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猪苓多糖下调Colon26细胞肿瘤免疫抑制的体外研究

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免疫学杂志 2009年第6期25卷 650-654页

作者：崔澂王润田支国成王智华邓郁青张征峥佟慧白求恩军医学院教务科河北医科大学基础医学研究所免疫室

目的体外研究猪苓多糖(polyporus umbellatus polysacharide,PUP)对结直肠癌Colon26细胞肿瘤免疫抑制的影响。方法获取经PUP作用后的Colon26再培养上清,未经作用的同步培养上清作对照,检测PUP对Colon26肿瘤细胞所致NK杀伤和诱导转化(MT... 详细信息

目的体外研究猪苓多糖(polyporus umbellatus polysacharide,PUP)对结直肠癌Colon26细胞肿瘤免疫抑制的影响。方法获取经PUP作用后的Colon26再培养上清,未经作用的同步培养上清作对照,检测PUP对Colon26肿瘤细胞所致NK杀伤和诱导转化(MTT法测定),以及IL-2Rα、CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达(流式细胞计数分析)5项免疫功能抑制的影响,定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五种免疫抑制分子含量,多元相关分析PUP下调Colon26免疫抑制与分泌免疫抑制分子的关系。结果对照上清中5种免疫抑制分子均可测到,TGF-β1含量最高,对5项免疫功能均有显著抑制。PUP作用后的第一次再培养上清,TGF-β1含量及对5项免疫功能的抑制均明显降低;与其相比,第二次再培养上清的5种免疫抑制分子含量及对NK杀伤、IL-2Rα和CD3ε-ζ+表达抑制均明显提高。TGF-β1与抑制诱导转化、NK杀伤及CD3ε+ζ+表达正相关。结论通过下调肿瘤细胞分泌免疫抑制分子而削弱肿瘤免疫抑制,可能是PUP抗瘤效应机制之一。

关键词：猪苓多糖肿瘤免疫抑制下调免疫抑制分子 Colon26

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多种单抗联合检测HIV抗原

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第9期29卷 851-853页

作者：邓郁青张征峥王平丁军颖张红中王润田河北医科大学基础所免疫室石家庄050017 河北医科大学生物医学工程中心

目的建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法。方法以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2gp36的腹水型单克隆抗体（McAb），用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记。建立针对单个抗原的双抗体夹... 详细信息

目的建立多种单抗联合早期检测HIV抗原的夹心ELISA方法。方法以SAS盐析沉淀法和亲和层析法纯化抗HIV-1 p24、gp41、gp120及抗HIV-2gp36的腹水型单克隆抗体（McAb），用高碘酸钠法将纯化的McAb以HRP进行标记。建立针对单个抗原的双抗体夹心ELISA法，对其灵敏度及特异性进行检测。将筛选得到的4株捕获McAb按比例混合作为捕获抗体，4株酶标McAb按比例混合作为检测抗体，建立多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA方法，检测混合HIV抗原。结果按确定的最优反应条件建立的多种McAb联合夹心ELISA方法，检测到的最高稀释度的HIV混合抗原中各抗原的终浓度分别为：重组HIV-1p24：0．625pg／ml，gp41：6．25ng／ml，gp120：6．25ng／ml；HIV-2gp 36：9．25ng／ml。结论建立了具有高度敏感性的鸡尾酒式多种单抗联合检测HIV抗原的夹心ELISA法，为早期检测HIV抗原提供了新的思路，为后续的研究奠定了一定基础。

关键词： HIV 单克隆抗体 ELISA

不同类别抗瘤中药制剂下调结直肠癌免疫功能抑制的比较研究

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实用肿瘤杂志 2010年第3期25卷 300-304页

作者：崔澂王润田支国成李金生王智华张征峥邓郁青第四军医大学白求恩军医学院训练部河北石家庄050081 河北医科大学基础医学院免疫室河北石家庄050081 河北省人民医院老年病学实验中心河北石家庄050051

