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Bufalin对人食管癌细胞ERK/p-ERK和细胞迁移能力的影响

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Bufalin对人食管癌细胞ERK/p-ERK和细胞迁移能力的影响

作者：邓会岩河北医科大学

学位级别：硕士

食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其发生是多因素作用、多基因参与、多阶段共同发展的疾病，然而其发生发展的确切机制尚不明确。我国是世界上食管癌死亡率最高的国家之一，每年有不少人死于食管癌。由于其早期症状不明显，不易察觉，... 详细信息

食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，其发生是多因素作用、多基因参与、多阶段共同发展的疾病，然而其发生发展的确切机制尚不明确。我国是世界上食管癌死亡率最高的国家之一，每年有不少人死于食管癌。由于其早期症状不明显，不易察觉，到确诊时已属中晚期，故预后较差。尽管近些年来通过普查使得食管癌早发现早诊断早治疗的水平有所提高，食管癌的预后有所改善，但五年生存率仍较低。因此，继续寻找新的抗肿瘤药物，并了解其在肿瘤发生发展过程中作用的信号转导通路成为食管癌临床治疗研究的重点。本实验主要研究了ERK信号转导通路，即Ras-Raf-MEK-ERK三级酶促级联反应，并通过转染高活性MEK质粒来研究食管癌细胞中ERK/p-ERK及细胞迁移能力的变化，进而得知高活性MEK质粒对人食管癌细胞中ERK信号通路的生物学作用，通过使用Bufalin（即蟾蜍灵，是从中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物提取的主要活性成分之一，属于一种强心苷类物质，已被用来作为一种传统的中医治疗感染、肿瘤以及麻醉）来有效的阻断通路信号的异常传导，降低各个因子的活化水平，从而达到抑制肿瘤因子异常增殖和迁移的作用。Bufalin在临床上多有报道，但尚未应用于食管癌的治疗，本实验室的前期实验证实，Bufalin可通过ERK信号转导通路来下调细胞内p-Raf、p-MEK、p-ERK的水平，而Raf、MEK、ERK则无明显变化，提示Bufalin可能通过抑制ERK通路中各个因子的活化达到抑制食管癌发生发展的作用。本实验就此在Bufalin对人食管癌细胞中ERK/p-ERK和细胞迁移能力的影响方面进行研究，从而多方面验证Bufalin在食管癌中的作用，为临床能够更好的治疗食管癌提供可靠的实验依据与新的治疗方向。为了更好的研究食管癌发生发展的具体机制以及治疗食管癌的方案，本实验继续使用了食管癌细胞株TE13进行人体外的研究，旨为了解在食管癌发生发展过程中Bufalin在ERK通路中所发挥的具体作用，并为更好的服务于临床打下坚实的基础。目的：探讨Bufalin对人食管癌细胞ERK/p-ERK和细胞迁移能力的影响方法： 1将携带高活性MEK基因的质粒转化至DH5α大肠杆菌中进行扩增，并使用脂质体法将携带高活性MEK基因的质粒成功转染到食管癌TE13细胞中，使用Western Blot方法分别检测转染质粒0h、24h、30h、36h、42h、48h后细胞内ERK表达及其活化情况的变化，并得出转染的最佳时间。 2用Western Blot方法分别检测不同处理组（对照组、空载体转染组、高活性MEK质粒转染组、转染后加Bufalin组）中细胞内ERK及其活化情况的蛋白表达，进而研究转染高活性MEK质粒及Bufalin对ERK通路的影响。 3采用细胞划痕实验分别测量不同处理组（普通培养组、空载体转染组、高活性MEK质粒转染组、转染后加Bufalin组、转染后加Uo126组、Bufalin和Uo126联合应用组）36h后细胞迁移的距离，并与对照组作比较，进而研究不同处理组对细胞迁移能力的影响。结果： 1成功将高活性MEK质粒扩增并转染到食管癌细胞中，并检测到其下游基因ERK在不同处理组间蛋白水平无明显变化（0.542±0.015，0.687±0.020，0.576±0.019，0.579±0.016，0.475±0.011，0.611±0.006，P＞0.05），无显著性差异。而p-ERK在对照组和空载体组中亦无明显变化，但在高活性MEK质粒转染组中的活化水平明显升高，且随转染后时间的增加（0h、24h、30h、36h）表达量逐渐升高，至36小时达到最高值，此后（42h、48h）表达量开始下降（0.756±0.035，0.663±0.040，0.714±0.053，1.314±0.053，0.663±0.034，0.704±0.009，P＜0.05），差异具有统计学意义。 2Western Blot结果显示：转染高活性MEK质粒36h后，ERK蛋白的表达在不同处理组间无明显差别（0.800±0.003，0.714±0.034，0.759±0.022，0.750±0.026，P＞0.05），而ERK的活化水平p-ERK在转染组的表达明显高于对照组和空载体组，当转染后加入Bufalin后，p-ERK的水平又受到抑制，明显下降（0.381±0.026，0.400±0.017，0.698±0.010，0.432±0.007，P＜0.05），差异具有统计学意义。 3划痕实验结果显示：不同的处理组在划痕36h后与对照组相比迁移的距离不同，在高活性MEK质粒转染组明显大于其他各组，差异具有统计学意义（P＜0.05），而Bufalin和Uo126联合应用组细胞迁移的距离又明显低于单纯应用Bufalin和Uo126组，差异具有统计学意义（P＜0.05），Bufalin组和Uo126组差异不明显（P＞0.0

