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肿瘤免疫与基因治疗研究进展

中国科学：生命科学 2022年第11期52卷 1567-1577页

作者：何治尧罗敏杨莉邓洪新魏于全四川大学华西医院肿瘤中心成都610041 四川大学生物治疗国家重点实验室成都610041

随着新兴免疫检查点抑制剂、溶瘤病毒和嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T, CAR-T)细胞等肿瘤免疫与基因治疗制品获批临床使用,肿瘤免疫与基因治疗已经改变了实体瘤、血液肿瘤的治疗现状,在全球范围内获得权威组织、专家的广... 详细信息

随着新兴免疫检查点抑制剂、溶瘤病毒和嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T, CAR-T)细胞等肿瘤免疫与基因治疗制品获批临床使用,肿瘤免疫与基因治疗已经改变了实体瘤、血液肿瘤的治疗现状,在全球范围内获得权威组织、专家的广泛共识,正在成为多种肿瘤的一线治疗方案.但是,该领域目前仍然面临免疫治疗相关不良反应较多、溶瘤病毒疗效不显著的问题,而CAR-T细胞治疗有待突破实体瘤治疗的瓶颈以及下调高昂的价格等.针对这些关键科学问题,四川大学华西医院从疾病分子网络研究到创新生物技术药物研发及转化进行了一系列探索,取得了较为丰硕的成果.本文对近年来其中有关肿瘤免疫与基因治疗的研究进行综述.期待华西医院以建院130周年为契机,未来持续产出更多世界一流的成果,引领学科发展,同时造福社会.

关键词：免疫治疗免疫检查点抑制剂肿瘤疫苗信使核糖核酸疫苗溶瘤病毒基因治疗基因编辑

一种新的双元表达质粒pCMV-Myc-IRES-EGFP的构建及其表达

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生物工程学报 2007年第3期23卷 423-428页

作者：严飞赵新宇邓洪新魏于全四川大学生命科学院四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室

为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨... 详细信息

为了研究基因的特征、理化特性及其功能机制,通常需要构建多个真核表达载体,涉及到多次的引物设计、酶切、连接和鉴定等繁琐的亚克隆过程。构建携带易于多种实验研究的多用或通用载体是基因工程载体的发展方向。为此,利用pIRES载体为骨架质粒,在A和B多克隆位点上分别插入c-Myc标签蛋白序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列,从而构建了一个包含c-Myc标签蛋白序列并携带有核糖体结合位点(IRES)介导的增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pCMV-Myc-IRES-EGFP。通过荧光检测和免疫印迹实验证实该载体能在哺乳细胞中表达。该载体可用于监测细胞的转染效率、分选稳定表达的阳性细胞群体、体外转录和翻译、检测或纯化目的蛋白以及捕获相关作用蛋白等多种实验研究,为基因功能研究提供了便利。

关键词：载体构建绿色荧光蛋白核糖体结合位点

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诱导抗肿瘤反应的肿瘤抗原的鉴定及应用

科学通报 2003年第9期48卷 881-884页

作者：谢可田聆邓洪新魏于全四川大学华西医院肿瘤中心人类疾病生物治疗教育部重点实验室成都610041

肿瘤抗原[1](tumor antigen)的存在与发现是肿瘤免疫治疗的基础, 在肿瘤免疫反应、免疫耐受、肿瘤标志物检测、肿瘤免疫治疗等方面的作用和应用前景越来越受到人们的关注. 本文阐述了近年来肿瘤抗原的研究进展.

