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肾癌差异表达基因的克隆及意义(英文)

Chinese Medical Journal 2001年第8期114卷 24-29,103页

作者：张强辛殿旗那彦群郭应禄张志文北京大学第一医院泌尿外科研究所北京100034 北京大学生理系北京100083

目的　克隆并鉴定肾癌与正常肾之间差异表达的基因 ,为研究肾癌发生发展的分子生物学机制奠定基础。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH) ,构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库 ,... 详细信息

目的　克隆并鉴定肾癌与正常肾之间差异表达的基因 ,为研究肾癌发生发展的分子生物学机制奠定基础。方法　应用抑制性消减杂交技术 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH) ,构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库 ,并从中克隆鉴定出肾癌差异表达的基因。结果　构建成功高消减效率的人肾癌组织cDNA消减文库 ,对其中 10个克隆插入的cDNA片段进行测序后经GenBank检索表明 10个片段均为未知新序列 ,其中RCC18为 5个拷贝 ,这提示以上 10个cDNA片段可能来自 6个新基因。Northernblotting分析显示RCC18在肾癌组织中有明显表达 ,而在正常肾组织中无表达 ,这证明RCC18是肾癌特异表达的新基因。应用SMARTRACE技术获得RCC18基因的全长。结论　人肾癌cDNA消减文库的建立为进一步大批量筛选、克隆肾癌特异性表达的未知新基因奠定了基础。初步筛选出的新基因为研究肾癌发生发展中的分子生物学机制提供了重要线索。

关键词：肾肿瘤癌抑制性消减杂交文库基因克隆

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β-环连蛋白在肾癌发生中的作用

中华外科杂志 2000年第1期38卷 37-39页

作者：臧桐庄立岩张志文辛殿旗郭应禄北京医科大学泌尿外科研究所 100034 北京医科大学生理系

目的　探讨 β 环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用及其变化机制。　方法　采用免疫组织化学、蛋白印迹、反转录聚合酶链式反应等方法对本院收治的 2 6例肾癌患者手术标本进行了研究。　结果　 2 6例患者中有 2 5例癌组织中细胞胞浆内 ... 详细信息

目的　探讨 β 环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用及其变化机制。　方法　采用免疫组织化学、蛋白印迹、反转录聚合酶链式反应等方法对本院收治的 2 6例肾癌患者手术标本进行了研究。　结果　 2 6例患者中有 2 5例癌组织中细胞胞浆内 β 环连蛋白表达明显高于正常组织 ,而且肿瘤分期越高 ,癌细胞内 β 环连蛋白的表达也越强 ,pT3 和pT4 期的肿瘤内的表达明显高于pT1和pT2 期的肿瘤 ,P <0 0 1,但 β 环连蛋白mRNA的表达水平并无明显变化。　结论　细胞内 β 环连蛋白表达的增加与肾癌的发生发展有关 ,可能是肾癌形成和发展的重要机制之一。

关键词：肾肿瘤 β-环连蛋白基因表达

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T细胞因子4在肾癌中的表达及其意义

中华外科杂志 2000年第6期38卷 460-461页

作者：林桂亭藏桐张志文辛殿旗郭应禄北京医科大学第一医院泌尿外科 100034

目的　研究Wnt/Frizzled信号通路在核内的转导及其主要信号分子T细胞因子 4(TCF4)在肾癌发生发展中的作用。　方法　采用RT PCR及NorthernBlot的方法检测了TCF4基因在肾癌组织及正常肾组织 ,肾癌细胞系GRC I和正常肾小管上皮细胞系HK 2... 详细信息

目的　研究Wnt/Frizzled信号通路在核内的转导及其主要信号分子T细胞因子 4(TCF4)在肾癌发生发展中的作用。　方法　采用RT PCR及NorthernBlot的方法检测了TCF4基因在肾癌组织及正常肾组织 ,肾癌细胞系GRC I和正常肾小管上皮细胞系HK 2中的表达。　结果　TCF4在肾癌组织及细胞系中强表达 ,且存在剪接性突变 ,形成了 30 0bp左右的突变基因。　结论　TCF4作为Wnt/Frizzled信号通路的核内信号分子 ,在肾癌发生和发展中具有重要作用 ,其致病机理与TCF4的剪接性突变有一定关系。

关键词：基因表达肾肿瘤 TCF4 基因调控

β-环连蛋白及其mRNA在肾癌中的表达(英文)

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Chinese Medical Journal 2001年第2期114卷 40-42,106页