目的比较研究不同类型抗瘤中药制剂对结直肠癌NK、T细胞免疫功能抑制的影响。方法分别制备三氧化二砷（As2O3）、川芎嗪（LHC）、黄芪（AMB）、氧化苦参碱（MOX）、猪苓多糖（PUPS）、蒿甲醚（ART）等6种中药制剂作用后的结直肠癌细胞Co... 详细信息

目的比较研究不同类型抗瘤中药制剂对结直肠癌NK、T细胞免疫功能抑制的影响。方法分别制备三氧化二砷（As2O3）、川芎嗪（LHC）、黄芪（AMB）、氧化苦参碱（MOX）、猪苓多糖（PUPS）、蒿甲醚（ART）等6种中药制剂作用后的结直肠癌细胞Colon26再培养上清,以不经中药制剂作用的相应上清为对照;MTT法检测不同中药制剂作用后对Colon26所致小鼠脾细胞NK杀伤活性、ConA诱导转化抑制的影响,直接免疫荧光FCM法检测对小鼠脾细胞IL-2Rα、CD3ε＋ζ＋及CD3ε-ζ＋表达抑制的影响。结果As2O3、PUPS及ART对NK杀伤抑制的下调约50%左右,LHC及AMB可下调约75%左右;AMB的下调作用最强。LHC和PUPS作用后对CD3ε-ζ＋表达抑制的初始下调幅度约80%~90%,AMB和ART作用后初始下调幅度约40%~50%,MOX可完全消除抑制并明显促进表达;LHC的下调作用最强。AMB、PUPS及ART对T细胞诱导转化抑制的下调程度较强（下调约50%）,维持时间较长;ART对IL-2Rα表达抑制的下调作用最强（下调约50%）,维持时间较长;AMB对CD3ε＋ζ＋表达抑制的下调作用最强,不但可完全消除表达抑制,还可进一步促进表达,维持时间亦较持久。结论不同类型抗瘤中药制剂下调结直肠癌免疫抑制的类别、程度、出现和维持的时间不尽相同;下调肿瘤细胞产生的NK、T细胞免疫功能抑制是中药制剂抗瘤效应机制之一。

关键词：结直肠肿瘤免疫抑制中草药杀伤细胞,天然 T淋巴细胞肿瘤细胞,培养的

抗HIV-1 gp41单克隆抗体的制备及意义

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山东医药 2009年第19期49卷 48-49页

作者：邓郁青张坤娟王从印张征峥宋小天张红中王润田河北医科大学基础所石家庄050017 河北医科大学生物医学工程中心

目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体(mAb),用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵(SAS)... 详细信息

目的为HIV-1感染的检测和研究提供依据。方法以基因工程重组抗原HIV-1 gp41蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备抗gp41蛋白的单克隆抗体(mAb),用ELISA法鉴定所得mAb的Ig亚类、效价及特异性。单抗经饱和硫酸铵(SAS)纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测gp41蛋白的最佳配伍单抗,分别包被ELISA板及作为酶标mAb,建立双mAb夹心ELISA法。结果经细胞融合、筛选、克隆化,获得了12株可分泌高效价mAb的杂交瘤细胞。纯化的腹水mAb经配对试验,选出2株mAb:7D4和9G2-HRP建立了双mAb夹心ELISA法,检测HIV-1 gp41抗原的灵敏度是1μg/L。结论获得12株效价高的抗HIV-1 gp41的mAb,建立了特异性强、灵敏度较高的检测HIV-1 gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。

关键词：人类免疫缺陷病毒-1 HIV包膜蛋白质gp41 单克隆抗体双抗体夹心ELISA

三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体稳定性的影响

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山东医药 2010年第27期50卷 35-36页

作者：张坤娟邓郁青弋国红张红中王从印张雪迎王惠芬河北医科大学生物医学工程中心石家庄050017 河北医科大学基础所

目的研究葡萄糖、蔗糖、麦芽糖三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体(简称单抗)稳定性的影响,进一步延长血型试剂的使用期限。方法将葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂,计为葡萄糖组、蔗糖组、麦芽糖组,生理盐水做对照(盐水组),分别加... 详细信息

