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表达猪流行性腹泻病毒S1基因植物乳酸杆菌工程菌的免疫原性分析

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生物工程学报 2021年第8期37卷 2779-2785页

作者：聂民财岳健国邓益超杨姝朱玲徐志文四川农业大学动物医学院四川成都611130 四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130 成都市动物疾病预防控制中心四川成都610041 四川师范大学生命科学学院四川成都610101

为探究表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1基因的植物乳杆菌工程菌是否对动物产生保护力,利用构建的含重组质粒pVE5523-S1乳杆菌口服免疫豚鼠3次,每次间隔14 d,每次2×10^(8) CFU/只。并以植物乳杆菌及含表... 详细信息

为探究表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1基因的植物乳杆菌工程菌是否对动物产生保护力,利用构建的含重组质粒pVE5523-S1乳杆菌口服免疫豚鼠3次,每次间隔14 d,每次2×10^(8) CFU/只。并以植物乳杆菌及含表达质粒pVE5523植物乳杆菌为阴性对照,进行相同处理。用猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎二联活疫苗(HB08株+ZJ08株)肌肉注射接种豚鼠,免疫3次,每次间隔14 d,每次0.2 mL/只,作为阳性对照。分别在免疫后的0 d、7 d、14 d、24 d、31 d、41 d及48 d对4组试验豚鼠心脏采血并分离血清,进行酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体和中和试验分析,同时无菌采豚鼠脾脏,进行脾细胞增殖实验分析。结果显示,工程菌能刺激机体产生分泌性抗体sIgA、特异性中和抗体,还可刺激机体IL-4和IFN-γ的增长以及脾细胞的增殖。说明该PEDVS1基因植物乳杆菌工程菌使豚鼠对PEDV产生了特异性免疫力,为后续口服疫苗的研究奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒S1基因植物乳杆菌黏膜免疫免疫原性

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鼻液盒内衬垫的吸塑成型分析与模具设计

工具技术 2014年第11期48卷 41-43页

作者：徐莹邓益超重庆工商大学

针对鼻液盒内衬垫,进行了吸塑成型工艺的分析与模具设计。分析内衬垫的结构与选材,对三种成型方案进行比较,对吸塑机构的结构与工作过程进行说明,并设计吸塑模结构。

关键词：鼻液盒内衬垫吸塑成型吸塑机构吸塑模

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畜禽智能养殖技术研究进展及挑战

兽医导刊 2021年第24期 115-116页

作者：罗彪邓益超刘梦良陈军资阳市动物疫病预防控制中心四川资阳641300

目前,我国养殖业正逐步由传统的农户散养转型为集约化、规模化、标准化养殖,随着科技不断进步和人工智能等新型信息技术与养殖业的不断融合,以及国家在智慧农业或智慧农业产业化上给予了诸多的政策及扶持,我国养殖业必将从自动化向智能... 详细信息

目前,我国养殖业正逐步由传统的农户散养转型为集约化、规模化、标准化养殖,随着科技不断进步和人工智能等新型信息技术与养殖业的不断融合,以及国家在智慧农业或智慧农业产业化上给予了诸多的政策及扶持,我国养殖业必将从自动化向智能化迈进。笔者从环境监控、体况监测、异常行为识别等养殖过程中智能监测技术进行综述,讨论了智能养殖技术应用过程中面临的挑战,并提出相应的建议,以期为智能养殖提供借鉴与参考。

关键词：智能养殖监测传感器

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非洲猪瘟及其综合防控措施

中兽医学杂志 2021年第10期 18-20页

作者：罗彪陈军邓益超刘孟良四川省资阳市动物疫病预防控制中心四川资阳641300

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。ASFV能够感染任何种类或者各年龄段的家猪或者野猪,病死率可达100%。世界动物卫生组织(OIE)将ASF列为必须报告的重大动物疫病,我国将其列为一类动物疫病... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。ASFV能够感染任何种类或者各年龄段的家猪或者野猪,病死率可达100%。世界动物卫生组织(OIE)将ASF列为必须报告的重大动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。本文针对养殖业主和政府部门提出一些防控建议,以期为ASF防控提供参考。