作者：臧桐庄立岩张志文辛殿旗郭应禄北京医科大学第一附属医院泌尿外科研究所北京100034

目的　探讨β -环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用及其变化机制。方法　我们采用免疫组织化学、Westernblot、RT -PCR等方法对本院收治的 2 6例肾癌患者手术标本进行了研究。结果　 2 6例患者中有 2 5例癌组织中细胞胞浆内β 环连蛋... 详细信息

目的　探讨β -环连蛋白在肾癌发生发展过程中的作用及其变化机制。方法　我们采用免疫组织化学、Westernblot、RT -PCR等方法对本院收治的 2 6例肾癌患者手术标本进行了研究。结果　 2 6例患者中有 2 5例癌组织中细胞胞浆内β 环连蛋白表达明显高于正常组织内 ,而且肿瘤分期越高 ,癌细胞内β 环连蛋白的表达也越强 ,pT3和pT4期的肿瘤内的表达明显高于pT1和pT2期的肿瘤 ,P <0 .0 1,而其β -环连蛋白mRNA的表达水平并无明显变化。结论　细胞内 β -环连蛋白表达的增加与肾癌的发生发展有关 ,而且可能是肾癌形成和发展的重要机制之一。

关键词：肾肿瘤癌 β-环连蛋白

原发性散发性肾透明细胞癌患者癌组织中抑癌基因VHL突变的研究

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中华医学杂志 2001年第3期81卷 142-144页

作者：龚侃张志文辛殿旗那熙吴关那彦群北京大学第一临床医学院泌尿外科北京大学泌尿外科研究所100034 Department of Urology Rochester University

目的　探讨国人原发性散发性肾透明细胞癌中VHL抑癌基因突变及其意义。方法　采用聚合酶链反应及单链构像多态性分析 (PCR SSCP)和测序等方法 ,分析了 2 0例原发性散发性肾透明细胞癌中VonHippel Lindau(VHL)抑癌基因突变的情况。结果　... 详细信息

目的　探讨国人原发性散发性肾透明细胞癌中VHL抑癌基因突变及其意义。方法　采用聚合酶链反应及单链构像多态性分析 (PCR SSCP)和测序等方法 ,分析了 2 0例原发性散发性肾透明细胞癌中VonHippel Lindau(VHL)抑癌基因突变的情况。结果　 2 0例癌组织中 11例有VHL基因突变 ,突变率为 5 5 %。这些突变主要发生在第 1,2 ,3号外显子的后 1/ 3区 ,其中 6例缺失 ,2例插入 ,3例误义突变。结论　国人原发性散发性肾透明细胞癌中存在VHL基因的突变。VHL基因可作为临床诊断指标 ,并可望成为肾透明细胞癌基因治疗的重要目的基因。

关键词：原发性散发性肾透明细胞癌肾肿瘤抑癌基因 VHL基因基因突变

肾癌相关基因克隆——肾癌cDNA消减文库的构建

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生物化学与生物物理进展 2000年第3期27卷 301-304页

作者：张强毛泽彬张志文辛殿旗郭应禄北京医科大学第一临床医院泌尿外科研究所北京100034 北京医科大学生物化学与分子生物学系北京医科大学生理系

应用抑制性消减杂交技术 ,构建人肾癌与正常肾差异表达的cDNA消减文库 .分别从肾癌及正常肾细胞系中提取 poly (A) +RNA ,依次合成单链及双链cDNA ,经酶切成平均大小为 4 0 0～ 60 0bp的片段 ,将肾癌cDNA分为两组 ,分别与两种不同的接... 详细信息

应用抑制性消减杂交技术 ,构建人肾癌与正常肾差异表达的cDNA消减文库 .分别从肾癌及正常肾细胞系中提取 poly (A) +RNA ,依次合成单链及双链cDNA ,经酶切成平均大小为 4 0 0～ 60 0bp的片段 ,将肾癌cDNA分为两组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与正常肾cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后 ,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 .构建成功具有高消减效率的人肾癌cDNA消减文库 ,非特异性cDNA片段被有效地消减 ,特异表达的cDNA得到富集 .文库扩增后得到 650 0个克隆 ,随机挑取 3 50个制备质粒 ,酶切分析均得到 4 0 0～ 60 0bp插入片段 .所构建的人肾癌cDNA消减文库为进一步大批量筛选。

关键词：抑制性消减杂交肾癌 CDNA消减文库基因克隆

肾癌差异表达基因GYLZ-RCC18的全长克隆及意义

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中华外科杂志 2000年第12期38卷 935-938页

