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军曹鱼仔稚鱼脊柱和附肢骨骼的发育特征

水产学报 2023年第8期47卷 59-67页

作者：毛非凡陈刚马骞周启苓施钢黄建盛邝杰华广东海洋大学水产学院

为探明军曹鱼仔稚鱼早期脊柱及附肢骨骼的发育特征，本研究采用软骨-硬骨双染色技术，分别利用阿利新兰、茜素红对软骨、硬骨以及1～33日龄军曹鱼仔稚鱼全骨骼进行染色，系统观察并描述其脊柱和附肢骨骼的发育特征。结果显示，军曹鱼脊... 详细信息

为探明军曹鱼仔稚鱼早期脊柱及附肢骨骼的发育特征，本研究采用软骨-硬骨双染色技术，分别利用阿利新兰、茜素红对软骨、硬骨以及1～33日龄军曹鱼仔稚鱼全骨骼进行染色，系统观察并描述其脊柱和附肢骨骼的发育特征。结果显示，军曹鱼脊柱开始发育的标志为7日龄仔鱼中脉弓和神经弓的出现；13日龄稚鱼椎骨、神经弓和脉弓开始骨化；背肋、腹肋分别于17、20日龄开始骨化；29日龄稚鱼脊柱骨化完成。附肢骨骼骨化起始顺序依次为胸鳍、尾鳍、腹鳍、背鳍和臀鳍。胸鳍匙骨于4日龄出现，肩胛骨孔于12日龄出现，同时上匙骨开始骨化；乌喙骨与肩胛骨于20日龄开始骨化；第1尾下骨于5日龄出现，15日龄稚鱼尾杆骨、侧尾下骨和尾鳍鳍条开始骨化，18日龄稚鱼尾下骨开始骨化；腹鳍支鳍骨于17日龄延伸至匙骨，同时腹鳍开始骨化；臀鳍和背鳍于17日龄由前向后开始骨化。研究表明，军曹鱼在13日龄进入稚鱼期，早期发育阶段的骨骼发育特征与其功能性适应密切相关。本研究结果对研究军曹鱼早期骨骼发育与功能适应、优化养殖条件有重要作用。

关键词：军曹鱼仔稚鱼脊柱附肢骨骼发育特征

杉虎斑Galectin-8基因克隆及其在不同阿魏酸水平饲料下的表达响应

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生物技术通报 2022年第12期38卷 312-323页

作者：付伟杰邝杰华罗君黄建盛陈有铭陈刚广东海洋大学水产学院湛江524088 广东蓝粮种业有限公司湛江524000

Galectin-8是半乳糖凝集素家族的成员,对β-半乳糖苷类能够特异性识别,具有多种生物学功能。为研究杉虎斑(Epinephelus fuscoguttatus♀×E. polyphekadion♂)Galectin-8基因的序列特征、组织表达情况与饲料中添加阿魏酸(ferulic acid,... 详细信息

Galectin-8是半乳糖凝集素家族的成员,对β-半乳糖苷类能够特异性识别,具有多种生物学功能。为研究杉虎斑(Epinephelus fuscoguttatus♀×E. polyphekadion♂)Galectin-8基因的序列特征、组织表达情况与饲料中添加阿魏酸(ferulic acid,FA)对其表达的影响,使用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)首次克隆得到了其全长cDNA序列。该序列长1 368 bp,其中5’UTR为16 bp,3’UTR为394 bp,开放阅读框(ORF)长960 bp,共编码319个氨基酸。该氨基酸序列在N端和C端上各具有一个糖识别结构域(carbohydrate binding domain,CRD),分别由136和133个氨基酸组成,由长为36个氨基酸的连接肽所连接,并包含两个保守基序H-NPR和WG-EE。同源性与系统发育进化树分析表明,杉虎斑Galectin-8与鞍带石斑鱼的一致性最高,为98.43%,并与其他硬骨鱼类聚为一支。RT-qPCR结果显示,Galectin-8在杉虎斑脾脏中表达量最高,其次是中肾、心脏、肠道、肝脏、头肾和鳃,而在脑、胃、皮肤和肌肉组织中微量表达。饲料中添加40-320 mg/kg的FA时,肠道、肝脏、头肾和脾脏的Galectin-8表达量显著上调(P <0.05),这表明FA可作为免疫刺激剂增强杉虎斑的先天性免疫。然而,杉虎斑Galectin-8的免疫功能尚不清,需要进一步的研究来阐明,以了解其在抵抗病原体入侵中的作用。

