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重症先天性中性粒细胞减少症基因突变和急性白血病转化

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中国实验血液学杂志 2017年第5期25卷 1580-1584页

作者：迟作华朱平广东药科大学临床医学院广东广州510310 北京航天总医院血液肿瘤研究所北京100076 北京大学第一医院血液科北京100034

重症先天性中性粒细胞减少症(SCN)是一种罕见的骨髓衰竭性疾病,外周血中性粒细胞绝对值明显减少,具有强烈的向骨髓增生异常综合征(MDS)/急性髓细胞白血病(AML)转化的风险,目前发现与SCN相关的异常基因有14种,ELANE是SCN最常见的致病基... 详细信息

重症先天性中性粒细胞减少症(SCN)是一种罕见的骨髓衰竭性疾病,外周血中性粒细胞绝对值明显减少,具有强烈的向骨髓增生异常综合征(MDS)/急性髓细胞白血病(AML)转化的风险,目前发现与SCN相关的异常基因有14种,ELANE是SCN最常见的致病基因。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是目前主要的治疗手段。在治疗过程中经常会有CSF3R突变,可导致SCN转化为AML。深入研究SCN/AML转化机制有助于该疾病诊治。本文就SCN患者的遗传学及表型多样性,G-CSF对SCN的治疗作用及风险,SCN患者集落刺激因子3受体(CSF3R)突变影响G-CSF信号传导,CSF3R突变是SCN转化为急性白血病的重要因素和了解SCN/AML转化机制有助于疾病诊治等问题作一综述。

关键词：重症先天性中性粒细胞减少症基因突变急性髓系白血病发病机制

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肺耐药蛋白基因在恶性血液病中的表达及意义

肺耐药蛋白基因在恶性血液病中的表达及意义

作者：迟作华青岛大学

学位级别：硕士

目的检测急性白血病患者肺耐药蛋白（Lung Resistance Protein,LRP）基因mRNA表达，探讨其与多药耐药和预后的关系。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测47例急性白血病，5例慢性粒细胞白血病患者及7例正常对照骨... 详细信息

目的检测急性白血病患者肺耐药蛋白（Lung Resistance Protein,LRP）基因mRNA表达，探讨其与多药耐药和预后的关系。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测47例急性白血病，5例慢性粒细胞白血病患者及7例正常对照骨髓细胞LRP表达，同时检测nm23-H1和MRPmRNA表达。结果正常骨髓细胞LRP表达阴性，25例初治急性髓细胞白血病（AML）患者中有14例LRP表达阳性，12例初治急性淋巴细胞白血病（ALL）中仅1例阳性，10例复发难治患者8例阳性，初治AML组及复发难治组LRP表达水平较正常对照组相比明显升高，差异有显著性（P<0.05，P<0.05），增高的LRPmRNA水平与初次化疗不敏感，及预后差有关，LRP表达阳性患者的完全缓解率明显低于表达阴性者（分别为27%，80%），二者差异有显著性（P〈0.05），经直线相关分析发现LRP表达与MRP表达水平成正相关（r=0.44，p=0.009），与nm23-H1无相关性（r=-0.108，P=0.54）。结论 LRP高表达与急性髓细胞白血病化疗效果及预后密切相关，LRP和MRP同时表达者预后更差，LRP是一项新的耐药指标，同时检测LRP和MRP可以指导治疗，估计预后。

关键词：白血病多药耐药 LRP 聚合酶链反应

Tregs及IL-6、IL-10、TNF在急性分泌性中耳炎患者中的变化及意义

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实用医学杂志 2016年第2期32卷 255-257页

作者：迟作华刘振肖平广东药学院临床医学院广州市510310 广东省佛山市第一人民医院耳鼻咽喉头颈外科 528000 广东省佛山市第一人民医院临床研究所 528000

目的:检测CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及IL-6、IL-10、TNF在急性分泌性中耳炎患者急性期外周血及耳积液中的变化。方法:采用BD CBA Flex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测10例正常对照组外周血、37例(37耳)急... 详细信息