作者：张强张志文辛殿旗梁丽莉那彦群郭应禄北京大学第一医院泌尿外科研究所 100034 北京大学医学部生理系

目的　克隆并鉴定肾癌与正常肾组织之间差异表达的基因 ,为研究肾癌发生发展机制提供新的突破口。　方法　应用抑制性消减杂交技术 ,构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库 ,并从中克隆鉴定出肾癌特异表达的基因。结果 :构... 详细信息

目的　克隆并鉴定肾癌与正常肾组织之间差异表达的基因 ,为研究肾癌发生发展机制提供新的突破口。　方法　应用抑制性消减杂交技术 ,构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的cDNA消减文库 ,并从中克隆鉴定出肾癌特异表达的基因。结果 :构建成功高消减效率的人肾癌组织cDNA消减文库 ,对其中 10个克隆的插入cDNA片段进行测序后经基因库检索表明 10个片段均为未知新序列 ,其中GYLZ RCC18基因为 5个拷贝 ,这提示以上 10个cDNA片段可能来自 6个新基因。差异分析显示GYLZ RCC18在肾癌组织中有明显表达 ,而在正常肾组织中无表达。应用SMARTRACE技术获得GYLZ RCC18基因的全长 ,并证明GYLZ RCC18是一个 5′端有D3种不同剪切方式亚型的基因家族。　结论　GYLZ RCC18基因是肾癌特异表达的新基因。人肾癌cDNA消减文库可作为筛选、克隆肾癌特异性表达的未知新基因的基础。

关键词：肾肿瘤癌基因克隆,分子

Wnt/Frizzled信号传导通路在肾癌细胞系的表达

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科学通报 2000年第10期45卷 1057-1061页

作者：臧桐庄立岩张志文辛殿旗郭应禄北京医科大学第一临床医院泌尿外科研究所北京100034 北京医科大学基础医学院生理系北京100083

对Ｗｎｔ５Ａ，Ｗｎｔ５Ａ受体Ｆｒｉｚｚｌｅｄ５（ｈＦｚ５）及其信号传导系统下游成分──致癌性β－连环蛋白（β－ｃａｔｅｎｉｎ）在肾癌细胞系ＧＲＣ－１中表达的变化进行了观察．半定量ＲＴ－ＰＣＲ结果表明ＧＲＣ－１细胞系... 详细信息

对Ｗｎｔ５Ａ，Ｗｎｔ５Ａ受体Ｆｒｉｚｚｌｅｄ５（ｈＦｚ５）及其信号传导系统下游成分──致癌性β－连环蛋白（β－ｃａｔｅｎｉｎ）在肾癌细胞系ＧＲＣ－１中表达的变化进行了观察．半定量ＲＴ－ＰＣＲ结果表明ＧＲＣ－１细胞系中Ｗｎｔ５Ａ和ｈＦｚ５的ｍＲＮＡ水平明显高于正常肾细胞系，这一发现被原位杂交结果证实．进一步的研究发现β－连环蛋白ｍＲＮＡ水平在ＧＲＣ－１细胞系无明显改变，但Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析观察到胞浆中β－连环蛋白的含量明显高于正常肾小管细胞（Ｐ＜０．０１）．应用特异性免疫细胞化学和ＳＳＣＰ等技术发现，ＧＲＣ－１细胞中β－连环蛋白的高表达是由Ｗｎｔ５Ａ／ｈＦｚ５高表达引起的，而不是该传导系统中结肠腺性息肉基因（ＡＰＣ）和β－连环蛋白基因突变的结果．上述结果提示：原癌基因Ｗｎｔ及其受体的高表达可能是ＧＲＣ－１细胞恶性增生的原因之一。

关键词： Wnt/Frizzled APC 信号传导肾癌细胞系

正常人和结石病人尿中不同分子量的分离物对草酸钙晶体的影响

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中华实验外科杂志 1994年第6期11卷 343-344页

作者：辛殿旗冯陶窦长琪沈绍基北京医科大学泌尿外科研究所

尿中不同分子量的大分子分离物，由于分子量、化学结构、化学性质的不同，对尿石形成的作用也不相同。而分子量相同的大分子分离物，正常人和病人也有明显的差异。作者认为这种差异是结石形成的一个重要因素，也是我们进一步探讨尿石症... 详细信息

尿中不同分子量的大分子分离物，由于分子量、化学结构、化学性质的不同，对尿石形成的作用也不相同。而分子量相同的大分子分离物，正常人和病人也有明显的差异。作者认为这种差异是结石形成的一个重要因素，也是我们进一步探讨尿石症发病机理的一个新突破口。

关键词：含钙尿石尿结石大分子分离物晶体抑制指数