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黄连素通过调节Bcl-2家族蛋白和Caspase通路抑制缺氧/复氧诱导的H9C2细胞凋亡

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黄连素通过调节Bcl-2家族蛋白和Caspase通路抑制缺氧/复氧诱导的H...

作者：车奕宏第四军医大学

学位级别：硕士

背景: 心血管疾病是危害人类身体健康最严重的疾病之一，而冠心病又是最常见的心血管疾病。冠心病的治疗以积极的溶栓，冠脉支架等手段为主，但是当对心肌恢复血流供应后，发现细胞的功能代谢障碍及结构破坏不但未减轻反而加重，即产生... 详细信息

背景: 心血管疾病是危害人类身体健康最严重的疾病之一，而冠心病又是最常见的心血管疾病。冠心病的治疗以积极的溶栓，冠脉支架等手段为主，但是当对心肌恢复血流供应后，发现细胞的功能代谢障碍及结构破坏不但未减轻反而加重，即产生心肌缺血/再灌注损伤。再灌注时产生大量的活性氧，诱导细胞死亡。并且，尽管在缺氧的时候，氧含量比较低，越来越多的研究表明这段时期也有活性氧的产生，并与细胞的凋亡相关。心脏作为人体中最大的能量消耗器官，一旦发生心肌缺血缺氧，则心脏功能障碍更加严重。目前认为引起心肌损伤可能的机制主要有ATP供给不足，钙离子内流和氧化应激损伤严重，增加了线粒体膜的通透性，从而激活了线粒体凋亡通路。因此，如果某个生物小分子在心肌缺血再灌注的时候可以切断上述某个或多个环节之间的联系，阻断线粒体凋亡通路的激活，那么它也就可以减少心肌细胞的凋亡，发挥心肌保护作用，即有可能被用于预防或者治疗心肌供血不足的疾病。黄连素（BBR），属于异喹啉衍生物类生物碱，是传统中药黄连的重要组成部分。在祖国传统医学里，长期以来它被用来治疗腹泻和消化系统疾病。目前越来越多的研究表明，BBR还具有增加心肌收缩力，改善心肌供血，抗心律失常及调压降脂等功效。BBR对多种心血管疾病有良好的防治作用，但是对于其作用机制目前尚不很清楚。本次实验的目的是探讨BBR对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其分子机制。目的： 1.观察BBR对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。 2.研究BBR抑制H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制。方法：实验Ⅰ：首先筛查缺氧/复氧(H/R)的有效时间段，建立心肌H/R损伤模型。具体分组如下：正常对照组，不同的时间段的H/R组（1h/23h;2h/22h;4h/20h;8h/16h;12h/12h;16h/8h）组，将H9C2心肌细胞根据以上分组分别处理，筛选出最终的有效时间段，最后选定H/R4/20h作为以后实验模型组。然后，用MTT的方法检测BBR对H9C2心肌细胞活力的影响。具体分组如下：正常对照组，不同浓度的BBR组（10,20,50,100，150，200μmol/L）。最后，观察BBR对心肌的保护作用，具体分组如下：正常对照组（Con），BBR单纯处理组(Ber)，H/R (4/20h）模型组(H/R)，不同浓度BBR预处理H/R（10,100μmol/L+H/R）组(L-Ber;H-Ber)。用核染色标记的Hoechst33258观察H9C2细胞核凋亡的形态学变化。用流式细胞仪检测细胞的凋亡比率。根据乳酸脱氢固氮酶（LDH）测定试剂盒的说明测定LDH。实验Ⅱ：初步探讨BBR对H9C2心肌H/R损伤的保护机制。根据实验Ⅰ的设计，设置正常对照组（Con），BBR单纯处理组(Ber)，H/R (4/20h）模型组(H/R)，不同浓度BBR预处理H/R（10,100μmol/L+H/R）组(L-Ber;H-Ber)。用细胞探针罗丹明123观察线粒体膜电位（MMP）的变化。用免疫印迹法检测胞浆裂解物中Bcl-2，Bax，Cyt c，Smac和Caspase-3，6，9的蛋白表达情况。结果：实验Ⅰ： ***法检测H9C2细胞活力，与对照组比较，H/R模型组的细胞活力是（48.6±1.3）％（P <0.01），而10,100μmol/L的BBR预处理24小时后，与H/R组（48.6±1.3％）相比，预处理组的细胞活力分别上升到（67.6±2.2）％（P<0.01），（82.6±1.5）％（P <0.01）。而单纯BBR（100μmol/L）对H9C2细胞活力无明显影响(Fig.2)。 2.评估BBR对H/R诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用，本文以LDH释放作为观察指标。在H/R（4/20h）处理细胞后，与对照组比较，LDH释放量显著上升，232.1±6.60％(Fig.2)，但在10,100μmol/LBBR预处理24小时后，与对照组比较，LDH释放分别被显著下降至173.9±5.6％（P<0.05），127.4±4.6％（P <0.01）。 3.用膜渗透性染料Hechst33258观察细胞核的凋亡情况，正常情况下细胞核呈均匀弥漫着色，边缘光滑整齐。而本次实验结果也表明，正常对照组的细胞核呈均匀弥漫蓝染，而H/R（4/20h）处理后的模型组染色质呈致密深染，皱缩碎裂，显示明亮的蓝色荧光。但在BBR10,100μmol/L预处理后，细胞凋亡显著得到改善。另外BBR单独处理对H9C2细胞核无明显的影响(Fig.3)。 4.用FCM法检测细胞的凋亡比率，本次的实验结果表明，和正常对照组，BBR单独治疗组比较，H/R（4/20h）模型处理组细胞凋亡的比例分别从1.8％和1.6％上升到46.2％。而用BBR（10,100μmol/