目的:检测CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及IL-6、IL-10、TNF在急性分泌性中耳炎患者急性期外周血及耳积液中的变化。方法:采用BD CBA Flex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒,利用流式细胞术微球阵列法检测10例正常对照组外周血、37例(37耳)急性上呼吸道感染诱发急性分泌性中耳炎患者(患者组)外周血及耳积液中3种细胞因子水平及外周血Tregs细胞的比例。结果:患者组Tregs细胞的百分比明显高于正常对照组[(12.82±4.56)%vs.(6.695±1.09)%,P0.05),患者耳积液中3种细胞因子的浓度均明显高于患者及正常对照组外周血(P<0.05)。结论:急性分泌性中耳炎患者Tregs细胞高表达,耳积液中3种细胞因子浓度明显升高。

关键词：急性分泌性中耳炎 CD4+CD25+调节性T细胞白细胞介素-6 白细胞介素-10 肿瘤坏死因子

多种生长分化因子体外联合诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞的分化(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第49期13卷 9797-9800页

作者：迟作华张洹陆琰暨南大学医学院血液病研究所广东省广州市510632 广东药学院临床医学院广东省广州市510310

背景:肝细胞自身增殖能力有限,近几年关于各类干细胞向肝细胞分化的成功报道很多,包括胚胎干细胞、骨髓细胞、胰腺干细胞、神经干细胞及各种来源的间充质干细胞等。目的:探讨应用多种生长分化因子体外联合诱导人脐血间充质干细胞向肝样... 详细信息

背景:肝细胞自身增殖能力有限,近几年关于各类干细胞向肝细胞分化的成功报道很多,包括胚胎干细胞、骨髓细胞、胰腺干细胞、神经干细胞及各种来源的间充质干细胞等。目的:探讨应用多种生长分化因子体外联合诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-10/2006-04在暨南大学医学院血液病研究所完成。材料:胎儿脐带血来源于顺产及剖腹产的健康孕妇,由暨南大学第一附属医院产科提供,产妇均签署知情同意书。方法:体外分离培养人脐血间充质干细胞,胰酶-EDTA消化传代。取传至第3代细胞,按5×104/cm2接种,48h后去除原培养基,PBS洗涤后,第1阶段用含地塞米松、肝细胞生长因子、表皮生长因子、ITS的F12培养基诱导2周,第2阶段用含地塞米松、肝细胞生长因子、致瘤素M、ITS的F12培养基继续诱导2周。主要观察指标:流式细胞仪检测脐血间充质干细胞表面标志的表达,RT-PCR检测肝细胞相关基因的表达,免疫荧光染色检测肝细胞相关蛋白的表达,透射电镜观察细胞超微结构。结果:培养的细胞不表达造血细胞系标志CD34,CD45,CD14;亦不表达CD54,CD49f,HLA-DR;部分表达内皮细胞标志CD106;强表达CD29,CD44及CD13。诱导4周后,甲胎蛋白、白蛋白、ck-18及tat基因均呈阳性表达;免疫荧光染色显示细胞浆中甲胎蛋白、白蛋白、ck-18均呈阳性;细胞胞浆中出现脂滴及糖原的沉积,细胞表面有微绒毛,出现双核细胞,初步具备了肝细胞的超微结构特征。结论:联合应用地塞米松、肝细胞生长因子、表皮生长因子、致瘤素M及ITS等多种生长分化因子,可在体外成功诱导人脐血间充质干细胞向肝样细胞分化。

关键词：脐血间充质干细胞分化肝细胞

人脐血间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的研究

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中华血液学杂志 2008年第10期29卷 679-683页

作者：迟作华陆琰张洹暨南大学医学院血液病研究所广州510632

目的探讨脐血间充质干细胞（MSC）向胰岛素分泌细胞分化的潜能及其分化诱导条件。方法分离脐血有核细胞，将其置于Mesencuh^TM培养基中进行培养，并利用贴壁法进行纯化、扩增。扩增后的脐山MSC用表皮生长因子（EGF）、β－巯基乙醇和高... 详细信息