关键词：杉虎斑 Galectin-8 阿魏酸基因克隆表达分析

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养殖军曹鱼稚鱼骨骼畸形研究

渔业科学进展 2022年第1期43卷 133-140页

作者：毛非凡陈刚马骞周启苓施钢黄建盛邝杰华广东海洋大学水产学院广东湛江524025

本研究采用软骨—硬骨双染色技术对常规养殖条件下的军曹鱼(Rachycentron canadum)稚鱼全骨骼进行染色,观察并分析其骨骼畸形发生部位及相应的畸形类型。结果显示,在同一批次繁育的180个军曹鱼稚鱼(25日龄)骨骼标本中,有72个标本存在畸... 详细信息

本研究采用软骨—硬骨双染色技术对常规养殖条件下的军曹鱼(Rachycentron canadum)稚鱼全骨骼进行染色,观察并分析其骨骼畸形发生部位及相应的畸形类型。结果显示,在同一批次繁育的180个军曹鱼稚鱼(25日龄)骨骼标本中,有72个标本存在畸形情况,畸形率为40.00%。骨骼畸形类型共计22种,畸形率由高到低主要表现为米克尔氏软骨畸形、尾上骨缺失、脉棘分叉、基舌骨异位和尾上骨愈合等;所有骨骼畸形均未表现出显著可见的外部形态变化。但正常个体与骨骼畸形个体的全长存在极显著差异(P<0.01)。本研究表明,骨骼畸形对军曹鱼生长产生了影响。本研究为探索鱼类骨骼畸形的发生过程和原因、减少畸形率和优化苗种培育养殖条件提供了理论基础。

关键词：军曹鱼稚鱼软骨—硬骨双染色骨骼畸形

军曹鱼早期生长和性腺发育特征及生殖细胞标记基因表达模式研究

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军曹鱼早期生长和性腺发育特征及生殖细胞标记基因表达模式研究

作者：邝杰华广东海洋大学

学位级别：硕士

本研究对军曹鱼(Rachycentron canadum)早期生长阶段的胚胎及仔稚鱼进行连续观察,并记录分析各发育期胚胎及不同日龄仔稚鱼的形态特征,以期为军曹鱼的人工繁殖和苗种培育提供必要的参考资料。性腺发育是鱼类生活史过程的关键环节,对于... 详细信息

