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针对休眠结核分枝杆菌重组疫苗rBCG-Rv3133c的免疫效应研究

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生物医学工程学杂志 2013年第4期30卷 817-821页

作者：邓仪昊何红云张本斯大理学院基础医学院人体解剖学教研室大理671000

为获取针对休眠期结核分枝杆菌(MTB)疫苗,本研究以编码MTB休眠相关转录调节蛋白DosR的基因Rv3133c为靶基因构建重组卡介苗,并研究其免疫效应。在本研究中,将从结核分枝杆菌H37Rv基因组获取的Rv3133c插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pM... 详细信息

为获取针对休眠期结核分枝杆菌(MTB)疫苗,本研究以编码MTB休眠相关转录调节蛋白DosR的基因Rv3133c为靶基因构建重组卡介苗,并研究其免疫效应。在本研究中,将从结核分枝杆菌H37Rv基因组获取的Rv3133c插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361构建重组质粒,该重组体以电转化方式导入卡介苗基因组构建重组卡介苗rBCG-Rv3133c。将成功构建的重组卡介苗免疫BALB/c小鼠,分别在免疫后30d及180d,通过检测疫苗诱导的血清抗体滴度水平评价其诱导的体液免疫反应,通过检测免疫小鼠脾淋巴细胞受TB-PPD刺激后脾CD4+和CD8+T细胞的比例变化、细胞因子IFN-γ的表达评价重组疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,重组疫苗rB-CG-Rv3133c可诱导产生较BCG更高水平的特异性抗体滴度、更强的CD4+和CD8+T细胞增殖反应及较高水平的IFN-γ表达量,提示该疫苗具有较强的研究应用价值。

关键词：休眠结核分枝杆菌 Rv3133c 重组卡介苗免疫效应

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葛根素对骨髓间充质细胞的诱导分化

中国临床解剖学杂志 2008年第1期26卷 83-86页

作者：邓仪昊陈道邦徐立史凯四川大学基础医学与法医学院人体解剖学教研室成都610041

目的:探索葛根素体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(Bone Marrow Stromal Cells MSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性,为中药在细胞定向分化中的应用提供理论和实验依据。方法:用贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。培养传至第5代,诱导组以... 详细信息

目的:探索葛根素体外诱导大鼠骨髓间充质细胞(Bone Marrow Stromal Cells MSCs)分化为神经元和胶质细胞的可行性,为中药在细胞定向分化中的应用提供理论和实验依据。方法:用贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质细胞。培养传至第5代,诱导组以2.5mg/ml的葛根素预诱导24h后,用17.5mg/ml的葛根素无血清培养基诱导,未诱导组加入等量培养基,24h后相差显微镜观察形态变化,免疫细胞化学染色鉴定诱导后的细胞神经元特异性稀醇化酶(neuronspecific enolase NSE),神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein GFAP)蛋白的表达情况,MTT检测不同浓度葛根素诱导后细胞的活力,流式细胞仪及RT-PCR检测诱导前后细胞中NSE、GFAP的表达情况。结果:诱导18h后BMSCs胞体收缩,有突起伸出,24h后突起增多呈网状。免疫细胞化学染色,NSE阳性表达率为(53.3±4.3)%,GFAP阳性表达为(64.5±5.2)%,流式细胞仪检测诱导24h后的细胞NSE及GFAP表达量均较未诱导组升高,RT-PCR检测诱导后细胞表达NSE、GFAP,未诱导的细胞则不表达。结论:葛根素可诱导大鼠骨髓间充质细胞在体外分化为神经元和神经胶质细胞。

关键词：骨髓间充质细胞葛根素神经元神经胶质细胞

乙醇对大鼠生精细胞Bcl-2蛋白的影响与葛根素的干预

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第34期11卷 6801-6804页

作者：邓仪昊陈道邦徐立史凯四川大学华西医学中心人体解剖学教研室四川省成都市610041

目的:观察葛根素对乙醇所致睾丸损伤的保护作用,探讨其可能机制。方法:实验于2006-04-03/2007-02-20在四川大学人体解剖学教研室实验室进行。取SD成年雄性大鼠24只,随机分为3组:①乙醇组:给予白酒灌胃(乙醇体积分数为0.56),10mL/(kg·d... 详细信息

