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牛种布鲁氏菌A19ΔBtpA缺失株生物学特性及其免疫原性研究

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2135-2145页

作者：徐朕宇邓肖玉王月丽孙灿吴澳迪曹剑易继海王勇王震陈创夫石河子大学动物科技学院石河子832000 绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心石河子832000 天康生物制药有限公司乌鲁木齐830011 石河子大学动物疾病防控兵团重点实验室石河子832000

布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)效应物BtpA是布鲁氏菌的重要免疫抑制分子之一。为了进一步了解BtpA对牛种布鲁氏菌生物学特性的影响,并探究BtpA基因缺失是否会影响布鲁氏菌的免疫原性。在牛种布鲁氏菌疫苗株(A19株)上对BtpA基因进行了缺失... 详细信息

布鲁氏菌四型分泌系统(T4SS)效应物BtpA是布鲁氏菌的重要免疫抑制分子之一。为了进一步了解BtpA对牛种布鲁氏菌生物学特性的影响,并探究BtpA基因缺失是否会影响布鲁氏菌的免疫原性。在牛种布鲁氏菌疫苗株(A19株)上对BtpA基因进行了缺失,通过qRT-PCR检测布鲁氏菌A19ΔBtpA缺失株中的BtpA mRNA表达水平,并探究布鲁氏菌A19株和A19ΔBtpA缺失株在生长曲线、胞内生存、黏附侵袭和体外应激方面的差异。此外,将A19株和A19ΔBtpA缺失株免疫小鼠,在免疫后的第7、14、21、28和35天使用间接ELISA检测小鼠体内的布鲁氏菌特异性抗体水平;通过ELISpot检测免疫第21天时小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ的表达水平,利用流式细胞术测定了小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ阳性CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞以及CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞的分类情况。结果表明:成功构建了A19ΔBtpA缺失株,A19ΔBtpA缺失株中BtpA的转录水平显著低于A19株,A19ΔBtpA缺失株与亲本株在生长曲线、胞内生存和黏附侵袭方面呈现相似的趋势。而体外应激试验显示,高渗应激条件下A19ΔBtpA缺失株的存活菌量明显低于A19株(P<0.05)。免疫原性研究中,与PBS组相比,A19组和A19ΔBtpA组均可极显著诱导小鼠产生布鲁氏菌特异性抗体(P<0.01);与A19组相比,A19ΔBtpA组淋巴细胞IFN-γ表达水平显著升高(P<0.05),使小鼠产生的IFN-γ阳性CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞以及CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比值显著增高(P<0.05)。BtpA基因缺失不会影响布鲁氏菌A19体外胞内增殖,但可能参与布鲁氏菌抗高渗环境能力相关。此外,A19ΔBtpA缺失株比A19株更好地诱导Th1型免疫应答,诱导宿主产生与A19株相当的IgG特异性抗体,具有布鲁氏菌基因缺失疫苗的潜力。该研究将为进一步探究布鲁氏菌的致病机制和开发基因缺失株疫苗提供理论基础和数据支持。

关键词：布鲁氏菌 BtpA 生物学特性免疫原性

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线粒体融合蛋白2基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导巨噬细胞凋亡的影响

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中国畜牧兽医 2022年第1期49卷 283-293页

作者：谢珊珊杨琴邓肖玉易继海王震陈创夫石河子大学动物科技学院石河子832000 人兽共患传染性疾病防治协同创新中心石河子832000 动物疫病防控兵团重点实验室石河子832000

【目的】试验旨在探究线粒体融合蛋白2(MFN2)基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导小鼠巨噬细胞凋亡的影响。【方法】利用RNA干扰技术设计3条特异性针对MFN2基因的siRNA序列(siMFN2-450、siMFN2-1661、siMFN2-2275)和1条阴性干扰序列(siMFN2-... 详细信息