本研究对军曹鱼(Rachycentron canadum)早期生长阶段的胚胎及仔稚鱼进行连续观察,并记录分析各发育期胚胎及不同日龄仔稚鱼的形态特征,以期为军曹鱼的人工繁殖和苗种培育提供必要的参考资料。性腺发育是鱼类生活史过程的关键环节,对于经济鱼类繁殖具有重要意义,基于军曹鱼早期发育研究结果,选取1～360 dph不同发育阶段的军曹鱼为研究对象,通过石蜡组织切片和H.E.(Haematoxylin-Eosin)染色法,系统观察并描述了军曹鱼原始性腺的形成、分化特征及精巢和卵巢发育的组织结构变化;克隆了军曹鱼vasa和dnd基因,分析其组织表达分布及在胚胎发育和性腺发育过程中的表达模式,利用原位杂交技术研究其在配子发生阶段的表达定位,研究结果可为揭示军曹鱼的繁殖规律,探讨硬骨鱼类两性生殖细胞的发生发育机理提供理论参考。主要结果如下:(1)军曹鱼受精卵呈半透明的圆球形,为浮性卵,卵径(1.245±0.065)mm,油球1个,油球径(0.325±0.027)mm。在水温(27.0±0.5)℃、盐度29、p H 8.3条件下,军曹鱼卵从受精至孵化出膜约需26 h 30 min,经历合子、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成和孵化出膜7个阶段,共24个时期;初孵仔鱼平均全长(3.254±0.096)mm,在孵化后第3天仔鱼开口摄食,第5天卵黄囊消失,第7天油球耗尽,转化为外源性营养;第14天全长(19.933±1.118)mm,各鳍鳍条形成,发育至稚鱼期;22日龄稚鱼全长(41.140±3.779)mm,尾柄部开始出现鳞片,46日龄的后期稚鱼全长达(116.667±5.916)mm,体表完全覆盖鳞片,除尾鳍形状外,体形与成鱼相似。(2)军曹鱼原始生殖细胞在7 dph(days post hatching)时迁移到达生殖嵴,随后体细胞出现聚集和分裂,并于15 dph将原始生殖细胞完全包绕形成原始性腺。军曹鱼卵巢发生分化的时间要早于精巢,34 dph稚鱼的性腺组织尚未分化,但可观察到两种存在明显组织学差异的性腺类型,其中一种类型的性腺出现卵原细胞群,而另一种类型的性腺横切面较狭长且生殖细胞数量较少则推定为未分化的精巢;44 dph时,卵巢发生解剖学分化,卵巢腔开始形成;精巢分化开始于50 dph,此时精原细胞由基底膜包被形成囊泡状的细胞团。(3)在首周年发育期间,军曹鱼的精巢发育包含Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ5个时期,而卵巢发育只包含Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个时期。60 dph时,精巢和卵巢均处于Ⅰ期;90 dph时,精巢发育至Ⅱ期,卵巢仍处于Ⅰ期;120 dph时,超过半数的精巢已进入Ⅲ期,仅少部分卵巢发育至Ⅱ期;150 dph时,精巢已达Ⅲ期,而大部分卵巢发育至Ⅱ期;185 dph时,精巢仍为Ⅲ期,卵巢均已进入Ⅱ期;210 dph时,大部分精巢达Ⅳ期,卵巢仍处于Ⅱ期;360 dph时,精巢已进入Ⅴ期,大部分卵巢发育至Ⅲ期。(4)通过RACE技术克隆获得军曹鱼vasa和dnd基因的全长c DNA序列,q RT-PCR结果显示,Rcvasa和Rcdnd均在性腺中特异表达;Rcvasa的表达水平在胚胎发育早期较高,原肠胚期后出现显著降低,而Rcdnd在胚胎发育过程中的表达水平呈先上升后下降的趋势,多细胞期时表达量显著升高至最大值。精巢发育过程中,Rcvasa的表达水平先显著升高后趋于平稳,Rcdnd的表达水平呈逐渐上升的趋势;卵巢发育过程中,Rcvasa的表达水平先显著升高后降低,210 dph时达到表达量的峰值,而Rcdnd的表达水平则在150 dph显著升高至最大值后保持稳定。(5)不同发育时期性腺组织的显色原位杂交结果显示,Rcvasa和Rcdnd m RNA均在生殖细胞中特异表达。精巢中,Rcvasa和Rcdnd m RNA的杂交信号主要分布于精原细胞和初级精母细胞的周缘,次级精母细胞中的表达逐渐减弱,在精细胞和精子中只检测到极其微弱的杂交信号。卵巢中,Rcvasa和Rcdnd m RNA的杂交信号均匀分布于各时相卵母细胞的胞质及核仁,其中Rcvasa m RNA在卵母细胞发育早期表达较强,当卵母细胞发育至第Ⅲ时相后杂交信号明显减弱;Rcdnd m RNA杂交信号在卵原细胞中较强,在第Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ时相卵母细胞中检测到的杂交信号强度无明显变化。

关键词：军曹鱼早期生长性腺发育组织学观察基因表达

军曹鱼dnd基因cDNA克隆及其在性腺周年发育过程中的表达

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渔业科学进展 2022年第2期43卷 119-128页

作者：邝杰华马骞陈刚毛非凡周启苓黄建盛施钢张健东广东海洋大学水产学院广东湛江524025 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东湛江524025

