性成分、16个防治膝骨关节炎的潜在靶点。网络药理学分析结果表明羌活-独活治疗膝骨关节炎的靶点主要涉及细胞凋亡、雌激素、P53、白细胞介素-17(IL-17)、糖基化终末产物及其受体(AGE-RAGE)等信号通路。分子对接显示羌活-独活活性成分与KOA相关的3个核心靶点均能较好对接。结论羌活-独活能够通过多成分、多通路、多靶点治疗膝骨关节炎,本研究为羌活-独活治疗膝骨关节炎提供了理论依据和新方向。

关键词：羌活-独活膝骨关节炎网络药理学作用机制分子对接

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相-枢辨证在中医骨伤科临床诊疗中的运用

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南京中医药大学学报 2019年第6期35卷 634-637页

作者：王培民邢润麟南京中医药大学附属医院/江苏省中医院

提出相-枢辨证的学术理念,相指时相、位相,枢指枢机。时相和位相的辨证强调骨伤科疾病中的局部辨证和整体辨证相结合,主要包括急性发作期的即时辨证和慢性迁延期的基础辨证相结合(时相),以及患部特异辨证和体质基础辨证相结合(位相)。... 详细信息

提出相-枢辨证的学术理念,相指时相、位相,枢指枢机。时相和位相的辨证强调骨伤科疾病中的局部辨证和整体辨证相结合,主要包括急性发作期的即时辨证和慢性迁延期的基础辨证相结合(时相),以及患部特异辨证和体质基础辨证相结合(位相)。枢机则主要针对骨伤科迁延难愈的慢性疾病,抓住主要矛盾、控制核心症状是辨证中枢机把握的关键。认为中医骨伤科学临床辨证中引入相-枢辨证体系,既能提高骨伤科理法方药确立的针对性,也有利于缩短年轻医生的学习曲线。

关键词：相-枢辨证时相位相枢机中医骨伤科

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国外局部外用药控制膝骨关节炎疼痛的临床研究进展

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中国疼痛医学杂志 2016年第2期22卷 133-136页

作者：邢润麟茆军王培民张农山南京中医药大学第一临床医学院南京210046 南京中医药大学附属医院骨伤科南京210029

膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)疼痛非常复杂,口服药物不良反应多,不利长期应用。本文介绍局部外用药用以控制KOA源性疼痛的现状。检索Pub Med、EMBASE、Cochrane临床对照试验库、Cochrane图书馆,检索时间均从1990年1月至2... 详细信息

膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)疼痛非常复杂,口服药物不良反应多,不利长期应用。本文介绍局部外用药用以控制KOA源性疼痛的现状。检索Pub Med、EMBASE、Cochrane临床对照试验库、Cochrane图书馆,检索时间均从1990年1月至2014年6月。根据局部外用药物用以治疗KOA的临床试验相关报道,共纳入16种药物,其中欧盟流通非甾体抗炎药物7种:酮洛芬、双氯芬酸、氟比洛芬酯、吡罗昔康透皮贴剂、布洛芬、吡罗昔康和尼氟灭酸凝胶;酰胺类局麻药物1种:利多卡因;阿片类药物2种:芬太尼和曲马多;草本药提取物4种:辣椒素、山金车、橄榄油和紫草科植物。外治法药物控制KOA疼痛,首推双氯芬酸、酮洛芬、吡罗昔康,起效快、安全性高。草本类药物橄榄油、山金车、辣椒素、紫草科植物萃取物可供选择。局部药物外治是KOA镇痛的重要选择,国外此方面研究方兴未艾,国内需及时跟进。

关键词：膝骨关节炎疼痛外用药研究进展

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