目的:观察葛根素对乙醇所致睾丸损伤的保护作用,探讨其可能机制。方法:实验于2006-04-03/2007-02-20在四川大学人体解剖学教研室实验室进行。取SD成年雄性大鼠24只,随机分为3组:①乙醇组:给予白酒灌胃(乙醇体积分数为0.56),10mL/(kg·d)。②葛根素组:给予与乙醇组等量白酒灌胃后,立即腹腔注射葛根素62.5mg/(kg·d)。③对照组:给予10mL/(kg·d)生理盐水灌胃。给药连续3个生精周期共39d,于第40天麻醉后处死取睾丸,测定睾丸组织中超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量;免疫组织化学法检测各组Bcl-2,Bax蛋白在生精细胞的表达情况;TUNEL法检测生精细胞的凋亡。结果:24只均进入结果分析。①乙醇组睾丸匀浆超氧化物歧化酶活性低于对照组(P0.05)。②乙醇组平均每个生精小管断面中Bcl-2蛋白阳性细胞数和A值低于对照组(P0.05)。③乙醇组平均每个生精小管断面中Bax蛋白的阳性细胞数和A值高于对照组(P0.05)。④乙醇组每个生精小管横切面中的凋亡细胞数目高于对照组(P0.05)。结论:乙醇通过氧化损伤作用使生精细胞发生凋亡,葛根素有对抗乙醇所致睾丸损伤的作用。

关键词：乙醇睾丸葛根素

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长链非编码RNA与慢性心衰的研究进展

解剖学杂志 2016年第3期39卷 362-364页

作者：何红云邓仪昊昆明理工大学医学院人体解剖学与组织学胚胎学教研室

慢性心衰是多种心血管疾病发展至晚期的一个综合症.流行病学资料显示,全球慢性心衰患者高达2250万,且每年新增病例数约为200万.近年来随着我国慢性心衰患者逐年增加,目前已高达400万左右,每年约有60万人死亡.

关键词：慢性心衰患者非编码RNA 长链流行病学资料新增病例数疾病发展综合症心血管

缺血性脑卒中后神经元自噬流障碍的病理机制研究进展

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生理学报 2024年第1期76卷 97-104页

作者：刘继宇何红云邓仪昊昆明理工大学基础医学院人体解剖学教研室昆明650500 昆明理工大学附属安宁市第一人民医院昆明650399

自噬是一个将损伤细胞器、陈旧蛋白、多余胞质组分甚至病原体等通过自噬体呈递给溶酶体进行降解的细胞内代谢过程。它包括自噬启动、自噬体形成、自噬体-溶酶体融合和自噬底物在自噬溶酶体内降解和清除4个步骤。当这些过程呈连续通畅状... 详细信息

自噬是一个将损伤细胞器、陈旧蛋白、多余胞质组分甚至病原体等通过自噬体呈递给溶酶体进行降解的细胞内代谢过程。它包括自噬启动、自噬体形成、自噬体-溶酶体融合和自噬底物在自噬溶酶体内降解和清除4个步骤。当这些过程呈连续通畅状态则可称为自噬流,自噬/溶酶体信号通路中某一或某些步骤发生阻滞均可导致自噬流障碍。众多研究表明,脑卒中后自噬流障碍是导致脑卒中后缺血半影区神经元损伤的重要原因。本文总结了缺血性脑卒中后神经元自噬流障碍的病理机制研究进展,并介绍了目前改善神经元自噬流障碍方法的研究进展,为深入探究脑卒中病理损伤机制提供参考。

关键词：自噬缺血性脑卒中自噬溶酶体自噬流障碍病理机制

脑缺血后溶酶体功能障碍致自噬流损伤机制的研究进展

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生理学报 2024年第5期76卷 783-790页

作者：王佳倩何红云邓仪昊昆明理工大学基础医学院解剖学教研室昆明650500

缺血性脑卒中是由脑血管阻塞引发的急性脑血管病,是导致人类死亡和残疾的第三大原因。多项研究已证明缺血性脑卒中发生后自噬在神经元中起到积极的作用。自噬是细胞内介导各种底物转运至溶酶体降解和再循环的主要机制,其降解功能主要是... 详细信息

缺血性脑卒中是由脑血管阻塞引发的急性脑血管病,是导致人类死亡和残疾的第三大原因。多项研究已证明缺血性脑卒中发生后自噬在神经元中起到积极的作用。自噬是细胞内介导各种底物转运至溶酶体降解和再循环的主要机制,其降解功能主要是通过溶酶体来实现的,故保持溶酶体功能正常对自噬十分重要。然而脑缺血会导致严重的溶酶体功能受损,进而引发自噬流障碍,加重神经元损伤。本文详细阐述缺血性脑卒中后由自噬体-溶酶体融合减少、溶酶体酸性环境发生改变以及溶酶体生物合成减少三个方面诱发的溶酶体功能障碍导致自噬流损伤的机制,以期通过增强溶酶体功能调节脑缺血后神经元自噬流,发挥神经保护作用,为治疗脑卒中提供新的思路。