【目的】试验旨在探究线粒体融合蛋白2(MFN2)基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导小鼠巨噬细胞凋亡的影响。【方法】利用RNA干扰技术设计3条特异性针对MFN2基因的siRNA序列(siMFN2-450、siMFN2-1661、siMFN2-2275)和1条阴性干扰序列(siMFN2-Negative);利用空质粒pcDNA3.1-EGFP通过过表达技术构建1个重组质粒pcDNA3.1-EGFP-MFN2。双酶切法鉴定过表达重组质粒pcDNA3.1-EGFP-MFN2,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测筛选最佳干扰序列并鉴定重组质粒的过表达效率,使用筛选出的最佳干扰序列和鉴定过表达后的重组质粒分别构建MFN2基因干扰及过表达的转染巨噬细胞模型;用牛种布鲁氏菌疫苗株A19侵染巨噬细胞,按照细菌数∶细胞个数=100∶1的比例侵染24 h,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(BAX)的表达情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况。【结果】双酶切结果显示,pcDNA3.1-EGFP-MFN2过表达重组质粒构建成功;实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,siMFN2-1661组MFN2的表达极显著降低(P<0.01),pcDNA3.1-EGFP-MFN2组MFN2的表达极显著增加(P<0.01),成功构建干扰及过表达MFN2基因的转染巨噬细胞模型;布鲁氏菌侵染干扰MFN2基因表达的巨噬细胞后,BAX蛋白表达水平显著高于siMFN2-Negative组(P<0.05),BAX转录水平和细胞凋亡率极显著高于siMFN2-Negative组(P<0.01);布鲁氏菌侵染过表达MFN2基因的巨噬细胞后,BAX的转录及蛋白表达水平均显著低于pcDNA3.1-EGFP组(P<0.05),细胞凋亡率极显著低于pcDNA3.1-EGFP组(P<0.01)。【结论】本试验结果表明,干扰MFN2基因的表达会增强布鲁氏菌诱导细胞凋亡的能力,而过表达MFN2基因则会抑制布鲁氏菌诱导细胞凋亡的能力,结果可为研究MFN2基因的生物学功能提供参考,为进一步解析布鲁氏菌的致病机制提供理论基础。

关键词：线粒体融合蛋白2(MFN2) 布鲁氏菌巨噬细胞凋亡

牛IRF7蛋白对牛病毒性腹泻病毒增殖影响的研究

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黑龙江畜牧兽医 2022年第5期 82-88,139页

作者：张超张江伟邓肖玉何金科陈创夫石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心新疆石河子832003 新疆第二医学院新疆克拉玛依834000

为了探索牛干扰素转录调节因子7(IRF7)基因对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)增殖的影响,试验通过慢病毒包装和RNA干扰等试验构建IRF7基因的干扰和过表达细胞模型,然后运用实时荧光定量PCR扩增和Western-blot验证... 详细信息

为了探索牛干扰素转录调节因子7(IRF7)基因对牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)增殖的影响,试验通过慢病毒包装和RNA干扰等试验构建IRF7基因的干扰和过表达细胞模型,然后运用实时荧光定量PCR扩增和Western-blot验证过表达及干扰效果,最后用BVDV进行感染,通过E2蛋白的表达水平评估IRF7基因与BVDV增殖的关系。结果表明:BVDV感染IRF7基因过表达细胞模型12 h后,E2基因相对表达量显著降低(P<0.05),且随着时间的延长,E2蛋白表达水平逐渐降低;而BVDV感染IRF7基因干扰细胞模型8 h后,E2基因相对表达量显著升高(P<0.05),E2蛋白的表达水平在8 h后逐渐升高,即过表达IRF7基因能够使BVDV增殖水平降低,而干扰IRF7基因的表达则能够使BVDV的增殖水平增加。说明牛IRF7蛋白对牛BVDV的增殖具有抑制作用。

关键词：牛病毒性腹泻病毒牛干扰素转录调节因子7 干扰过表达 E2蛋白

牛种布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统对巨噬细胞内质网应激和细胞凋亡的影响

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畜牧兽医学报 2022年第4期53卷 1192-1200页

作者：杨琴邓肖玉谢珊珊易继海王勇张倩王震陈创夫石河子大学动物科技学院石河子832000 人兽共患传染性疾病防治协同创新中心石河子832000 新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 动物疫病防控兵团重点实验室石河子832000

旨在研究牛种布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统(T4SS)对巨噬细胞内质网应激和细胞凋亡的影响,深入探究布鲁氏菌的分子致病机制。本研究以牛种布鲁氏菌疫苗株A19及其T4SS启动子缺失株A19ΔVirB侵染小鼠巨噬细胞,分别在侵染的6、12、24 h收集细胞RNA... 详细信息