关键词：黄连素缺氧/复氧线粒体膜电位心肌细胞线粒体

黄连素对缺氧复氧诱导大鼠心肌细胞内Nrf2/Keap1的影响

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中国临床解剖学杂志 2017年第3期35卷 282-285页

作者：王松海车奕宏陈捷陕西省中医医院西安710002 汉中市中心医院陕西汉中723000

目的探讨黄连素(BR)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后凋亡的影响及其作用机制。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为:正常对照组(NC组)、单纯药物组(BR组)、缺氧/复氧组(H/R组)、药物低剂量LBR组(1.5×10-6mol/L)及高剂量HBR组(1.5... 详细信息

目的探讨黄连素(BR)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后凋亡的影响及其作用机制。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为:正常对照组(NC组)、单纯药物组(BR组)、缺氧/复氧组(H/R组)、药物低剂量LBR组(1.5×10-6mol/L)及高剂量HBR组(1.5×10-4mol/L)。处理结束后,用MTT比色法检测H9c2心肌细胞的活力,用Hoechst33258染色检测细胞核形态的变化,用Western blot法检测Nrf2,Keap1蛋白的表达。结果与NC组比较,单纯BR对H9c2心肌细胞无影响。与H/R组比较,低、高剂量BR组细胞的活力明显上升(65.2±1.6%;82.3±1.4%)(P<0.01),心肌细胞的凋亡率明显减少(P<0.05),Western blot的结果显示,BR可明显促进抗氧化相关蛋白Nrf2表达,抑制Keap1的表达。结论 BR对H9c2心肌细胞H/R损伤后的凋亡具有显著的抑制作用,可能与其促进抗氧化核转录因子Nrf2表达有关。

关键词：黄连素缺氧/复氧损伤心肌细胞

两种起搏方式对单纯病态窦房结综合征患者心功能及房性心律失常的影响

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海南医学 2023年第20期34卷 2911-2915页

作者：任琳子杨淑罗超马妮娜车奕宏汉中市中心医院心内一科陕西汉中723000

目的比较两种起搏方式对单纯病态窦房结综合征(SSS)患者心功能及房性心律失常的影响。方法回顾性分析2019年1月至2022年1月期间就诊于汉中市中心医院的92例SSS患者的临床资料,根据起搏方式不同将其分为低位房间隔组49例(采用低位房间... 详细信息