关键词：肿瘤抗原抗肿瘤反应免疫治疗免疫耐受标志物检测鉴定方法

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肿瘤生物治疗研究进展

世界科技研究与发展 2004年第2期26卷 1-6页

作者：邓洪新魏于全四川大学华西医院

生物治疗是应用生物技术对各种疾病 (诸如恶性肿瘤、先天性遗传病、传染性疾病、心血管疾病、风湿免疫性疾病等 )进行治疗的一种新的治疗手段。生物治疗研究范围非常广泛 ,主要包括基因治疗、免疫治疗 (过继免疫治疗、疫苗治疗、抗体治... 详细信息

生物治疗是应用生物技术对各种疾病 (诸如恶性肿瘤、先天性遗传病、传染性疾病、心血管疾病、风湿免疫性疾病等 )进行治疗的一种新的治疗手段。生物治疗研究范围非常广泛 ,主要包括基因治疗、免疫治疗 (过继免疫治疗、疫苗治疗、抗体治疗、细胞因子治疗等 )、抗血管生成治疗、干细胞治疗、诱导分化及凋亡、内分泌治疗等 ,下面主要就肿瘤基因治疗。

关键词：生物治疗肿瘤基因治疗免疫治疗抗新生血管生成治疗

小鼠凋亡相关新基因PNAS-4真核表达载体的构建、表达及体外抗肿瘤作用

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1140-1143页

作者：袁铸严飞赵新宇邓洪新李炯四川大学生命科学学院四川成都610064 四川大学华西医院肿瘤生物治疗国家重点实验室四川成都610041

目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA... 详细信息

目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况。方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4;用脂质体将pcDNA3.1(+)-mPNAS-4转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞;用RT-PCR检测转染细胞中mPNAS-4的过表达情况;通过MTT、流式细胞术(FCM)及DNALadder分别检测转染细胞的增殖与凋亡情况。结果:从小鼠肝脏组织中克隆到mPNAS-4全长cDNA并成功构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4,转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞可使其mRNA表达明显上调。mPNAS-4过表达能抑制LL2细胞增殖并诱导其凋亡。结论:mPNAS-4过表达对小鼠Lewis肺癌LL2细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用。

关键词： PNAS-4 基因转染真核表达凋亡

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大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选

四川大学学报（医学版） 2004年第3期35卷 305-308页

作者：彭枫田聆邓洪新李玉杨寒朔阚兵赵霞廖建魏于全四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室肿瘤中心成都610041 四川大学华西第二医院妇产科

目的　通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法　将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果　通... 详细信息

目的　通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法　将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果　通过两轮筛选获得 10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这 10个阳性单克隆 c DNA序列编码 7种不同的蛋白 ,其中 OV- 2、OV- 4为肿瘤相关序列 ,OV- 6、OV- 7为编码未知蛋白的序列。结论　用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了 SEREX技术的应用范围 ,是一种行之有效的方法。

关键词：血清学分析异种同源抗原 cDNA文库

RNA干扰黏着斑激酶抑制人肝癌细胞sk-hep-1生长的实验研究

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四川大学学报（医学版） 2011年第4期42卷 455-460页

作者：许文婧张双张娜杨阳魏于全邓洪新四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室成都610041

目的通过运用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi),干扰人肝癌细胞系sk-hep-1的黏着斑激酶(FAK)的表达,初步探讨干扰效果。方法在体外,用转染试剂FugeneHD将靶向FAK基因的小发夹RNA质粒(pshFAK)转染至sk-hep-1细胞中,通过流式细胞术、RT... 详细信息

目的通过运用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi),干扰人肝癌细胞系sk-hep-1的黏着斑激酶(FAK)的表达,初步探讨干扰效果。方法在体外,用转染试剂FugeneHD将靶向FAK基因的小发夹RNA质粒(pshFAK)转染至sk-hep-1细胞中,通过流式细胞术、RT-PCR和Western bolt分析靶向FAK基因的RNAi对细胞的影响。在体内,用阳离子脂质体包装质粒,通过尾静脉注射治疗裸鼠皮下肿瘤模型,通过分析肿瘤生长曲线,肿瘤体积及瘤重,肿瘤组织的FAK、CD31、PCNA的免疫组化以及TUNEL,分析体内治疗效果。结果 sk-hep-1细胞经pshFAK作用后,FAK的mRNA及蛋白质水平均降低(P<0.001),凋亡率增高。皮下肿瘤模型经治疗后,生长速度缓于对照组,肿瘤大小及瘤重降低(P<0.001)。肿瘤标本的免疫组化及TUNEL显示肿瘤标本的FAK蛋白表达下调,血管生成减少,增殖减少及凋亡增加(P<0.001)。结论靶向FAK基因的RNAi可以抑制FAK在人肝癌细胞sk-hep-1的表达,抑制肿瘤生长速度,促进其凋亡,FAK可以成为有潜力的肝癌治疗的靶点。