目的研究葡萄糖、蔗糖、麦芽糖三种多糖对抗人红细胞A、B抗原单克隆抗体(简称单抗)稳定性的影响,进一步延长血型试剂的使用期限。方法将葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂,计为葡萄糖组、蔗糖组、麦芽糖组,生理盐水做对照(盐水组),分别加入抗人红细胞A、B抗原的腹水型单抗溶液,37℃、室温、4℃条件下观察抗体效价变化。结果 0.1～0.8 mol/L的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖对抗A、B单抗效价均有一定稳定作用,同种糖高浓度的稳定效果优于低浓度,最佳有效稳定浓度为0.4 mol/L。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为稳定剂存在时,37℃下腹水单抗的效价稳定性可延长至2～3周,室温下可延长至4～6个月,4℃下可延长至24个月。结论葡萄糖、蔗糖、麦芽糖均可作为单抗的稳定剂,可提高抗体的稳定性,延长使用期限;蔗糖效果更好。

关键词：单克隆抗体稳定性葡萄糖蔗糖麦芽糖

抗肿瘤中药制剂逆转结直肠癌NK细胞免疫抑制的靶分子探讨

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江苏医药 2011年第5期37卷 509-512页

作者：崔澂王润田胡建军王智华张征峥邓郁青第四军医大学白求恩军医学院训练部河北省石家庄市050081 河北医科大学基础医学院免疫室

目的探讨抗瘤中药制剂逆转结直肠癌所致自然杀伤(NK)细胞免疫抑制的作用靶分子机制。方法分别制备三氧化二砷(As2O3)、川芎嗪(LHC)、黄芪(AMB)、氧化苦参碱(MOX)、猪苓多糖(PUPS)、青蒿琥酯(ART)6种中药制剂作用后的小鼠结直肠癌细胞Col... 详细信息

目的探讨抗瘤中药制剂逆转结直肠癌所致自然杀伤(NK)细胞免疫抑制的作用靶分子机制。方法分别制备三氧化二砷(As2O3)、川芎嗪(LHC)、黄芪(AMB)、氧化苦参碱(MOX)、猪苓多糖(PUPS)、青蒿琥酯(ART)6种中药制剂作用后的小鼠结直肠癌细胞Colon26再培养上清液,MTT法检测中药制剂对Colon26所致小鼠脾细胞NK杀伤抑制的影响,流式细胞仪直接免疫荧光法检测对小鼠脾细胞CD3ε-ζ+表达抑制的影响;ELISA测定上清液中转化生长因子(TGF)β1、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)4、IL-6、IL-10和前列腺素(PG)E2含量;多元相关分析中药制剂逆转结直肠癌NK细胞免疫抑制的相应靶分子。结果 AMB对NK杀伤抑制的逆转作用最强;LHC对CD3ε-ζ+表达抑制的逆转作用最强。对NK杀伤抑制的逆转,As2O3、AMB、PUPS和ART的靶分子为TGF-β1,LHC的靶分子为TGF-β1和IL-10;对CD3ε-ζ+表达抑制的逆转,AMB和MOX的靶分子为IL-10。结论通过抑制免疫抑制分子分泌逆转肿瘤细胞产生的NK免疫抑制,应是中药制剂抗瘤效应机制之一。临床可考虑联合使用不同类型抗瘤药物组方调整患者NK免疫抑制及免疫抑制分子分泌的状态。

关键词：结直肠癌免疫抑制自然杀伤细胞免疫抑制分子

氧化苦参碱下调小鼠Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外实验

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第四军医大学学报 2006年第21期27卷 1969-1972页

作者：崔澂王润田佟慧王智华邓郁青河北医科大学基础医学研究所免疫室河北石家庄050017

目的:研究氧化苦参碱(MOX)对Colon26肿瘤细胞免疫抑制的体外影响.方法:获取体外经MOX作用后再培养的Colon26培养上清,以不经MOX作用的Colon26同步培养上清作对照,观察其对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和ConA诱导转化以及流式细胞计数分... 详细信息