本研究通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆了军曹鱼(Rachycentron canadum)dnd基因(Rcdnd)的c DNA序列,全长1339 bp,其中,5′非编码区59 bp,3′非编码区173 bp,开放阅读框(ORF)1107bp,共编码368个氨基酸。Rcdnd氨基酸序列含有1段RNA识别保守基序(RRM)以及4个C端保守结构域(CR1~4),与高体(鱼师)(Seriola dumerili)dnd的一致性最高(72.3%)。系统进化分析表明,Rcdnd与高体(鱼师)的同源蛋白亲缘关系最接近。基于半定量RT-PCR的组织表达分布分析结果显示,Rcdnd在性腺中特异表达,在其他组织中均无表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,在精巢发育过程(Ⅱ~Ⅴ期),Rcdnd的表达水平呈逐渐上升趋势;在卵巢发育过程(Ⅰ~Ⅲ期),Rcdnd的表达水平先显著升高后趋于稳定,在150 dph(Ⅱ期)时的表达量最高。原位杂交结果显示,不同发育时期性腺组织中,Rcdnd mRNA主要在生殖细胞中表达。在精巢中,Rcdnd mRNA集中表达于精原细胞和初级精母细胞的周缘,次级精母细胞中的杂交信号明显减弱,而精细胞和成熟精子中几乎检测不到杂交信号。在卵巢中,Rcdnd mRNA在卵原细胞中的表达最强,在初级卵母细胞中的表达较弱,其中,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ时相卵母细胞检测到的杂交信号强度无显著差异,且杂交信号均匀分布于细胞质中。研究结果表明,Rcdnd基因可能参与军曹鱼性腺发育过程,上述结果可为揭示军曹鱼两性生殖细胞发生发育的调控机理提供理论依据。

关键词：军曹鱼 dnd 基因克隆性腺发育表达分析

低盐胁迫下松江鲈HSPB1、HSPB7和HSPB11基因的表达变化规律

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中国水产科学 2020年第5期27卷 494-503页

作者：邝杰华马骞毛非凡李昂刘新富周启苓庄志猛广东海洋大学水产学院中国水产科学研究院黄海水产研究所

为了探究小分子热休克蛋白基因HSPB1、HSPB7和HSPB11在松江鲈(Trachidermus fasciatus)应对低盐胁迫过程中的调节作用,本研究基于前期转录组数据,获取3个目标基因的序列信息并进行了系统进化分析,利用实时荧光定量PCR技术检测了3个基因... 详细信息

为了探究小分子热休克蛋白基因HSPB1、HSPB7和HSPB11在松江鲈(Trachidermus fasciatus)应对低盐胁迫过程中的调节作用,本研究基于前期转录组数据,获取3个目标基因的序列信息并进行了系统进化分析,利用实时荧光定量PCR技术检测了3个基因在两种低盐胁迫处理下不同时间点(0 h、12 h、24 h和48 h)在鳃、肠、肾和肝组织中的表达水平。系统进化分析结果表明, HSPB1、HSPB7和HSPB11基因分别聚类形成独立分支;在各基因分支中,松江鲈与已报道的鲈形目、鲤形目和鳉形目等鱼种共同聚为硬骨鱼类分支。在两种低盐胁迫处理下, 3个基因在鳃组织中的表达量均在12h显著升高,而在肠、肾和肝组织中的表达量则呈现不同的变化趋势。肠组织中,HSPB7和HSPB11在盐度渐变低盐胁迫(盐度变化速率1.1/h)下表达量均显著升高, HSPB1表达量在48 h显著降低;盐度骤变低盐胁迫(盐度变化速率27/h)下HSPB1和HSPB7表达量在24 h显著升高, HSPB11表达量显著降低。肾组织中,HSPB1、HSPB7和HSPB11表达量均仅在盐度渐变低盐胁迫24h显著升高;盐度骤变低盐胁迫下HSPB1表达量显著降低, HSPB7和HSPB11表达量则显著升高。肝组织中, HSPB7无表达; HSPB1表达量在盐度渐变低盐胁迫下无显著变化,但在盐度骤变低盐胁迫下则显著升高;HSPB11表达量在两种处理下均显著升高。本研究比较分析了HSPB1、HSPB7和HSPB11基因在松江鲈应对不同低盐胁迫时表达变化规律的异同,相关结果为探讨小分子热休克蛋白在鱼类应激调节过程中的作用及洄游性鱼类适应盐度变化的分子调控机制提供了理论依据。