目的探讨脐血间充质干细胞（MSC）向胰岛素分泌细胞分化的潜能及其分化诱导条件。方法分离脐血有核细胞，将其置于Mesencuh^TM培养基中进行培养，并利用贴壁法进行纯化、扩增。扩增后的脐山MSC用表皮生长因子（EGF）、β－巯基乙醇和高糖进行诱导。采用RT—PCR、胰岛素免疫细胞化学染色方法对诱导后的细胞进行鉴定，定量检测胰岛素分泌水平及其对葡萄糖刺激的反应性；移植到链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠体内，观测其往体内的降糖作用。结果诱导后细胞形态发生明显变化，细胞变圆且聚集成团；RT—PCR分析显示，细胞表达部分胰岛相关基因；细胞的胰岛素免疫细胞化学染色为附降；而且细胞能分泌少量[（0．37±0．06）mU／L]胰岛素，并对糖刺激具有反应性，刺激指数为1．76；诱导后的细胞移植能降低糖尿病小鼠的血糖。结论脐血MSC具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能。

关键词：胎血间充质干细胞细胞分化胰岛素糖尿病

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人骨髓间充质干细胞分离方法的比较

中国临床康复 2006年第1期10卷 20-22,i0001页

作者：迟作华张洹陆琰暨南大学医学院血液病研究所广东省广州市510632

目的:探讨人骨髓间充质干细胞原代培养过程中最佳的分离方法。方法:留取暨南大学第一附属医院骨科2004-10/2005-06健康供者的骨髓10份,分别采用羟乙基淀粉沉淀法,淋巴细胞分层液分离法,氯化铵裂解红细胞法,全骨髓法四种方法分离骨髓有... 详细信息

目的:探讨人骨髓间充质干细胞原代培养过程中最佳的分离方法。方法:留取暨南大学第一附属医院骨科2004-10/2005-06健康供者的骨髓10份,分别采用羟乙基淀粉沉淀法,淋巴细胞分层液分离法,氯化铵裂解红细胞法,全骨髓法四种方法分离骨髓有核细胞,观察四种方法在细胞出现伸展的时间,原代培养的时间方面的差异,流式细胞仪对培养得到的间充质干细胞进行表面标志检测。结果:①在其他条件相同的情况下,羟乙基淀粉沉淀法10份标本全部培养成功,淋巴细胞分层液分离法10份中有9份得到间充质干细胞,氯化铵裂解红细胞法10份中仅1份得到间充质干细胞,全骨髓培养法10份中有3份得到间充质干细胞。②羟乙基淀粉沉淀法细胞出现伸展和原代培养的时间短于淋巴细胞分层液分离法犤乙基淀粉沉淀法:羟(54.0±3.0h,(12.4±1.4)d;淋巴细胞分层液分离法:(74.0±5.2)h,(14.6±0.9)d,)P<0.01犦③流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面表达CD13,CD29,。CD44,不表达造血细胞的标志CD45,CD34。结论:经比较羟乙基淀粉沉淀法明显优于其他分离方法,在人骨髓间充质干细胞的培养过程中建议使用此种物理沉降方法分离骨髓有核细胞。

关键词：干细胞骨髓细胞分离人骨髓间充质干细胞分离方法

人骨髓源干细胞向胰岛素分泌细胞分化(英文)

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中国病理生理杂志 2009年第4期25卷 774-780页

作者：陆琰张洹迟作华暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的:探讨人骨髓源干细胞向具有功能的胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法:从人骨髓分离间充质干细胞。采用表皮生长因子、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导其向胰岛素分泌细胞分化。经诱导后,用RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因的表达,并采用... 详细信息

目的:探讨人骨髓源干细胞向具有功能的胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法:从人骨髓分离间充质干细胞。采用表皮生长因子、β-巯基乙醇和高糖培养基诱导其向胰岛素分泌细胞分化。经诱导后,用RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因的表达,并采用免疫细胞化学染色检测胞浆胰岛素的表达。此外,诱导后细胞分泌的胰岛素定量及胰岛素释放实验将采用化学发光法进行检测。将经诱导后的细胞移植到糖尿病小鼠的右侧肾被膜下。在移植后16 d持续检测小鼠的血糖水平,最后对右侧肾脏进行免疫组化检测。结果:经诱导后,细胞能表达胰岛β细胞相关基因;免疫细胞化学染色也能检测到胞浆有胰岛素的表达;而且这些细胞能对糖刺激有所反应。细胞被移植到糖尿病小鼠的肾被膜下,能起降血糖作用。其肾脏的免疫组化显示:肾被膜下有胰岛素阳性细胞。结论:人骨髓源干细胞具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能,这将为糖尿病细胞治疗提供丰富的细胞来源。

