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白细胞介素1β促进GH_3细胞中人生长激素基因表达的机制

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中国医学科学院学报 2004年第3期26卷 255-262页

作者：龚凤英邓洁英史轶蘩张殿喜中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内分泌科北京100730

目的研究白细胞介素1β(IL-1β)对大鼠垂体GH3细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制。方法采用荧光素酶报告基因方法。建立含hGH基因启动子(-484～30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3细胞株,然后加入IL-1β... 详细信息

目的研究白细胞介素1β(IL-1β)对大鼠垂体GH3细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制。方法采用荧光素酶报告基因方法。建立含hGH基因启动子(-484～30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3细胞株,然后加入IL-1β或IL-1β与胞内信号转导途径的抑制剂,通过检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量以及GH3细胞内荧光素酶的变化,反映IL-1β对GH分泌、合成、hGH基因启动子活性的影响及可能的作用机制。结果IL-1β(10～104U/ml)均能刺激大鼠垂体GH3细胞中GH的分泌和合成,102～104U/ml的IL-1β还能剂量依赖性地增加细胞中荧光素酶的表达熏最高达对照组的161%;在胞内信号转导抑制剂中,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂PD98059(40μmol/L)和p38MAPK抑制剂SB203580(5μmol/L)均能完全阻断IL-1β促进GH3细胞中荧光素酶表达的作用,磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)抑制剂LY294002(10μmol/L)能部分抑制IL-1β的促进作用;Pit-1蛋白过表达和表达被抑制对IL-1β的促进作用没有影响;在含不同长度hGH基因启动子序列的质粒中,IL-1β促进GH3细胞中hGH基因启动子活性的关键序列在-196～-132bp之间。结论IL-1β能增强垂体GH3细胞中hGH基因的启动子的活性,此作用可能需要激活细胞内依赖MAPK。

关键词：白细胞介素1β 生长激素基因启动子 GH3细胞荧光素酶

激素对T淋巴细胞生长激素基因表达调控的影响

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中国免疫学杂志 2001年第11期17卷 595-600页

作者：王辉邓洁英史轶蘩河南新乡医学院免疫学研究室中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院北京100730

目的 :探讨各种激素对T淋巴细胞GH基因表达的影响。方法 :构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒PGL2 GH luc,然后转染入T淋巴细胞系———JurkatE6 1细胞中 ,在培养液中分别加入各种激素。结果 :各浓度的GH、GHRH对Jurkat细胞中... 详细信息

目的 :探讨各种激素对T淋巴细胞GH基因表达的影响。方法 :构建含人GH调控序列的荧光素酶报告基因质粒PGL2 GH luc,然后转染入T淋巴细胞系———JurkatE6 1细胞中 ,在培养液中分别加入各种激素。结果 :各浓度的GH、GHRH对Jurkat细胞中荧光素酶的表达有抑制作用 (P <0 0 1) ,而高剂量的TRH( 10、10 0nmol/L)和SS( 10 0nmol/L)对Jurkat细胞中荧光素酶的表达也有抑制作用 ( P<0 0 5 )。结论 :T淋巴细胞中GH基因的表达受下丘脑激素和GH的调节。

关键词：生长激素基因 T淋巴细胞激素基因表达基因调控

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垂体前叶的基础与临床研究近况

中华内分泌代谢杂志 1996年第1期12卷 40-42页

作者：邓洁英史轶蘩北京协和医院内分泌科 100730

肽类合成、基因工程和分子生物学等技术的发展和应用,以及单克隆抗体的大量合成,大大推动了内分泌学的进展,尤其是九十年代以来,基础和临床内分泌学都有了很大的提高。垂体前叶的生理和病理生理的研究开始进入分子水平。近几年的基础和... 详细信息

肽类合成、基因工程和分子生物学等技术的发展和应用,以及单克隆抗体的大量合成,大大推动了内分泌学的进展,尤其是九十年代以来,基础和临床内分泌学都有了很大的提高。垂体前叶的生理和病理生理的研究开始进入分子水平。近几年的基础和临床研究主要集中在下面几方面: 1.垂体前叶激素旁分泌的研究激素的旁分泌和自分泌调节的发现是最近20年以来激素调节的最重要进展之一。现在认为在经典内分泌腺中都存在旁分泌和自分泌调节。垂体前叶至少有5种内分泌细胞,细胞间相互关系是非常复杂的。最近几年由于研究方法学的改良,特别是分子生物学技术的应用,大大促进了垂体前叶旁分泌的研究。

关键词：垂体前叶激素垂体肿瘤

先天性肾性尿崩症患者精氨酸加压素受体2基因突变的检测分析

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中华医学杂志 2002年第20期82卷 1401-1405页

作者：顾锋史轶蘩邓洁英金自孟中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内分泌科 100730

目的　探讨并检测先天性尿崩症患者精氨酸加压素受体 2 (AVPR2 )基因突变的临床意义。方法　对临床诊断为先天性尿崩症的 7例患者及 2 4名亲属的血液样本 ,提取基因组DNA ,通过PCR扩增AVPR2基因的 6个片断 ,用单链构象多肽性 (SSCP)进... 详细信息