旨在研究牛种布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统(T4SS)对巨噬细胞内质网应激和细胞凋亡的影响,深入探究布鲁氏菌的分子致病机制。本研究以牛种布鲁氏菌疫苗株A19及其T4SS启动子缺失株A19ΔVirB侵染小鼠巨噬细胞,分别在侵染的6、12、24 h收集细胞RNA和总蛋白,通过qRT-PCR以及Western blot检测内质网应激标志性分子(GRP78和CHOP)、凋亡相关分子(BAX和BCL-2)的转录水平和蛋白表达水平;通过流式细胞术检测不同时间点的细胞凋亡情况。结果显示,在侵染的6、12和24 h,缺失株A19ΔVirB组GRP78的转录水平及蛋白表达水平均显著低于亲本株A19组(P<0.05);在侵染后的6 h,缺失株组CHOP的转录水平及蛋白表达水平也显著低于亲本株(P<0.05),但到了24 h,出现了显著高于亲本株(P<0.05)的现象;在侵染的24 h,缺失株A19ΔVirB组BAX的转录水平及蛋白表达水平显著高于亲本株(P<0.05);而在侵染的24 h,缺失株组BCL-2的转录水平及蛋白表达水平显著低于亲本株(P<0.05);流式结果进一步显示,在侵染的24 h,缺失株组的细胞凋亡率显著高于亲本株(P<0.05);本试验的结果表明,T4SS缺失后,会导致牛种布鲁氏菌引起内质网应激的能力减弱,诱导细胞凋亡的能力增强。本研究为进一步解析布鲁氏菌的致病机制奠定了基础,也为今后布鲁氏菌T4SS的功能研究提供了科研依据。

关键词：布鲁氏菌缺失株 T4SS 内质网应激细胞凋亡

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冠状病毒与宿主细胞受体相互作用的研究进展

中国兽医杂志 2023年第3期59卷 79-83页

作者：李红欢乔彦杰邓肖玉杨宁宁席静王月丽易继海陈创夫石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心新疆石河子832000

冠状病毒(Coronavirus)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒,具有复杂的进化历史,属于套式病毒目,冠状病毒科,冠状病毒亚科,冠状病毒属,这类病毒能广泛感染野生、家养禽类和哺乳动物^([1])。冠状病毒是目前已知的RNA病毒中基因组最大的病毒,... 详细信息

冠状病毒(Coronavirus)是一类有囊膜的单股正链RNA病毒,具有复杂的进化历史,属于套式病毒目,冠状病毒科,冠状病毒亚科,冠状病毒属,这类病毒能广泛感染野生、家养禽类和哺乳动物^([1])。冠状病毒是目前已知的RNA病毒中基因组最大的病毒,成熟的冠状病毒直径为60~220 nm,分为4个不同的属:α、β、γ和δ冠状病毒(图1)。冠状病毒粒子多呈现球形或不规则形,其基因组大小介于26 000~32 000 bp,长度约为30 kb^([2]),包含6~11个开放阅读框(Open reading frame,ORF),第一个ORF占整个基因组约67%,编码16种非结构蛋白(Nonstructural protein)^([3]),其余的ORF编码辅助蛋白和结构蛋白。4种主要的结构蛋白为刺突表面糖蛋白(S)、包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)和核衣壳蛋白(N)^([4])(图2A、2B)。S蛋白在结合宿主细胞上的受体中起着至关重要的作用,也决定了病毒的宿主向性^([5,6])。冠状病毒可以通过S蛋白的突变或与其他毒株重组获得与新的宿主受体结合的能力,从而发生组织或宿主嗜性的改变。冠状病毒受体特异性的改变决定了病毒的进化方向和跨种间传播。冠状病毒因其跨越多种宿主物种屏障的灵活性而闻名,具有传播人兽共患疾病的能力。

关键词：冠状病毒科基因组大小核衣壳蛋白结构蛋白冠状病毒属类病毒基质蛋白包膜蛋白

长江上游生态环境保护政策发展阶段与演变特征--以青海省为例

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资源科学 2024年第5期46卷 867-880页

作者：刘业轩甄霖黄麟肖玉中国科学院地理科学与资源研究所北京100101 中国科学院大学资源与环境学院北京100049

[目的]长江上游地区的生态环境对气候变化和人类活动十分敏感,实施可持续的生态环境保护政策有助于保障生态服务和资源的持续供给,促进社会经济发展与生态环境保护的协调发展。青海省地理位置特殊、自然资源丰富,其生态环境保护经验可... 详细信息