关键词：人类骨髓干细胞细胞分化胰岛素分泌细胞

人脐血间充质干细胞在体外向肝样细胞的诱导分化

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中华器官移植杂志 2008年第3期29卷 159-163页

作者：迟作华张洹陆琰暨南大学医学院血液病研究所广州510632

目的探讨脐血间充质干细胞（MSCs）在体外能否分化成肝细胞。方法分离人脐血MSCs，培养传代，流式细胞仪进行细胞表面标志检测。取培养至第三代的细胞，接种于六孔板内，分两个阶段进行细胞分化的诱导，第一阶段采用含地塞米松（终浓... 详细信息

目的探讨脐血间充质干细胞（MSCs）在体外能否分化成肝细胞。方法分离人脐血MSCs，培养传代，流式细胞仪进行细胞表面标志检测。取培养至第三代的细胞，接种于六孔板内，分两个阶段进行细胞分化的诱导，第一阶段采用含地塞米松（终浓度为0．5μmol／L，下同）、肝细胞生长因子（HGF，10ng／m1）、表皮生长因子（10ng／m1）及1×ITS（胰岛素-转铁蛋白-硒）的F12培养基诱导2周，第二阶段用含地塞米松（0．5μmol／L）、HGF（10ng／m1）、抑瘤素M（10ng／m1）及1×ITS的F12培养基继续诱导2周。诱导期间于倒置显微镜下观察细胞的形态变化；采用逆转录聚合酶链反应检测分化细胞的甲胎蛋白（AFP）、白蛋白、人细胞角蛋白18（CK-18）及酪氨酸氨基转移酶（TAT）基因的表达，以免疫荧光染色法检测分化细胞胞浆中AFP、白蛋白、CK-18的表达；用电子显微镜观察分化细胞的超微结构。结果培养的脐血MSCs不表达CDl4、CD34及CD45，也不表达CD49f、CD54及HLA-DR；部分表达CD106；强表达CDl3、CD29及CD44。未分化的脐血MSCs不表达AFP、TAT及白蛋白基因，弱表达CK-18基因；诱导分化1周后可检测到AFP基因的表达，诱导分化4周后，不仅表达AFP、CK-18和白蛋白基因，还表达TAT基因。免疫荧光染色显示，未分化的MSCs胞浆中无AFP、白蛋白及CK-18的表达；分化细胞则可以检测到上述物质的表达。诱导至第4周的分化细胞，可见核仁大且明显，细胞核周围有板层状的内质网，胞浆中可见脂滴及簇状糖原，线粒体丰富，细胞表面有微绒毛。结论脐血MSCs在合适的诱导条件下可以分化为肝样细胞。

关键词：胎血间质干细胞细胞分化肝细胞

脐血间充质干细胞的分离鉴定及其向脂肪和成骨的分化

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基础医学与临床 2006年第3期26卷 319-322页

作者：迟作华张洹陆琰暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632

目的分离鉴定脐血(UCB)中的间充质样干细胞(MLSC),探索其向脂肪和成骨分化的可行性。方法用羟乙基淀粉沉淀法分离脐血有核细胞,利用细胞贴壁生长特性分离纯化脐血间充质样干细胞;流式细胞仪检测其表面标志;多种成分联合诱导其向脂肪、... 详细信息

目的分离鉴定脐血(UCB)中的间充质样干细胞(MLSC),探索其向脂肪和成骨分化的可行性。方法用羟乙基淀粉沉淀法分离脐血有核细胞,利用细胞贴壁生长特性分离纯化脐血间充质样干细胞;流式细胞仪检测其表面标志;多种成分联合诱导其向脂肪、成骨方向分化,细胞化学染色检测诱导后的细胞变化。结果培养得到一组间充质样干细胞,不表达造血细胞的标志(CD34/CD45/CD14)及内皮细胞的标志CD106,强表达间充质细胞的标志CD29、CD44和CD13,在适当的诱导条件下可向脂肪及成骨方向分化。结论脐血中含有间充质样干细胞,表达间充质干细胞的表面标记,并可以向脂肪、成骨方向分化,因此可以作为组织工程的种子细胞。

关键词：脐带血间充质干细胞分化