目的　探讨并检测先天性尿崩症患者精氨酸加压素受体 2 (AVPR2 )基因突变的临床意义。方法　对临床诊断为先天性尿崩症的 7例患者及 2 4名亲属的血液样本 ,提取基因组DNA ,通过PCR扩增AVPR2基因的 6个片断 ,用单链构象多肽性 (SSCP)进行基因突变的筛查 ,再对异常条带进行DNA测序证实基因的突变。结果　在 7例先天性尿崩症的患者中 ,发现 6例患者存在 5种类型共8个AVPR2的突变点 ,2例患者有AVPR2基因的双点突变 ,其余为单突变点 ,1例患者的母亲为AVPR2基因突变的携带者。其中 4个突变点国际尚未报道 ,它们分别是 :G 4 6 9 4 93del 2 4 ,G 5 4 1insT ,G 4 6 2delC和G 935T >C ,分别导致AVPR2受体蛋白A37 L4 4del(缺失突变 ) ,A6 1G 190X(插入移码突变 ,无义突变 ) ,P34R 36X(缺失移码突变和无义突变 ) ,C192R(错义突变 )。结论　发现了 4种新的AVPR2基因突变类型。采用PCR SSCP的方法可以对尿崩症的患者进行基因突变的粗筛 ,最后经过DNA测序可以做出基因突变的诊断。

关键词：肾原性尿崩症精氨酸升压素基因突变

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中枢性尿崩症408例的病因及临床特点分析

中华医学杂志 2001年第19期81卷 1166-1171页

作者：顾锋金自孟张殿喜邓洁英史轶蘩中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内分泌科 100730

目的　探讨中枢性尿崩症 (CDI)患者的病因及临床特点。方法　采用回顾性病例研究方法 ,对北京协和医院 195 6～ 2 0 0 0年所收治的 40 8例中枢性尿崩症患者进行分析 ,其中包括 113例鞍区肿瘤导致的CDI患者 ,并对初诊时不能明确病因诊断... 详细信息

目的　探讨中枢性尿崩症 (CDI)患者的病因及临床特点。方法　采用回顾性病例研究方法 ,对北京协和医院 195 6～ 2 0 0 0年所收治的 40 8例中枢性尿崩症患者进行分析 ,其中包括 113例鞍区肿瘤导致的CDI患者 ,并对初诊时不能明确病因诊断的 35例CDI患者进行了 3个月～ 16年的随访。结果　在儿童青少年时期CDI的发病多在 8～ 12岁 ,在成人CDI的发病多在 2 5～ 35岁之间 ;CDI病因中特发性尿崩症占 5 2 % ,儿童青少年时期鞍区肿瘤占 33% ,其中以生殖细胞瘤为主 ,占 6 5 % ;而成年人鞍区肿瘤占 2 2 % ,并且外伤导致的CDI占 11% ,明显高于儿童时期 (占 5 % ) ;组织细胞增生症均发生在儿童青少年时期 ,占 3% ;伴有生长迟缓或生长速度下降的GH缺乏 ,是诊断鞍区肿瘤导致的CDI的独立危险因素 ;CDI患者无明显诱因症状突然缓解 ,是CDI病情加重的提示性征象 ;鞍区薄层MRI检查是CDI病因诊断最有价值的检查手段 ,对于初诊不能明确病因的CDI患者 ,应该 3～ 6个月复查MRI。结论　有 86 %的患者在 2年随访期内得到明确的病因诊断 ;除肿瘤之外的CDI患者只要进行激素的替代治疗 ,预后良好 ,几乎不会因CDI而死亡 ;放射治疗是治疗鞍区生殖细胞瘤最有效的方法 ,采用正规的放射治疗或加手术均可使CDI患者的长期生存率达到 80 %以?

关键词：中枢性尿崩症生殖细胞瘤颅咽管瘤神经性垂体病因临床特点

活化素抑制大鼠垂体GH_3细胞中人生长激素基因启动子的活性

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生理学报 2010年第1期62卷 49-54页

作者：龚凤英邓洁英朱惠娟潘慧中国医学科学院&北京协和医院内分泌科卫生部内分泌重点实验室北京100730

本研究旨在探讨活化素(activin)对大鼠垂体GH3细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制。采用荧光素酶报告基因方法。首先建立含hGH基因启动子(-484～+30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3细胞株,然后加入活化... 详细信息