关键词：缺血性脑卒中神经元溶酶体功能障碍自噬流损伤

可表达结核分枝杆菌融合蛋白Ag85A-ESAT-6重组卡介苗免疫保护作用研究

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免疫学杂志 2012年第11期28卷 921-925页

作者：邓仪昊何红云张本斯鲍朗大理学院基础医学院人体解剖学教研室 671000 四川大学华西感染免疫研究室成都610041

目的以Balb/c小鼠为动物模型,评价重组卡介苗新型结核病疫苗rBCG-Ag85A-ESAT-6(rBC-AE)的免疫保护效应。方法将重组卡介苗rBCG-AE免疫动物10周后,结核分枝杆菌H37Rv尾静脉注射进行感染攻击,分别于感染攻击后3、6和9周,通过观察肺组织大... 详细信息

目的以Balb/c小鼠为动物模型,评价重组卡介苗新型结核病疫苗rBCG-Ag85A-ESAT-6(rBC-AE)的免疫保护效应。方法将重组卡介苗rBCG-AE免疫动物10周后,结核分枝杆菌H37Rv尾静脉注射进行感染攻击,分别于感染攻击后3、6和9周,通过观察肺组织大体病变、脾肺组织细菌载荷量计数、肺组织抗酸染色、HE染色结合肺组织病理变化,综合评价该疫苗诱导的免疫保护作用。结果 rBCG-AE组脾肺组织细菌载荷量在各时间点均显著低于阴性对照组(PBST组,P<0.01),但明显高于卡介苗(BCG)组(P<0.01)。rBCG-AE组肺组织病变在感染攻击后6～9周逐渐改善,但其病理打分在各时间点均明显高于BCG组(P<0.01)。各组肺组织大体病变与组织病理打分变化相似。结论重组卡介苗rBCG-AE仅能诱导产生与BCG疫苗相当甚至较低的免疫保护作用。

关键词：重组卡介苗 Ag85A ESAT-6 免疫保护作用

人粒-巨噬细胞集落刺激因子和结核杆菌特异性抗原CFP10嵌合基因重组卡介苗的构建及鉴定

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中国人兽共患病学报 2010年第9期26卷 795-798,804页

作者：杨晓玲鲍朗邓仪昊四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都610041

目的构建能共同表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)的重组卡介苗(recombinant BCG,rBCG)。方法运用分子克隆技术,通过SOE法(重叠延伸,Gene splicing by overlap exten-sion),扩增GMCSF-CFP10嵌合基因,将该基因定向克隆到穿梭表达质粒pMV361中,构建重组pMV GMCSF-CFP10质粒。用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG,经热诱导后对rBCG表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果重组质粒pMVGMCSF-CFP10经PCR、酶切及测序证实构建成功,并在BCG中经热诱导成功表达了具有GMCSF-CFP10的嵌合蛋白。结论成功构建能表达GMCSF-CFP10蛋白的重组BCG,为发展新型结核病疫苗奠定基础。

关键词： GM-CSF CFP10 卡介苗穿梭质粒

缺血性脑卒中后促进转录因子EB核转位改善神经元自噬流障碍的分子机制

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第2期40卷 208-213页

作者：李尚丹邓仪昊何红云昆明理工大学基础医学院人体解剖学教研室昆明650500 昆明理工大学附属安宁市第一人民医院医院办公室昆明650399

脑卒中(cerebral stroke)是由脑动脉出血或梗塞引起的急性脑血管病,约80%的脑卒中临床病例为缺血性脑卒中。自噬流障碍是导致神经元缺血性损伤的重要致病因素,而如何改善自噬流障碍从而减轻缺血性脑损伤的策略仍需深入探究。研究表明,... 详细信息

脑卒中(cerebral stroke)是由脑动脉出血或梗塞引起的急性脑血管病,约80%的脑卒中临床病例为缺血性脑卒中。自噬流障碍是导致神经元缺血性损伤的重要致病因素,而如何改善自噬流障碍从而减轻缺血性脑损伤的策略仍需深入探究。研究表明,转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)是自噬-溶酶体信号通路的关键调节分子。TFEB的活性由其磷酸化水平决定,磷酸化的TFEB通过与14-3-3黏附蛋白结合存留于胞质,当其去磷酸化后则快速向核内转位,进而上调“协同溶酶体表达与调控(coordinated lysosomal expression and regulation,CLEAR)”信号,促进溶酶体生成及自噬相关基因转录,从而增强自噬流。本文重点就TFEB核转位改善缺血性脑卒中神经元自噬流障碍的分子机制进行详细阐述,旨在为脑卒中治疗及脑缺血病理研究提供参考。

关键词：缺血性脑卒中转录因子EB核转位自噬流障碍溶酶体功能神经保护