关键词：松江鲈小分子热休克蛋白盐度胁迫基因表达

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军曹鱼的胚胎发育及仔稚鱼形态观察

水产学报 2021年第11期45卷 1814-1824页

作者：邝杰华陈刚马骞黄建盛张健东施钢王忠良汤保贵广东海洋大学水产学院南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江)

为了探明军曹鱼早期发育阶段的特征和规律,本实验通过连续显微观察,记录分析其胚胎及仔稚鱼发育各时期的形态特征和发育特点。结果显示,军曹鱼受精卵呈圆球形,为浮性卵,卵径(1.245±0.065) mm,油球1个,油球直径(0.325±0.027) mm。在水... 详细信息

为了探明军曹鱼早期发育阶段的特征和规律,本实验通过连续显微观察,记录分析其胚胎及仔稚鱼发育各时期的形态特征和发育特点。结果显示,军曹鱼受精卵呈圆球形,为浮性卵,卵径(1.245±0.065) mm,油球1个,油球直径(0.325±0.027) mm。在水温(27.0±0.5)℃、盐度29、pH值8.3的条件下,军曹鱼卵从受精至孵化出膜约需26 h 30 min,经历合子、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成和孵化出膜7个阶段,共24个时期。初孵仔鱼平均全长(3.254±0.096) mm,仔鱼在孵化后第3天开口摄食,眼囊变黑,卵黄囊被消耗约80%,第5天卵黄囊消失,第7天油球耗尽,转化为外源性营养。孵化后第14天全长(19.933±1.118) mm,各鳍鳍条形成,进入稚鱼期;22日龄稚鱼全长(41.140±3.779) mm,尾柄部开始出现鳞片,46日龄的后期稚鱼全长达(116.667±5.916) mm,体表完全覆盖鳞片,除尾鳍形状外,体形与成鱼相似。

关键词：军曹鱼胚胎发育仔鱼稚鱼形态特征

军曹鱼(Rachycentron canadum)性腺分化及首周年发育的组织学观察

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海洋学报 2021年第8期43卷 128-138页

作者：邝杰华陈刚马骞毛非凡周启苓黄建盛施钢张健东广东海洋大学水产学院广东湛江524025 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东湛江524025

本研究采用石蜡组织切片和H.E.染色法对军曹鱼原始性腺的形成、分化及精巢和卵巢首周年发育的组织结构变化进行观察。结果显示,军曹鱼原始生殖细胞在7孵化日龄(days post hatching,dph)时迁移到达生殖嵴,随后体细胞出现聚集和分裂,并于1... 详细信息