目的:研究氧化苦参碱(MOX)对Colon26肿瘤细胞免疫抑制的体外影响.方法:获取体外经MOX作用后再培养的Colon26培养上清,以不经MOX作用的Colon26同步培养上清作对照,观察其对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和ConA诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα,CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达5项免疫功能指标的影响,定量ELISA法测定这些上清中TGF-β1,VEGF,IL-4,IL-6和IL-105种免疫抑制分子的含量,分析MOX下调Colon26分泌免疫抑制分子与上清免疫抑制作用的关系.结果:不经MOX作用同步培养的Colon26上清,5种免疫抑制分子均可被测到,以TGF-β1含量最高;该上清对小鼠脾细胞5项免疫功能指标,均有显著抑制作用.MOX作用后的Colon26,其第一次再培养上清,TGF-β1和IL-10含量及对除NK杀伤以外的其余4项免疫功能指标的抑制,均明显降低(P值分别为0.0045,0.032,0.001,0.0095,0.0005,0.000);与第一次再培养上清相比,其第二次再培养上清,TGF-β1含量继续显著降低(P=0.002),VEGF含量及对除NK杀伤以外的其余4项免疫功能指标的抑制,均明显提高(P值分别为0.029,0.0075,0.0495,0.0005,0.0005),其余无显著变化.结论:MOX可明显下调Colon26肿瘤细胞TGF-β1和IL-10的分泌,通过下调所测5种以外的其他免疫抑制分子的分泌而影响Colon26肿瘤细胞的免疫抑制效应.下调肿瘤细胞免疫抑制作用,可能是MOX的抗瘤效应机制之一.

关键词：氧化苦参碱下调小鼠 Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用体外实验

蒿甲醚下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外研究

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蒿甲醚下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外研究

抑瘤饮增加小鼠S180移植瘤巨噬细胞浸润及TNF-α和iNOS表达

河北省免疫学会第5次会员代表暨学术大会

作者：崔澂王润田王智华邓郁青河北医科大学基础医所免疫室

＜正＞【目的】选用培养上清确有免疫抑制作用的小鼠结直肠癌株Colon26肿瘤细胞,检测其经蒿甲醚（ART）作用后再培养的上清对免疫功能的影响和上清中免疫抑制分子的含量,从逆

关键词：蒿甲醚 Colon26 肿瘤免疫抑制免疫抑制分子

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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免疫学杂志 2008年第5期24卷 559-562,567页

作者：李铁民王润田韩志鹏杨志强崔 丁军颖邓郁青王平张征峥河北医科大学基础所免疫室石家庄050017

目的动态研究中药复方抑瘤饮对小鼠S180移植瘤内巨噬细胞(Mφ)浸润及TNF-α和iNOS表达的影响,揭示其体内抗瘤免疫机制。方法Balb/c小鼠右腋皮下接种S180肿瘤细胞,24h后,抑瘤饮组小鼠每日灌服抑瘤饮,对照组小鼠每日灌服等量凉开水。分别... 详细信息

目的动态研究中药复方抑瘤饮对小鼠S180移植瘤内巨噬细胞(Mφ)浸润及TNF-α和iNOS表达的影响,揭示其体内抗瘤免疫机制。方法Balb/c小鼠右腋皮下接种S180肿瘤细胞,24h后,抑瘤饮组小鼠每日灌服抑瘤饮,对照组小鼠每日灌服等量凉开水。分别于第10、20、30天和第40天杀鼠取瘤制成切片,免疫组化染色法检测肿瘤组织内Mφ浸润及TNF-α和iNOS表达,以图像分析系统对染色结果进行测定。结果所有4个时间点抑瘤饮组Mφ浸润均显著高于对照组;第10天时抑瘤饮组TNF-α和iNOS表达与对照组无差异,第20、30天和第40天时高于对照组。结论抑瘤饮体内抗瘤作用可能与增加肿瘤组织中Mφ浸润及TNF-α和iNOS表达有关。

关键词：抑瘤饮 S180 巨噬细胞肿瘤坏死因子-α 诱导型一氧化氮合酶