关键词：食管癌细胞 Bufalin ERK p-ERK 转染 Western Blot 划痕实验

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病理科危急值及其临床应用

临床与实验病理学杂志 2017年第3期33卷 338-340页

作者：刘月平邓会岩江锦平河北医科大学第四医院病理科石家庄050011 河北医科大学第四医院门诊部石家庄050011

临床病理诊断危急值是近几年来逐渐受病理科关注的问题，但是对其必要性和有效性的认识仍然不足。目前对如何设定危急值项目和范围，尚未形成统一的意见和标准，给各医院／机构病理工作者的临床病理诊断工作带来困难，对医疗安全也产生... 详细信息

临床病理诊断危急值是近几年来逐渐受病理科关注的问题，但是对其必要性和有效性的认识仍然不足。目前对如何设定危急值项目和范围，尚未形成统一的意见和标准，给各医院／机构病理工作者的临床病理诊断工作带来困难，对医疗安全也产生重要影响。

关键词：危急诊断危急值诊断病理

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硬化性肺泡细胞瘤MRI表现一例

放射学实践 2019年第11期34卷 1278-1280页

作者：李扬时高峰邓会岩河北医科大学第四医院CT磁共振科石家庄050011 河北医科大学第四医院病理科石家庄050011

病例资料患者,女,51岁,5年前无明显诱因出现四肢凹陷性水肿,伴胸闷、气短。2月前症状加重,伴咳嗽、咳痰,为白色粘痰。7天前患者外院胸部CT检查示右肺下叶内侧基底段肿块,不除外恶性,建议穿刺活检。本院MRI检查示:右肺下叶内侧基底段肿块... 详细信息

病例资料患者,女,51岁,5年前无明显诱因出现四肢凹陷性水肿,伴胸闷、气短。2月前症状加重,伴咳嗽、咳痰,为白色粘痰。7天前患者外院胸部CT检查示右肺下叶内侧基底段肿块,不除外恶性,建议穿刺活检。本院MRI检查示:右肺下叶内侧基底段肿块,大小3.0 cm×3.0 cm×2.5 cm,边缘光滑,反相位T 1WI呈高信号(图1),T 2WI呈稍高信号(图2),DWI呈不均匀高信号(图3),ADC值约(1.41~2.01)×10-3 mm 2/s,多期增强扫描呈渐进性明显强化(图4~6)。

关键词：硬化性肺泡细胞瘤肺肿瘤磁共振成像 CT引导下穿刺活检增强扫描

乳腺非特殊型浸润性癌淋巴管瘤栓分级与预后的关系

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中华肿瘤杂志 2017年第10期39卷 754-758页

作者：岳萌李芳邓会岩张玲玲刘月平河北医科大学第四医院病理科石家庄05001l

目的探讨乳腺非特殊型浸润性癌（ICNST）患者的淋巴管瘤栓分级与预后的关系。方法回顾性分析河北医科大学第四医院2006年1月至2008年12月确诊的466例ICNST患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测D2-40、雌激素受体（ER）、孕激素受体... 详细信息

目的探讨乳腺非特殊型浸润性癌（ICNST）患者的淋巴管瘤栓分级与预后的关系。方法回顾性分析河北医科大学第四医院2006年1月至2008年12月确诊的466例ICNST患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测D2-40、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER．2）的表达，按照每高倍视野瘤栓核分裂及凋亡细胞数进行分级，分析淋巴管瘤栓分级与患者预后的关系。采用Kaplan-Meier法和Logrank检验进行单因素生存分析，采用Cox比例风险模型进行多因素生存分析。结果466例ICNST患者中，淋巴管瘤栓0级280例（60．1％），1级112例（24．0％），2级58例（12．5％），3级16例（3，4％）。淋巴管瘤栓分级与淋巴结转移数目呈正相关（r=0．365，P〈0．001）。单因素分析显示，组织学分级、淋巴管瘤栓分级、淋巴结转移数目、ER、PR表达、HER-2扩增和分子分型与ICNST患者的预后均有关（均P〈0．05）。cox多因素分析显示，淋巴管瘤栓分级和淋巴结转移数目与ICNST患者的预后均有关（均P〈0．05）。结论ICNST患者淋巴管瘤栓分级可预测ICNST患者的预后．