本研究采用石蜡组织切片和H.E.染色法对军曹鱼原始性腺的形成、分化及精巢和卵巢首周年发育的组织结构变化进行观察。结果显示,军曹鱼原始生殖细胞在7孵化日龄(days post hatching,dph)时迁移到达生殖嵴,随后体细胞出现聚集和分裂,并于15 dph将原始生殖细胞完全包绕形成原始性腺。军曹鱼卵巢分化的时间要早于精巢,34 dph的稚鱼性腺组织尚未分化,但可观察到两种存在明显组织学差异的性腺类型,其中一种类型的性腺出现卵原细胞群,而另一种类型的性腺横切面较狭长,生殖细胞数量明显较少,因此推定为未分化精巢;卵巢的解剖学分化开始于44 dph,其标志为卵巢腔的形成;50 dph时精巢开始细胞学上的分化,此时精原细胞由基底膜包被形成囊泡状的细胞团。在首周年发育期间(60~360 dph),军曹鱼的精巢发育包含Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 5个时期,而卵巢发育只包含Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3个时期。60 dph时,精巢和卵巢均处于Ⅰ期;90 dph时,精巢发育至Ⅱ期,卵巢仍处于Ⅰ期;120 dph时,超过半数的精巢已发育至Ⅲ期,仅少部分卵巢发育至Ⅱ期;150 dph时,精巢已发育至Ⅲ期,而大部分卵巢发育至Ⅱ期;185 dph时,精巢仍为Ⅲ期,卵巢均已发育至Ⅱ期;210 dph时,大部分精巢发育至Ⅳ期,卵巢仍处于Ⅱ期;360 dph时,精巢已发育至Ⅴ期,大部分卵巢发育至Ⅲ期。上述研究结果可丰富军曹鱼的繁殖生物学研究基础,阐明其早期性腺发育规律,还可为其人工繁殖提供理论依据。

关键词：军曹鱼原始生殖细胞性腺分化性腺发育组织学观察

低盐胁迫下松江鲈ATP1A3和ATP2B1基因的表达变化规律

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渔业科学进展 2021年第6期42卷 33-41页

作者：毛非凡邝杰华马骞周启苓李昂刘新富庄志猛广东海洋大学水产学院广东湛江524025 中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071

为了探究Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶在松江鲈(Trachidermus fasciatus)应对低盐胁迫过程中的调节作用,本研究基于前期转录组数据,获取目标基因ATP1A3(Na+/K+-ATP酶α3亚基基因)和ATP2B1(Ca2+-ATP酶1基因)的序列信息并进行了系统进化分析... 详细信息

为了探究Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶在松江鲈(Trachidermus fasciatus)应对低盐胁迫过程中的调节作用,本研究基于前期转录组数据,获取目标基因ATP1A3(Na+/K+-ATP酶α3亚基基因)和ATP2B1(Ca2+-ATP酶1基因)的序列信息并进行了系统进化分析。利用实时荧光定量PCR技术检测了松江鲈的鳃、肠、肾脏和肝脏组织中2个基因在2种低盐胁迫处理(盐度渐变处理,盐度变化速率为1.1/h;盐度骤变处理,盐度变化速率为27/h)下,不同时间点(0 h、12 h、24 h和48 h)的表达水平。系统进化分析结果表明,ATP1A3和ATP2B1基因分别聚类形成独立分支;在各基因分支中,松江鲈与已报道的鲈形目和鲽形目等鱼类共同聚在硬骨鱼类分支中。在2种低盐胁迫处理下,2个基因在鳃、肠、肾脏和肝脏组织中的表达量呈现不同的变化趋势。鳃组织中ATP1A3表达量在盐度渐变处理下先上升后下降,ATP2B1表达量仅在24 h显著升高;盐度骤变处理下,ATP1A3表达量显著下降,ATP2B1表达量显著上升。2种盐度渐变处理下,肠组织中ATP1A3表达量均在24 h显著下降;ATP2B1表达量在盐度渐变处理下显著上升,盐度骤变处理下在24 h显著上升。在盐度渐变处理下,肾脏组织中2个基因的表达量均在24 h显著上升至最大值;ATP1A3表达量在盐度骤变处理下显著上升,ATP2B1表达量在12 h和48 h显著上升。肝脏组织中2个基因的表达量在盐度渐变处理下均无显著变化;盐度骤变处理下,ATP1A3表达量持续显著上升,ATP2B1表达量在48 h显著上升。结果表明,低盐胁迫处理显著影响了ATP1A3和ATP2B1基因的表达水平,但2个基因的表达量变化规律存在显著性差异。上述结果为探讨Na+/K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶在鱼类渗透压调节过程中的作用及洄游性鱼类适应盐度变化的分子调控机制提供了理论依据。

关键词：松江鲈盐度胁迫 ATP1A3 ATP2B1 表达变化规律