目的比较两种起搏方式对单纯病态窦房结综合征(SSS)患者心功能及房性心律失常的影响。方法回顾性分析2019年1月至2022年1月期间就诊于汉中市中心医院的92例SSS患者的临床资料,根据起搏方式不同将其分为低位房间隔组49例(采用低位房间隔起搏)和右心耳组43例(采用右心耳起搏)。比较两组患者术前及术后6个月的心功能[左室射血分数(LVEF)、心室舒张早期和心室舒张末期时的血流流速比值(E/A)、左心房容积指数(LAVI)]和心电图表现(P波时限、P波离散度、窦房结传导时间)(SACT);随访6个月后,比较两组患者随访期间术后心脏不良事件(房性心律失常、心力衰竭)和术后并发症发生情况。结果术后6个月,两组患者的LVEF、E/A较术前均明显升高,LAVI较术前明显降低,且低位房间隔组的LVEF、E/A分别为(50.28±5.39)%、1.20±0.15,明显高于同时间右心耳组的(47.16±4.21)%、1.12±0.17,低位房间隔组的LAVI为(32.27±2.28) mL/L^(2),明显低于同时间右心耳组的(34.01±2.54) m L/L2,差异均有统计学意义(P0.05);随访6个月,低位房间隔组患者的房性心律失常发生率为2.04%,明显低于右心耳组的13.95%,差异有统计学意义(P0.05);低位房间隔组患者术后并发症总发生率为2.04%,略低于右心耳组的4.66%,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论低位房间隔起搏在改善患者心功能,纠正心脏电活动方面有明显优势,且还可降低房性心律失常发生风险。

关键词：起搏方式单纯病态窦房结综合征心功能房性心律失常

hs-CRP、NT-proBNP预测急性冠脉综合征患者PCI术后发生心血管事件的价值

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医学临床研究 2021年第12期38卷 1903-1905页

作者：王锦车奕宏西安交通大学第一附属医院东院陕西西安710089 汉中市中心医院陕西汉中723000

【目的】探讨高敏C反应蛋白(hs-CRP)、氨基酸末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)预测急性冠脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后发生心血管事件的价值。【方法】选取2018年1月至2020年8月本院收治的210例ACS患者,根据术后1年是否发... 详细信息

【目的】探讨高敏C反应蛋白(hs-CRP)、氨基酸末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)预测急性冠脉综合征(ACS)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后发生心血管事件的价值。【方法】选取2018年1月至2020年8月本院收治的210例ACS患者,根据术后1年是否发生主要不良心血管事件(MACE)将其分为观察组(术后发生MACE,n=77)和对照组(术后未发生MACE,n=133)。比较两组患者实验室指标及心功能,分析血清hs-CRP、NT-proBNP水平与GRACE评分的相关性,并分析影响ACS患者术后发生MACE的相关因素。【结果】观察组血清hs-CRP、NT-proBNP水平及GRACE评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。Pearson相关分析显示,血清hs-CRP、NT-proBNP水平与GRACE评分均呈正相关(r分别为0.403、0.433,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,hs-CRP、NT-proBNP及GRACE评分是ACS患者发生MACE的影响因素(均P<0.05)。【结论】hs-CRP、NT-proBNP对ACS患者发生MACE有一定的预测价值。

关键词：急性冠状动脉综合征 C反应蛋白质/血液利钠肽,脑/血液血管成形术,气囊,冠状动脉预后

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关于推进消防救援文化建设的思考

中国应急管理 2024年第5期 64-68页

作者：车奕聪国家消防救援局

中国共产党历来重视文化工作,文化建设对一个团体的发展具有不可替代的巨大作用。本文围绕发挥消防救援文化建设“铸魂聚力、传承发扬、树立形象”作用,系统梳理了近年来消防救援队伍文化建设成效,从思想认识和具体举措两个方面分析了... 详细信息

中国共产党历来重视文化工作,文化建设对一个团体的发展具有不可替代的巨大作用。本文围绕发挥消防救援文化建设“铸魂聚力、传承发扬、树立形象”作用,系统梳理了近年来消防救援队伍文化建设成效,从思想认识和具体举措两个方面分析了目前存在的主要问题,对新形势下如何推动消防救援队伍文化建设发展提出思考和建议。