[目的]长江上游地区的生态环境对气候变化和人类活动十分敏感,实施可持续的生态环境保护政策有助于保障生态服务和资源的持续供给,促进社会经济发展与生态环境保护的协调发展。青海省地理位置特殊、自然资源丰富,其生态环境保护经验可为长江上游地区提供重要的示范和引领作用。因此,本文系统梳理青海省生态环境保护政策演变特征并揭示其存在问题,对政策制定和政策效益提升具有借鉴作用,可为长江上游地区相关政策的体制机制建设提供改进方向。[方法]基于ROST Content Mining System V6.0软件,对1998-2022年发布的95份青海省生态环境保护政策进行文本挖掘和量化分析。[结果]青海省生态环境保护政策的总体演变趋势与整体长江上游地区较为一致,而具体的政策措施与补助变化在长江上游地区中较为特殊。(1)生态保护起步阶段(1998-2004年)、生态保护与治理阶段(2005-2011年)、生态文明建设阶段(2012-2022年)3个阶段,青海省生态环境保护政策向综合化、系统化方向发展,政策体系、顶层设计不断完善。(2)政策中实施的生态治理措施的类型和数量不断增加,其中应用最多的是禁牧、草畜平衡等管理措施。政策补助的类型、来源和对象逐渐多元化,补助标准不断提高。政策实施效益从以生态效益为主向生态、经济、社会综合效益转变。(3)当前,政策存在的主要问题是青海省不同地区间、群体间的补助分配不公平,以及政策宣传培训、监管工作不到位。[结论]注重绿色发展、缩小区域贫富差距是长江上游地区生态环境保护政策改进的重点方向。应提高各级政府及相关部门的政策监管能力,将公众宣传培训、生态环境监测评估、公职人员考核奖惩工作落实到位;还应加强长江上游各省份生态环境保护工作的横向合作,促进青海省相关政策经验在整个长江上游地区的推广实施。

关键词：生态保护政策综述政策文本分析生态治理措施补助长江上游青海省

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交通运输业碳排放效率时空演变及趋势预测

环境科学 2024年第4期45卷 1879-1887页

作者：郑琰蒋雪梅肖玉杰南京林业大学汽车与交通工程学院南京210037 南京财经大学营销与物流管理学院南京210023

为探索周围邻域对交通运输业碳排放效率演变的影响,分析了交通运输业碳排放效率的时空演变特征,并对其长期演变趋势进行预测.首先,采用超效率SBM模型测度我国30个省份的交通运输业碳排放效率,利用核密度估计方法分析其随时间演变的特征... 详细信息

为探索周围邻域对交通运输业碳排放效率演变的影响,分析了交通运输业碳排放效率的时空演变特征,并对其长期演变趋势进行预测.首先,采用超效率SBM模型测度我国30个省份的交通运输业碳排放效率,利用核密度估计方法分析其随时间演变的特征;其次,构建传统与空间马尔可夫概率转移矩阵进一步分析了交通运输业碳排放效率的时空演变特征;最后,针对不同类型的省份提出相关建议.结果表明:(1)交通运输业碳排放效率的平均水平低于0.6,但呈逐年递增的趋势,且区域差异逐渐缩小.(2)各省份交通运输业碳排放效率至少有71%的概率维持原有状态,且短期内难以实现跨阶段转移.(3)地理空间格局影响交通运输业碳排放效率的演变过程,当某省份与碳排放效率高的省份相邻时,转移到高效率的概率增加,而与碳排放效率低的省份相邻时则相反.此外,在空间溢出效应的影响下,交通运输业碳排放效率的演变逐渐呈现“俱乐部收敛”的趋势.(4)从长期演变趋势来看,各省份交通运输业碳排放效率向高水平转移的可能性增大,呈现出由低到高递增的态势,同时“俱乐部收敛”现象逐渐消失.

关键词：交通运输业碳排放效率超效率SBM模型空间马尔科夫链模型时空演变趋势预测

布鲁氏菌外膜蛋白OMP10间接ELISA检测方法的建立及免疫原性评估

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中国人兽共患病学报 2023年第2期39卷 107-114页

作者：邓肖玉徐锦凤何金科谢珊珊王勇王震陈创夫石河子大学动物科技学院石河子832000 人兽共患传染性疾病防治协同创新中心石河子832000 武威职业学院武威733000 新疆第二医学院克拉玛依834000

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白OMP10间接ELISA检测方法,评价OMP10在小鼠体内的免疫效果。方法本研究表达和纯化了布鲁氏菌外膜蛋白OMP10,通过Western Blot进行验证,建立了OMP10间接ELISA检测方法,然后将OMP10与弗氏佐剂和LDH佐剂配伍成2种... 详细信息

