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Ca^(2+)诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子的生物活性和结构变化

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高等学校化学学报 2013年第11期34卷 2517-2523页

作者：冀旭边六交西北大学生命科学学院西安710069

在研究Ca2+对淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子生物活性影响的基础上,采用荧光光谱法和傅里叶变换红外光谱法研究了Ca2+诱导的酶分子结构变化.结果表明,当溶液中Ca2+浓度低于25.0 mmol/L时,Ca2+对酶分子具有激活作用;而当Ca2+浓度高于25.0... 详细信息

在研究Ca2+对淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子生物活性影响的基础上,采用荧光光谱法和傅里叶变换红外光谱法研究了Ca2+诱导的酶分子结构变化.结果表明,当溶液中Ca2+浓度低于25.0 mmol/L时,Ca2+对酶分子具有激活作用;而当Ca2+浓度高于25.0 mmol/L时,Ca2+对酶分子的生物活性具有抑制作用.在Ca2+诱导的淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶分子结构变化过程中,酶分子仅发生二级结构的变化,并不涉及其三级结构.当Ca2+对酶分子具有激活作用时,酶分子中的无规卷曲结构及β-折叠结构的含量下降,而α-螺旋结构及β-转角结构的含量上升;而当Ca2+对酶分子生物活性具有抑制作用时,酶分子中的α-螺旋结构及β-转角结构的含量下降,而无规卷曲结构及β-折叠结构的含量上升.

关键词：淀粉液化芽孢杆菌α-淀粉酶 Ca2+ 生物活性二级结构

核酸适配体对纤溶酶原Kringle 5抗血管生成功能的影响

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中国现代应用药学 2023年第21期40卷 2909-2916页

作者：段美娇周雅琪王翠玲边六交西北大学生命科学学院西安710069

目的研究核酸适配体K-a2ct与纤溶酶原Kringle 5(K5)的特异性结合对K5抑制血管内皮细胞增殖和迁移以及促进血管内皮细胞凋亡功能的影响。方法利用原核系统对重组K5蛋白进行克隆和表达,并采用亲和层析法对表达的K5蛋白进行分离纯化;使用... 详细信息

目的研究核酸适配体K-a2ct与纤溶酶原Kringle 5(K5)的特异性结合对K5抑制血管内皮细胞增殖和迁移以及促进血管内皮细胞凋亡功能的影响。方法利用原核系统对重组K5蛋白进行克隆和表达,并采用亲和层析法对表达的K5蛋白进行分离纯化;使用等温滴定量热法(isothermal titration calorimetry,ITC)和酶联寡核苷酸吸附试验(enzyme-linked oligonucleotide adsorption assay,ELONA)对K-a2ct与K5的亲和特异性进行验证;采用CCK-8、细胞划痕试验观察K-a2ct对K5抑制人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖和迁移功能的影响;采用激光共聚焦显微镜观察Hoechst 33342染色的HUVEC细胞凋亡形态,并采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测K-a2ct对K5促进HUVEC细胞凋亡功能的影响。结果重组蛋白K5在大肠杆菌中实现了高效表达,经亲和层析纯化的重组K5相对分子质量为12 kDa,浓度为0.32 mg·mL^(−1);ITC、ELONA结果显示K-a2ct对K5的亲和性强,且具有良好的选择性,具备典型核酸适配体的亲和特异性;CCK-8、细胞划痕试验结果表明,K-a2ct能够抑制K5的抗血管内皮细胞增殖和迁移的作用,且抑制程度与K-a2ct呈剂量依赖关系;激光共聚焦和流式细胞术结果表明,K-a2ct对K5促HUVEC细胞凋亡的功能有一定抑制作用,且主要影响K5作用的HUVEC细胞晚期凋亡,对早期凋亡影响不大。结论核酸适配体K-a2ct以高亲和力和特异性结合K5,并以剂量依赖性方式抑制K5的抗血管生成功能,在靶向调节K5在体内的浓度和功能以及促进血管新生方面具有很大潜力。

关键词：核酸适配体纤溶酶原Kringle 5 特异性结合细胞凋亡血管生成

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从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白

色谱 2008年第3期26卷 384-387页

作者：周勃边六交西北大学生命科学院国家微检测系统工程技术研究中心陕西西安710069

为了从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白,建立了通过超滤、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶排阻色谱三步法制备高纯度猪血红蛋白的方法,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效凝胶排阻色... 详细信息