关键词：文化建设消防救援文化文化品牌阵地

基于机器学习算法的典型工业区环境空气VOCs浓度预测研究

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环境科学研究 2024年第8期37卷 1694-1702页

作者：车祥上海市环境监测中心上海200235

挥发性有机物(VOCs)是重要的臭氧前体物,实现VOCs浓度预测可为区域大气污染预警与精准管控提供支撑。基于2022年上海市某典型工业区的区域观测VOCs小时体积分数、同期中尺度天气模型(WRF)分层气象因子预报数据、重点企业用电量数据,利... 详细信息

挥发性有机物(VOCs)是重要的臭氧前体物,实现VOCs浓度预测可为区域大气污染预警与精准管控提供支撑。基于2022年上海市某典型工业区的区域观测VOCs小时体积分数、同期中尺度天气模型(WRF)分层气象因子预报数据、重点企业用电量数据,利用长短期记忆网络(LSTM)算法构建了区域VOCs预测模型,对2023年1-4月区域VOCs小时体积分数进行预测,预报时效为24 h。基于区域污染溯源结果,构建了正常排放情景数据集,将预测值、观测值、正常排放情景数据集进行比较和分析,评估了预测值的准确性。结果表明:①区域VOCs体积分数预测值变化趋势与观测值基本一致,总体略低于观测值,在小时及日均两个级别均具有良好的线性相关关系。VOCs小时体积分数预测值的均方根误差(RMSE)为23.71×10^(-9),标准化平均偏差(NMB)为-10.4%,相关系数(r)为0.53,平均绝对误差(MAE)为12.73×10^(-9),两倍因子百分比(FAC2)为86.9%,VOCs日均体积分数预测值的RMSE、r、MAE、FAC2分别为11.33×10^(-9)、0.81、7.06×10^(-9)、96.7%。②模型可准确预测正常排放情景下的区域VOCs体积分数变化,突发异常排放导致的短时VOCs高值是VOCs小时体积分数预测值误差的主要来源,且贡献率一般超过30%。不同气象条件下异常排放对区域VOCs体积分数的影响程度不同,扩散条件愈不利,异常排放对区域VOCs浓度的影响愈大。③预测模型误差的来源分析表明,更多种类高分辨率活动量表征数据及更精细的气象预测数据有助于进一步提升预测模型的准确性。研究显示,LSTM算法可实现工业区环境空气VOCs浓度预测,进而识别气象条件及异常排放对区域VOCs浓度的影响。

关键词：机器学习长短期记忆网络挥发性有机物(VOCs) 预测环境空气

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高功率高效率开口波导阵列天线设计与实验

强激光与粒子束 2024年第7期36卷 43-53页

作者：魏溢宏李相强苏奕宇张健穹王庆峰西南交通大学物理科学与技术学院成都610031

针对研究具有高功率容量、高效率和低剖面特性的阵列天线的应用需求,提出并设计了一种高功率容量高效率开口波导阵列天线。该天线由紧凑型1分16路波导功率分配网络、4×4矩形开口波导单元和陶瓷密封罩组成,通过设计开口波导尺寸、在开... 详细信息

针对研究具有高功率容量、高效率和低剖面特性的阵列天线的应用需求,提出并设计了一种高功率容量高效率开口波导阵列天线。该天线由紧凑型1分16路波导功率分配网络、4×4矩形开口波导单元和陶瓷密封罩组成,通过设计开口波导尺寸、在开口波导表面加载E面金属栅条,使得辐射口面的电场分布更为均匀,提高了单元辐射增益。采用阶梯匹配结构实现了波导功率分配网络输出端口到开口波导单元口面的尺寸变换,同时提高了系统的阻抗带宽。加载在阵面上的陶瓷罩可使天线内部处于真空状态,提高了天线的功率容量。针对X波段高功率阵列天线的应用需求,优化设计了一个中心频率为9.5 GHz的16单元开口波导阵列,仿真结果表明其在9.25~9.65 GHz范围内口径效率均大于90%,反射系数均小于-13.9 dB。对天线进行了加工测试,测试得到的天线反射曲线和中心频率下的辐射方向图与仿真结果吻合良好,中心频率下天线增益为21.7 dBi。天线整体剖面高度为中心频率处波长的2倍,仿真得到的真空中功率容量为40 MW,具有高功率容量、高效率和低剖面的特点。