关键词：非洲猪瘟疫病防控措施

伪狂犬病病毒四川流行株的分离鉴定及gE和gD基因的序列分析

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中国兽医科学 2016年第7期46卷 827-833页

作者：赵军殷玥毛汐语吕文婷邓益超樊毅许思遥朱玲徐志文四川农业大学动物医学院动物生物技术中心四川成都611130 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

为了解当前四川省伪狂犬病病毒(PRV)流行株的生物学特性及分子特征,2015年从四川省9个市13个猪场采集了13份疑似猪伪狂犬病病毒感染发病病例的脑组织,采用PCR鉴定、PK-15细胞分离培养、蚀斑纯化和动物回归试验等方法从脑组织中共分离得... 详细信息

为了解当前四川省伪狂犬病病毒(PRV)流行株的生物学特性及分子特征,2015年从四川省9个市13个猪场采集了13份疑似猪伪狂犬病病毒感染发病病例的脑组织,采用PCR鉴定、PK-15细胞分离培养、蚀斑纯化和动物回归试验等方法从脑组织中共分离得到4株PRV,分别命名为PRV-SC-1、PRV-SC-2、PRV-SC-3、PRV-SC-4。通过对gE、g D基因序列进行遗传进化分析,结果表明,本次分离得到的PRV-SC-3株(G en Bank登录号:KU 605803)与N CBI上公布的中国广东2013年分离株KR051971.1和2015年分离株KT 936476.1的亲缘关系最近(同源性为100%),属于同一进化分支,它与2010年公布的比利时分离株F J605132.1的亲缘关系最远(同源性为97.5%);对PRV-SC-3株gE糖蛋白的生物信息学分析结果显示,分离株PRV-SC-3的T细胞抗原表位较2012年后国内分离株未发生变化,但其较比利时分离株减少了2个酪氨酸磷酸化位点。本研究结果为四川省伪狂犬病最新流行动态及病毒变异情况研究奠定了基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒分离鉴定生物信息学分析一步生长曲线

猪繁殖与呼吸综合征病毒四川株的分离鉴定及Nsp2生物信息学分析

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中国兽医科学 2016年第12期46卷 1497-1504页

作者：毛汐语周远成赵军殷玥吕雯婷邓益超樊毅许思遥朱玲徐志文四川农业大学动物医学院动物生物技术中心四川成都611134 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611134

为了解四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况及分子特征,本研究选用2012—2014年四川省不同地区采集并诊断为PRRSV阳性的病料,以Marc 145细胞进行病毒分离,经蚀斑纯化,病毒基因扩增、测序后与NCBI现有序列进行比对分析并通过... 详细信息

为了解四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况及分子特征,本研究选用2012—2014年四川省不同地区采集并诊断为PRRSV阳性的病料,以Marc 145细胞进行病毒分离,经蚀斑纯化,病毒基因扩增、测序后与NCBI现有序列进行比对分析并通过构建系统进化树等方法研究分离株的分子特征。共成功分离到10株PRRSV,分析证明所有分离毒株均是高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)株,序列比对显示,其中SC2012、SC2012-2株Nsp2部分基因与众多HP-PRRSV株核苷酸同源性在91%~97%之间,与经典毒株CH-1a株同源性为72.9%,与所有BLAST毒株相比存在新缺失位点,与CH-1a、BJ-4株相比,在Nsp2蛋白485 aa^498 aa处存在14个连续氨基酸缺失,其他8株均含30个不连续氨基酸缺失。氨基酸同源性比对显示,SC2012、SC2012-2株高变区与国内分离株同源性介于61.5%~97.2%之间。通过TCID50法测得SC2012、SCSN2012-1、SCSN2012-2、SCCD2012、SCLS2012、SCMY2012、SCBZ2012、SCXC2012、SCXJ2012和SC2012-2病毒毒价分别为10^(-5.41)/m L、10^(-6.5)/m L、10^(-7.29)/m L、10^(-6.41)/m L、10^(-5.5)/m L、10^(-7.67)/m L、10^(-6.29)/m L、10^(-6.8)/m L、10^(-7.41)/m L和10^(-6)/m L。以上结果表明,本研究所分离的SC2012、SC2012-2株是新变异毒株,为四川省PRRSV分子流行病学和遗传变异研究奠定了一定基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定 Nsp2 生物信息学