关键词：人肝癌 RNA干扰黏着斑激酶裸鼠

新基因PCIA1真核表达载体的构建及HeLa细胞稳定转染株的建立与鉴定*

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四川大学学报（医学版） 2006年第3期37卷 335-338页

作者：王瑞邓洪新王国庆严飞彭枫四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室肿瘤中心成都610041

目的构建人的新基因(PCIA1)的真核表达载体,并将其载体稳定转染到HeLa细胞株中。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增PCIA1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-PCI... 详细信息

目的构建人的新基因(PCIA1)的真核表达载体,并将其载体稳定转染到HeLa细胞株中。方法以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总RNA为模板,通过RT-PCR扩增PCIA1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-PCIA1,重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将该表达载体导入到HeLa细胞中,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,用RT-PCR和Westernblot检测PCIA1基因在HeLa细胞中的表达。结果经RT-PCR及Westernblot检测,证实真核表达重组质粒pcDNA-PCIA1构建成功,PCIA1基因已经稳定转染到了HeLa细胞中并表达PCIA1蛋白。结论成功建立了人新基因PCIA1的稳定转染细胞株,为进一步研究PCIA1的功能奠定了基础。

关键词： PCIA1 载体构建转染鉴定 HeLa细胞

IP-10质粒联合吉西他滨抗肿瘤作用的实验研究

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癌症 2005年第4期24卷 397-402页

作者：梅开田聆魏于全李炯文艳君阚兵邓洪新四川大学华西医院肿瘤生物治疗研究中心人类疾病生物治疗教育部重点实验室四川成都610041

背景与目的:IP鄄10是α趋化因子家族成员,IP鄄10具有抗肿瘤血管作用,表现为抑制新生血管分化成毛细血管。研究表明,化疗与抗肿瘤血管治疗结合具有协同作用。本研究拟用IP鄄10质粒与化疗药物吉西他滨联合治疗肿瘤,观察其抗肿瘤作用。方法... 详细信息

背景与目的:IP鄄10是α趋化因子家族成员,IP鄄10具有抗肿瘤血管作用,表现为抑制新生血管分化成毛细血管。研究表明,化疗与抗肿瘤血管治疗结合具有协同作用。本研究拟用IP鄄10质粒与化疗药物吉西他滨联合治疗肿瘤,观察其抗肿瘤作用。方法:质粒pBLAST鄄IP鄄10转化至大肠杆菌中,经扩增后,制备并纯化质粒。采用BALB/c及C57BL/6小鼠,分别建立H22肝癌及Lewis肺癌肿瘤模型。IP鄄10质粒及生理盐水肌肉注射,吉西他滨腹腔注射。收集小鼠血清,ELISA方法检测血清中IP鄄10蛋白表达;观察肿瘤体积变化、小鼠存活期及不良反应;肿瘤组织微血管免疫组化染色,确定微血管密度;TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果:IP鄄10质粒肌注后小鼠血清中IP鄄10蛋白表达于第2周达高峰[(16.8±3.6)ng/ml],至第5周仍持续有较高水平表达[(14.0±2.1)ng/ml]。IP鄄10质粒联合吉西他滨组小鼠肿瘤体积较对照组显著受抑甚至消退,在接种肿瘤细胞后第9周联合给药组小鼠存活率为90%,明显高于其他各组(IP鄄10质粒组55%,吉西他滨组以及生理盐水组为0%)(P<0.005);各组小鼠均未出现明显的不良反应。肿瘤组织内微血管密度在联合给药组为15.8±2.4,显著低于其它各组(IP鄄10组45.6±2.0,吉西他滨组50.2±3.5和生理盐水组51.3±3.0)(P<0.01)。在接种肿瘤细?

关键词： IP-10质粒吉西他滨微血管密度抗血管生成肿瘤