为了从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白,建立了通过超滤、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶排阻色谱三步法制备高纯度猪血红蛋白的方法,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效凝胶排阻色谱和反相高效液相色谱方法,对纯化后的猪血红蛋白进行了鉴定。经三步分离纯化后,猪血红蛋白的纯度大于99%,含量为1.328g/L。

关键词：超滤阴离子交换色谱凝胶排阻色谱猪血红蛋白分离纯化

头孢西丁与金属β-内酰胺酶BcⅡ相互作用的光谱分析及分子动力学模拟

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高等学校化学学报 2018年第5期39卷 971-976页

作者：史鹏辉边六交西北大学生命科学学院西安710069

利用同步荧光光谱、三维荧光光谱及分子动力学模拟方法研究了β-内酰胺类抗生素头孢西丁(CFX)与金属β-内酰胺酶BcⅡ之间的相互作用机制.荧光光谱分析表明,CFX与BcⅡ在结合过程中可诱导BcⅡ构象发生改变.分子动力学模拟结果表明,上述构... 详细信息

利用同步荧光光谱、三维荧光光谱及分子动力学模拟方法研究了β-内酰胺类抗生素头孢西丁(CFX)与金属β-内酰胺酶BcⅡ之间的相互作用机制.荧光光谱分析表明,CFX与BcⅡ在结合过程中可诱导BcⅡ构象发生改变.分子动力学模拟结果表明,上述构象变化是BcⅡ在CFX的诱导下通过改变其结合口袋附近Loop构象,使二者达到完美匹配的一个诱导契合过程,并最终形成一个洞穴状疏水口袋以利于CFX的结合及催化水解.

关键词：金属β-内酰胺酶头孢西丁相互作用荧光光谱分子动力学模拟

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疏水界面上标准蛋白质吸附等温线的研究

高等学校化学学报 1995年第2期16卷 201-205页

作者：边六交耿信笃西北大学现代分离科学研究所

测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线。除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外，细胞色素－ｃ、肌红蛋白、胰岛素、α－淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附。用Ｌａｎｇｍｕｉｒ、计量置换吸附模型（ＳＤＭ－... 详细信息

测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线。除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外，细胞色素－ｃ、肌红蛋白、胰岛素、α－淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附。用Ｌａｎｇｍｕｉｒ、计量置换吸附模型（ＳＤＭ－Ａ）、ＢＥＴ和Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ吸附模型对这些蛋白的吸附等温线拟合后发现，ＳＤＭ－Ａ关系式能够良好描述这７种蛋白的吸附，Ｌａｎｇｍｕｉｒ关系仅能较好地描述后５种蛋白质的吸附。而Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ和ＢＥＴ关系式对上述两类蛋白质吸附的描述欠妥。实验发现对于不同盐浓度条件下卵清蛋白的吸附，用ＳＤＭ－Ａ和Ｌａｎｇｍｕｉｒ公式拟合所得的参数与盐浓度之间呈现出一定的规律性。

关键词：吸附等温线蛋白质色谱

脲和盐酸胍诱导的卵清溶菌酶分子去折叠过程中各稳定构象态的分布和过渡

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高等学校化学学报 2011年第7期32卷 1497-1505页

作者：张潭边六交西北大学生命科学学院西安710069

以内源荧光光谱和荧光相图法研究了脲和盐酸胍诱导的卵清溶菌酶分子的去折叠过程,结果表明,当变性液中脲和盐酸胍的浓度分别约为4.0和3.0 mol/L时,卵清溶菌酶分子的去折叠过程均存在一个折叠中间态,这两个去折叠过程均符合"三态模型".... 详细信息

以内源荧光光谱和荧光相图法研究了脲和盐酸胍诱导的卵清溶菌酶分子的去折叠过程,结果表明,当变性液中脲和盐酸胍的浓度分别约为4.0和3.0 mol/L时,卵清溶菌酶分子的去折叠过程均存在一个折叠中间态,这两个去折叠过程均符合"三态模型".在卵清溶菌酶分子"三态"去折叠过程的基础上,通过变性剂分子和卵清溶菌酶分子之间的缔合-解离作用,给出了一个定量描述此去折叠过程中卵清溶菌酶分子残余活性率随溶液中脲和盐酸胍浓度变化的方程.该方程包含两个特征展开参数,一个是蛋白质分子从一个稳定构象态过渡到另一个稳定构象态的热力学平衡常数k,另一个是在此过渡过程中平均每个蛋白质分子所结合的变性剂分子数目m.通过这两个特征展开参数能够定量描述脲和盐酸胍诱导的卵清溶菌酶分子天然态、折叠中间态和完全展开态随变性液中脲和盐酸胍浓度的分布和过渡.