本研究旨在探讨活化素(activin)对大鼠垂体GH3细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制。采用荧光素酶报告基因方法。首先建立含hGH基因启动子(-484～+30bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3细胞株,然后加入活化素或同时加入活化素与相关信号转导途径的激动剂,通过检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,以及GH3细胞内荧光素酶的变化,反映活化素对GH分泌、合成和hGH基因启动子活性的影响。将含不同长度hGH基因启动子序列的荧光素酶表达质粒分别转染GH3细胞,观察它们对活化素的反应,寻找活化素影响hGH基因启动子活性的关键DNA序列。结果表明,活化素(5,50nmol/L)能抑制大鼠垂体GH3细胞中GH的分泌和合成,活化素(5,50nmol/L)还能够抑制GH3细胞中hGH基因启动子的活性,使之仅达对照组的77%和69%;在胞内信号转导激动剂中,丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性激动剂C6ceramide(1μmol/L)完全取消了活化素对hGH基因启动子活性的抑制作用;活化素发挥抑制作用所需要的hGH基因启动子关键序列位于-132～-66bp之间。上述研究表明,活化素能抑制大鼠垂体GH3中hGH基因启动子的活性,它可能是通过抑制细胞内依赖MAPK的信号转导途径来完成的,同时hGH启动子上-132～-66bp的序列在其中发挥重要的作用。

关键词：活化素生长激素启动子 GH3细胞丝裂原活化蛋白激酶激酶

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人血清泌乳素的放射免疫分析法

中华核医学杂志 1990年第2期10卷 115-116页

作者：邓洁英高素敏中国医学科学院协和医院

人生长激素的生物素-亲和素放大酶联免疫法的建立

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基础医学与临床 2001年第3期21卷 275-277页

作者：张殿喜邓洁英史轶蘩中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内分泌科北京100730

为建立有生物素和亲和素放大系统的人血清生长激素 (hGH)酶联免疫分析法 (BA ELISA) ,以微量的GH抗原免疫BALB/C小鼠 ,利用杂交瘤技术制备出 2 9株分泌抗hGH单克隆抗体 (MCA)的杂交瘤株。选择最佳配对MCA ,利用亲和素与生物素高亲和力... 详细信息

为建立有生物素和亲和素放大系统的人血清生长激素 (hGH)酶联免疫分析法 (BA ELISA) ,以微量的GH抗原免疫BALB/C小鼠 ,利用杂交瘤技术制备出 2 9株分泌抗hGH单克隆抗体 (MCA)的杂交瘤株。选择最佳配对MCA ,利用亲和素与生物素高亲和力的特性 ,建立了血清hGH双位点的BA ELISA法。我们的MCA滴度为 (0 5～ 5 0 0 )× 10 4,亲和常数Ka =(0 13～ 1 40 )× 10 10 L/mol。血清hGH的ELISA的灵敏度为 0 0 4± 0 0 1μg/L ;在血清中分别加入 1,2 5 ,5 μg/L的hGH ,其回收率为 90 7%～ 10 7 6 % (平均为 10 1 2 0 %± 0 0 3 % ) ;hGH含量为 2 8、10 0、2 9 8μg/L的血清批内、批间变异系数分别为 4 9%、3 8%、7 9%和 6 2 %、3 5 %、9 5 % ;用本法测定了正常儿童、生长激素缺乏症 (GHD)患儿和活动性肢端肥大症患者空腹血清hGH水平 ,分别为 1 87± 3 0、0 30± 0 42和 8 71± 6 95 μg/L。上述结果表明 ,本ELISA方法灵敏、特异、稳定、准确 ,能确切反映hGH分泌功能 ,在诸多方面均优于RIA。

关键词：人生长激素单克隆抗体生物素亲和素酶联免疫吸附分析法

多巴胺和溴隐亭对体外垂体生长激素瘤细胞分泌生长激素的影响

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中国医学科学院学报 1990年第5期12卷 330-334页

作者：邓洁英吴勤勇史轶蘩苏长保中国医学科学院协和医院

本实验研究多巴胺(DA)及其激动剂溴隐亭(CB154)对6例体外培养的垂体单纯生长激素(GH)分泌瘤GH分泌的调节作用,并与生长抑素类似物SMS_(201-995)(SMS)的作用进行比较。结果10^(-8)和10^(-7)mol/LDA仅使1例瘤细胞的GH分泌明显减少,分别下... 详细信息

本实验研究多巴胺(DA)及其激动剂溴隐亭(CB154)对6例体外培养的垂体单纯生长激素(GH)分泌瘤GH分泌的调节作用,并与生长抑素类似物SMS_(201-995)(SMS)的作用进行比较。结果10^(-8)和10^(-7)mol/LDA仅使1例瘤细胞的GH分泌明显减少,分别下降到对照GH分泌量的50.6％和44.4％;而10^(-7)和10^(-6)mol/L CB154却能使4例瘤细胞中3例GH分泌明显减少,平均下降到59.0±8.9％,表明CB154抑制GH分泌的作用强于DA。10^(-6)mol/L CB154使GH分泌下降到63.3±13.8％,而10^(-7)mol/L SMS则可使GH分泌下降到45.5±13.1％,二者浓度相差10倍,提示SMS的抑制作用至少比CB154强10倍。CB154不但能抑制GH分泌,还能抑制GH合成;而SMS则主要抑制GH分泌,对GH合成无明显影响。以上结果提示DA和CB154可直接抑制部分单纯GH分泌瘤GH的分泌,其作用机理与SMS不完全相同。

关键词：多巴胺溴隐亭生长激素垂体瘤