关键词：乳腺肿瘤病理学临床预后淋巴管瘤栓分级

数字病理切片在河北省临床病理科住培工作中的应用探索

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诊断病理学杂志 2022年第11期29卷 1072-1074页

作者：邓会岩张曼田晓玲刘月平河北医科大学第四医院病理科石家庄050011 河北医科大学第四医院教务处石家庄050011

数字病理是病理的发展方向,越来越受到医学界的关注。通过高通量全数字扫描成像技术,将镜下的直观图像转变成液晶屏幕以及电子通信移动设备的可视图像,优化了病理医师诊断条件,在脱离显微镜的同时,能随时随地通过电子移动设备进行阅片... 详细信息

数字病理是病理的发展方向,越来越受到医学界的关注。通过高通量全数字扫描成像技术,将镜下的直观图像转变成液晶屏幕以及电子通信移动设备的可视图像,优化了病理医师诊断条件,在脱离显微镜的同时,能随时随地通过电子移动设备进行阅片工作。通过把镜下的直观图像转变成的可视图像传输到计算机软件里,从而使计算机阅片考核成为可能,这是具有开创性的举措,也是很有发展前景的考核方式。河北省率先实行数字病理切片结业技能考核,优化了技能考试模式,使得技能考试更加便捷、规范。目前,在全国范围内能够用这种方法来辅助完成住培教学和技能考核(尤其是结业技能考核)的地区屈指可数,河北省处于领先地位,充分代表了河北省病理住培在全国住培教学及技能考核工作中的先进性,希望此种考核方法可以普及到全国范围。

关键词：住院医师规范化培训临床病理科数字病理切片教学考核

胃混合性腺神经内分泌癌61例临床病理特征及其预后分析

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临床与实验病理学杂志 2017年第1期33卷 81-83页

作者：李芳王心然邓会岩岳萌刘月平河北医科大学第四医院病理科石家庄050011

目的探讨胃混合性腺神经内分泌癌(mixed adenoneuroendocrine carcinomas,MANEC)的临床病理特征及预后分析。方法回顾61例胃MANEC的临床病理资料,重新阅片及免疫组化检测,并进行随访。结果光镜下所有肿瘤均由腺癌和神经内分泌癌两种成... 详细信息

目的探讨胃混合性腺神经内分泌癌(mixed adenoneuroendocrine carcinomas,MANEC)的临床病理特征及预后分析。方法回顾61例胃MANEC的临床病理资料,重新阅片及免疫组化检测,并进行随访。结果光镜下所有肿瘤均由腺癌和神经内分泌癌两种成分构成,且两种成分各占比例均>30%。免疫表型:腺癌成分CK、CEA均阳性,神经内分泌成分15例Syn、CD56、CgA均阳性;20例CgA、Syn均阳性,CD56阴性;24例CD56、Syn均阳性,CgA阴性;2例CD56、CgA均阳性,Syn阴性。61例中5例失访,18例健在,38例死亡。结论胃MANEC临床症状缺乏特异性,预后较差,结合免疫组化结果可做出准确诊断,并对制定合理治疗方案、改善患者预后具有重要意义。

关键词：胃肿瘤混合性腺神经内分泌癌临床病理特征免疫组织化学预后

晚期非小细胞肺癌中ALK的表达及检测方法的比较

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临床与实验病理学杂志 2018年第4期34卷 445-447页

作者：李芳蔡丽静安彦娇邓会岩刘月平河北医科大学第四医院病理科石家庄050011

目的探讨晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白表达及与临床病理特征的关系,旨在开展易普及的筛查方法。方法采用Ventana全自动免疫组化技术检测421例晚期NSCLC患者中ALK的表达,并采用FISH法验证免疫组化检测... 详细信息

目的探讨晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中ALK蛋白表达及与临床病理特征的关系,旨在开展易普及的筛查方法。方法采用Ventana全自动免疫组化技术检测421例晚期NSCLC患者中ALK的表达,并采用FISH法验证免疫组化检测的准确性,分析ALK表达与NSCLC临床病理特征的关系。结果免疫组化检测421例NSCLC中Ventana ALK表达,阳性率为7.6%(32/421)。免疫组化检测阳性病例经FISH验证,ALK的阳性率为7.36%(31/421)。Ventana ALK的免疫组化检测与FISH检测结果吻合率达96.88%,两者具有较高的一致性(P0.05)。结论 Ventana ALK全自动免疫组化检测准确性较高,实际操作流程更简便、易判读,可作为可靠的ALK筛查手段。