猪伪狂犬病毒Fa株侵染对PK-15细胞microRNAs表达谱的影响

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微生物学通报 2016年第9期43卷 2010-2018页

作者：刘鹏娟乔小改李萍黄剑波卓秀萍方和俊邓益超徐志文朱玲四川农业大学动物生物技术中心四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

【目的】分析猪伪狂犬病毒Fa株(PRV-Fa)侵染对猪肾传代细胞PK-15 microRNAs(miRNAs)表达谱的影响。【方法】利用Illumina高通量测序技术,鉴定感染和非感染PRV-Fa的PK-15细胞的miRNAs;筛选并利用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)验证差异表... 详细信息

【目的】分析猪伪狂犬病毒Fa株(PRV-Fa)侵染对猪肾传代细胞PK-15 microRNAs(miRNAs)表达谱的影响。【方法】利用Illumina高通量测序技术,鉴定感染和非感染PRV-Fa的PK-15细胞的miRNAs;筛选并利用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)验证差异表达miRNAs;对差异miRNAs进行靶基因预测和Gene ontology(GO)分析。【结果】在感染和未感染PK-15细胞中分别检测到384个和405个miRNAs,其中感染PRV-Fa后差异表达的miRNAs共127个(60个上调,67个下调)。荧光定量结果显示差异miRNAs的表达趋势与高通量测序结果一致。GO分析显示,miRNAs广泛参与信号传导、细胞代谢、免疫反应、基因表达等生物学进程,其中miR-10b、miR-16、miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-145-5p、miR-146a、miR-181a、miR-499-5p等miRNAs与免疫相关。在靶基因调控网络图中,ssc-miR-30a-5p与ssc-miR-30d处于关键位置。研究鉴定出5个新的病毒编码miRNAs,其中PRV-miR-LLT2与PRV-miR-LLT4靶向PRV早期蛋白基因EPO。【结论】伪狂犬病毒Fa株感染对PK-15细胞编码miRNAs有显著影响。

关键词：猪伪狂犬病毒 microRNAs 高通量测序 PK-15细胞

猪戊型肝炎病毒SYBR Green Ⅱ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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中国人兽共患病学报 2017年第11期33卷 1002-1006,1017页

作者：李幽幽龚双燕李小璟毛汐语邓益超朱玲徐志文四川农业大学动物医学院成都611134 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室成都611134

目的建立一种快速检测猪戊型肝炎病毒(HEV)的方法。方法针对HEVORF2基因保守序列设计1对引物,基于SYBR GreenⅡ染料,建立了检测HEV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果该方法只能对猪戊型肝炎病毒检测到荧光,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪... 详细信息

目的建立一种快速检测猪戊型肝炎病毒(HEV)的方法。方法针对HEVORF2基因保守序列设计1对引物,基于SYBR GreenⅡ染料,建立了检测HEV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果该方法只能对猪戊型肝炎病毒检测到荧光,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒均不能检测到荧光信号,特异性好;检测HEV时,在4.10×10~2~4.10×10~8拷贝/μL内具有良好的线性关系,灵敏度可以达到1.00×10~2拷贝/μL,扩增相关系数为0.996,扩增产物的熔解温度为84.0℃±0.1℃,该检测方法组内变异系数为0.83%~0.94%,组间变异系数为0.83%~0.94%,重复性较好。利用该方法对临床61份来自四川各地的猪肠内容物进行检测,检出9份阳性,且与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结论建立的针对HEV的荧光定量RT-PCR有效可行,对HEV的临床检测和进一步研究奠定了基础。

关键词：猪戊型肝炎病毒 SYBR GreenⅡ 荧光定量RT-PCR

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电容式电压互感器测量误差智能预测系统设计

电容式电压互感器测量误差智能预测系统设计

作者：邓益凡南昌航空大学

学位级别：硕士