关键词：高功率微波高效率开口波导低剖面金属栅条

1981—2020年中国风速变化及其与大气环流的关系

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北京大学学报（自然科学版） 2024年第3期60卷 431-441页

作者：朱国营赵昕奕北京大学城市与环境学院北京100871

基于1981—2020年中国地面气象站观测数据,利用分段线性回归模型、Theil-Sen斜率估计、Mann-Kendall趋势检验以及逐步回归模型等方法,探究近40年中国近地面风速变化的区域差异及其与大气环流的关系。结果表明,1981—2020年的风速整体上... 详细信息

基于1981—2020年中国地面气象站观测数据,利用分段线性回归模型、Theil-Sen斜率估计、Mann-Kendall趋势检验以及逐步回归模型等方法,探究近40年中国近地面风速变化的区域差异及其与大气环流的关系。结果表明,1981—2020年的风速整体上呈下降趋势,西风、东风、南风和北风的风速下降幅度分别为-0.08,-0.06,-0.14和-0.14(m·s^(-1))/10a;不同时期风速的变化趋势有差异,在拐点年份前呈下降趋势,在拐点年份后呈上升趋势,且南风和北风的平均风速上升幅度大于西风和东风;不同区域和不同方向的风速变化存在差异,中国北部(西北、华北和东北地区)南风和北风的平均风速在2012年前后从下降趋势转为上升趋势,中国南部(华南地区)4个方向的平均风速在1990年前后从下降趋势变为上升趋势;大气环流与中国区域近地面风速的变化具有较强的相关性。亚洲极涡强度的年际变化指数在逐步回归模型中被保留的频率最高,与风速正相关,对中国北部风速的影响大于中部和南部;太平洋年代际振荡指数在逐步回归模型中被保留的频率最高,与风速负相关,对中国南部风速的影响显著小于北部和中部。

关键词：近地面风速大气环流指数中国区域

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黄连素对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的拮抗作用

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心脏杂志 2014年第3期26卷 271-273,284页

作者：车奕宏王海昌第四军医大学西京医院心血管内科陕西西安710032

目的:探讨黄连素(BR)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后凋亡的影响及其作用机制。方法:将培养的H9c2心肌细胞随机分为:正常对照(NC)组、单纯BR组、H/R组、药物低剂量BR(1.5×10-6mol/L)组及高剂量BR(1.5×10-4mol/L)组。处理结束... 详细信息

目的:探讨黄连素(BR)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤后凋亡的影响及其作用机制。方法:将培养的H9c2心肌细胞随机分为:正常对照(NC)组、单纯BR组、H/R组、药物低剂量BR(1.5×10-6mol/L)组及高剂量BR(1.5×10-4mol/L)组。处理结束后,用MTT比色法检测H9c2心肌细胞的活力,用Hoechst33258染色检测细胞核形态的变化,用Western blot法检测Cytochrome-C(Cyt-C),Caspase-9蛋白的表达。结果:与NC组比较,单纯BR组对H9c2心肌细胞无影响。与H/R组比较,低、高剂量BR组细胞的活力分别为(60.8±1.9)%和(81.2±1.9)%明显上升(P<0.01),心肌细胞的凋亡率明显减少,Western blot的结果显示,BR可抑制凋亡相关蛋白Cytochrome-C、Caspase-9的表达。结论:BR对H9c2心肌细胞H/R损伤后的凋亡具有显著的抑制作用,其可能的机制与抑制的Cyt-C的释放和抑制Caspase-9的表达有关。

关键词：黄连素缺氧复氧损伤心肌细胞H9c2 细胞凋亡