关键词：肺肿瘤非小细胞肺癌 ALK 免疫组织化学 FISH法

蟾蜍灵抑制Raf/MEK/细胞外信号调节激酶信号通路活化影响人食管鳞癌细胞增殖及迁移机制研究

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中国全科医学 2015年第21期18卷 2535-2541页

作者：丁妍王小玲邓会岩苏丽宏张培刘月平河北医科大学第四医院病理科河北省石家庄市050011

目的探讨蟾蜍灵通过抑制人食管鳞癌细胞Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的活化从而影响人食管鳞癌细胞增殖及迁移的作用机制。方法培养人食管鳞癌细胞株TE13,分为对照组、不同浓度蟾蜍灵组(蟾蜍灵10 nmol/L组、蟾蜍灵25 nmol/... 详细信息

目的探讨蟾蜍灵通过抑制人食管鳞癌细胞Raf/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的活化从而影响人食管鳞癌细胞增殖及迁移的作用机制。方法培养人食管鳞癌细胞株TE13,分为对照组、不同浓度蟾蜍灵组(蟾蜍灵10 nmol/L组、蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组、蟾蜍灵100 nmol/L组)、UO126组和蟾蜍灵100nmol/L+UO126组,采用Western blotting方法和免疫细胞化学方法分别检测各组Raf-1、磷酸化Raf-1(p-Raf-1)、MEK、磷酸化MEK(p-MEK)、ERK、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达量和阳性表达率。划痕实验和Boyden小室实验检测各组细胞的迁移距离和穿过滤膜的细胞数量。结果蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-Raf-1、p-ERK表达量低于对照组(P<0.05);蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-MEK表达量低于对照组(P<0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组p-Raf-1、p-MEK、p-ERK表达量低于UO126组(P<0.05)。蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-Raf-1、p-ERK阳性表达率低于对照组(P<0.05);蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组p-MEK阳性表达率低于对照组(P<0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组p-Raf-1、p-MEK、p-ERK阳性表达率低于UO126组(P<0.05)。划痕实验结果显示,蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组细胞迁移距离短于对照组(P<0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组细胞迁移距离短于UO126组(P<0.05)。Boyden小室实验结果显示,蟾蜍灵25 nmol/L组、蟾蜍灵50 nmol/L组和蟾蜍灵100 nmol/L组穿过滤膜的细胞数量少于对照组(P<0.05);蟾蜍灵100 nmol/L+UO126组穿过滤膜的细胞数量少于UO126组(P<0.05)。结论蟾蜍灵可下调细胞内p-Raf-1、p-MEK、p-ERK表达量,提示蟾蜍灵可能是通过抑制Raf/MEK/ERK信号通路活化这一过程而发挥作用,从而抑制人食管鳞癌细胞的生长。蟾蜍灵对人食管鳞癌细胞株TE13的迁移和趋化运动能力具有明显的抑制作用。

关键词：食管肿瘤蟾蜍灵丝裂原活化蛋白激酶细胞增殖细胞运动

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临床病理科住院医师规范化培训模式探讨

中国毕业后医学教育 2022年第6期6卷 571-574页

作者：丁妍田晓玲邓会岩刘尧张曼刘月平河北医科大学第四医院临床病理科河北石家庄050011 河北医科大学第四医院教务处河北石家庄050011

目的探讨临床病理科住院医师规范化培训(简称住培)模式。方法根据2015年以来河北医科大学第四医院(简称我院)临床病理科住培工作,总结临床病理科培训模式及教学策略。结果我院临床病理科作为国家级住培基地,形成了独特的临床病理科培训... 详细信息

目的探讨临床病理科住院医师规范化培训(简称住培)模式。方法根据2015年以来河北医科大学第四医院(简称我院)临床病理科住培工作,总结临床病理科培训模式及教学策略。结果我院临床病理科作为国家级住培基地,形成了独特的临床病理科培训模式,包括:加强并重视入科前岗前培训工作,使住院医师树立良好的学习态度和工作态度;合理的培训方案,使住院医师掌握临床病理诊断技能;实行导师负责制度及带教导师奖惩制度,保证培训质量;实施PBL教学法,调动住院医师学习主动性,提高学习效率;注重临床技能和科研两手抓,提高住院医师的科研能力。结论合理的临床病理科培训模式可以提高住院医师学习效率,值得推广和应用。

关键词：临床病理科住院医师规范化培训 PBL教学法