关键词：卵清溶菌酶去折叠脲盐酸胍特征展开参数

两步柱色谱法分离纯化重组肿瘤血管生长抑制因子Kringle 5

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色谱 2007年第3期25卷 344-347页

作者：贾信贵边六交西北大学生命科学学院国家微检测系统工程技术研究中心陕西西安710069

建立了一种用Ni2+螯合的Chelating Sepharose Fast Flow亲和柱色谱和Sephadex G-75凝胶排阻柱色谱分离纯化重组肿瘤血管生长抑制因子Kringle5的方法。采用该工艺得到的重组Kringle5经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其纯度约... 详细信息

建立了一种用Ni2+螯合的Chelating Sepharose Fast Flow亲和柱色谱和Sephadex G-75凝胶排阻柱色谱分离纯化重组肿瘤血管生长抑制因子Kringle5的方法。采用该工艺得到的重组Kringle5经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其纯度约为98%,且具有抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成的生物活性。

关键词：亲和柱色谱法凝胶排阻柱色谱法重组血管生长抑制因子Kringle 5 分离纯化

盐酸胍诱导的变性卵清溶菌酶分子重折叠过程及其各稳定构象态的分布和过渡

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高等学校化学学报 2013年第2期34卷 336-345页

作者：冯瑄张潭边六交西北大学生命科学学院西安710069

采用变性和非变性电泳、高效凝胶排阻色谱、内源荧光发射光谱和荧光相图以及生物活性测定等方法,研究了盐酸胍诱导的变性卵清溶菌酶分子的重折叠过程及此过程中卵清溶菌酶分子各稳定构象态的分布和过渡.结果表明,当复性液中盐酸胍浓度... 详细信息

采用变性和非变性电泳、高效凝胶排阻色谱、内源荧光发射光谱和荧光相图以及生物活性测定等方法,研究了盐酸胍诱导的变性卵清溶菌酶分子的重折叠过程及此过程中卵清溶菌酶分子各稳定构象态的分布和过渡.结果表明,当复性液中盐酸胍浓度分别约为5.0和2.4 mol/L时,变性卵清溶菌酶分子的重折叠过程各存在1个稳定折叠中间态,重折叠过程符合'四态模型'.在卵清溶菌酶分子四态重折叠过程基础上,结合盐酸胍与卵清溶菌酶分子之间的缔合-解离平衡,给出了一个定量描述变性剂诱导的蛋白质分子复性过程中蛋白质分子复性率随溶液中变性剂浓度变化的方程.该方程包含2个特征折叠参数,一个是蛋白质分子从一个稳定构象态过渡到另一个稳定构象态的热力学过渡平衡常数k;另一个是在此过程中平均每个蛋白质分子所结合的变性剂分子数目m.通过这2个特征折叠参数能够定量描述盐酸胍诱导的变性卵清溶菌酶完全去折叠态、折叠中间态和天然态分子随复性液中盐酸胍浓度变化的分布和过渡情况.

关键词：卵清溶菌酶盐酸胍重折叠特征折叠参数荧光光谱

三步柱色谱法从江浙蝮蛇蛇毒中分离纯化类凝血酶

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色谱 2006年第2期24卷 135-139页

作者：边六交杨晓燕刘莉西北大学生命科学院基因工程中心陕西西安710069

建立了一种用CM Sepharo se CL-6B阳离子交换、DEAE Sepharo se Fast F low阴离子交换和Sephadex G-75凝胶排阻三步柱色谱从江浙蝮蛇蛇毒中分离纯化类凝血酶的方法。在实验室小柱分离方案的基础上,对该纯化工艺进行了放大。当上样量达... 详细信息

建立了一种用CM Sepharo se CL-6B阳离子交换、DEAE Sepharo se Fast F low阴离子交换和Sephadex G-75凝胶排阻三步柱色谱从江浙蝮蛇蛇毒中分离纯化类凝血酶的方法。在实验室小柱分离方案的基础上,对该纯化工艺进行了放大。当上样量达实验室小柱的25倍时,所得类凝血酶的质量指标与实验室小柱基本一致。采用该法所得的蝮蛇类凝血酶经Sh im-pack D io l-300高效凝胶排阻柱测得其相对分子质量约为33 500,用Sh im-pack VP-OD S反相色谱柱检测其纯度约为96%。从江浙粗蛇毒中提取类凝血酶时,类凝血酶的总质量收率约为0.3%,总活性收率约为64%,比活可达2 000U/m g。

关键词：三步柱色谱类凝血酶蛇毒江浙蝮蛇分离纯化