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白OMP10间接ELISA检测方法,评价OMP10在小鼠体内的免疫效果。方法本研究表达和纯化了布鲁氏菌外膜蛋白OMP10,通过Western Blot进行验证,建立了OMP10间接ELISA检测方法,然后将OMP10与弗氏佐剂和LDH佐剂配伍成2种亚单位疫苗,免疫小鼠后检测抗体水平、脾脏淋巴细胞的增殖水平、CD4^(+)和CD8^(+)T细胞比值以及细胞因子分泌,最后通过攻毒试验评估OMP10的免疫保护效果。结果OMP10作为诊断抗原的特异性和符合率均高于70%;免疫小鼠后2种亚单位疫苗均能产生高滴度的IgG抗体,CD4^(+)/CD8^(+)T的比值均高于PBS对照组,IFN-γ高于PBS对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),但IL-4未发生明显变化,表明OMP10能够诱导很好的体液免疫及Th1型免疫应答。免疫保护结果显示,2种亚单位疫苗免疫组小鼠脾脏指数和脾脏载菌量低于布鲁氏菌M5感染组,差异具有统计学意义(P<0.01),表明OMP10蛋白配伍的亚单位疫苗对布鲁氏菌M5感染小鼠具有高度的保护作用。结论外膜蛋白OMP10在布鲁氏菌诊断和疫苗方面具有一定的应用价值。

关键词：布鲁氏菌外膜蛋白OMP10 间接ELISA 抗体水平细胞因子免疫保护

基于LSTMQR-KDE方法的两阶段人员配备模型的优化研究 ——以某银行呼叫中心为例

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基于LSTMQR-KDE方法的两阶段人员配备模型的优化研究 ——以某银...

作者：肖玉雪山东财经大学

学位级别：硕士

近年来,随着数字化时代的快速发展,呼叫中心的结构发生了显著的变化,各个部门的分工越来越精细,这种精细化的管理虽然提高了运营效率,但是也导致了人力运营成本的不断上升,为了呼叫中心的可持续发展,必须采取一定的措施,合理配备人员,... 详细信息

近年来,随着数字化时代的快速发展,呼叫中心的结构发生了显著的变化,各个部门的分工越来越精细,这种精细化的管理虽然提高了运营效率,但是也导致了人力运营成本的不断上升,为了呼叫中心的可持续发展,必须采取一定的措施,合理配备人员,降低人力运营成本。目前呼叫中心常用的人员配备方法有单阶段人员配备模型、两阶段人员配备模型,但是这两种模型存在一定的局限性,一方面,在模型结构上,单阶段模型直接通过预测呼叫量来确定人员配备水平,这种模式程序简单,但灵活性较低,不适用于呼叫波动较大的情况;两阶段人员配备模型虽然在单阶段模型的基础上,增加了人员调整阶段,灵活性显著提高,但是依然存在着人员配置不恰当,人力运营成本高的问题。另一方面,在预测方法上,这两种人员配备模型对呼叫的预测大多使用统计模型(例如时间序列预测模型)或者机器学习方法,预测结果为点预测,无法表征呼叫到达的随机性并且,使得相关工作人员可能会出现决策失误,增加人力运营成本。因此,针对现行模型的存在的问题,本文构建呼叫中心两阶段人员配备优化模型,在现行两阶段模型的基础上,加入报童模型思想,优化人员配备方法,达到降低呼叫中心的人力运营成本的最终目的。两阶段人员配备优化模型结构如下:第一阶段为预测与计划阶段,采用LSTMQR-KDE的方法对呼叫量进行分布预测,解决了呼叫中心呼叫量为确定性点预测的问题,得到分布预测之后,应用报童模型原理,计算最优成本下的初始人员配备水平,解决了人员配置方法不恰当,人力成本高的问题;第二阶段为人员实时调整阶段,根据呼叫中心实时情况,若呼叫预测值高于实际值导致人员配备过剩,则将空闲的人工坐席移除或分配其它的任务;若呼叫预测值低于实际值导致人员配备不足,则招募并培训新的灵活坐席上岗,完成两个阶段之后,计算消耗的人力成本。为了验证本文构建的优化模型效果,将LSTMQR-KDE的预测结果与其它传统预测方法进行预测精度的对比;将优化之后的两阶段模型与传统两阶段模型进行成本的对比。实证分析结果表明,本文构建的基于LSTMQR-KDE方法的两阶段人员配备优化模型对呼叫量的预测精度更高,与传统两阶段人员配备模型相比成本更低。综上所述,本文构建的基于LSTMQR-KDE方法的两阶段人员配备优化模型可以获得呼叫量的分布预测,相比于传统的点预测,提高了预测精度,为工作人员展现了完整的分布预测图,具有较强的适应性;在优化模型中应用报童模型原理,可以计算出成本最低的初始人员配备水平,有助于降低人员配备成本,对提升呼叫中心系统人员配备的经济效益有着重大的意义。

关键词：两阶段人员配备优化模型呼叫预测人员配备 LSTM神经网络分位数回归