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小麦小花高纯度线粒体的分离及其蛋白质双向电泳体系建立

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中国生物化学与分子生物学报 2013年第10期29卷 983-989页

作者：陈征王书平张改生宋齐鲁郭佳林车会学西北农林科技大学国家杨凌农业生物技术育种中心/国家小麦改良中心杨凌分中心/小麦育种教育部工程研究中心/陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室陕西杨凌712100

应用差速离心和Percoll不连续密度梯度法分离纯化小麦三核期小花线粒体.在裂解液选择、IPG胶条pH值范围、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对线粒体蛋白质双向电泳体系进行探索和优化,确立了一套适用于小麦小花高纯度完整线粒体的分... 详细信息

应用差速离心和Percoll不连续密度梯度法分离纯化小麦三核期小花线粒体.在裂解液选择、IPG胶条pH值范围、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对线粒体蛋白质双向电泳体系进行探索和优化,确立了一套适用于小麦小花高纯度完整线粒体的分离方法及其蛋白质双向电泳的技术体系.结果表明,采用20%、24%和40%Percoll密度梯度和28%Percoll自形成密度高速离心体系,获得了有活性、高纯度且较完整的线粒体;经TCA-丙酮法提取蛋白,以7 mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS(W/V),65 mmol/L DTT,0.5%IPG缓冲液(V/V),0.001%溴酚蓝(W/V)裂解液溶解蛋白,采用17 cm,pH 4～7 IPG胶条和11%SDS-PAGE分离胶,上样量为160μg,硝酸银染色法,更适合小麦小花线粒体蛋白质组双向电泳分离.经PDQuest 2DE 8.0.1软件包统计分析,在2-DE图谱上分辨出约150个蛋白点,蛋白点清晰呈圆形,无横条纹干扰,这为利用双向电泳技术在亚细胞水平对线粒体进行蛋白质组学研究与分析奠定了基础,更为进一步分析研究线粒体与雄性不育的关系提供了理论与技术支撑.

关键词：小麦小花高纯度线粒体密度梯度离心双向电泳

小麦旗叶高纯度质膜的提取及蛋白质组学双向电泳体系的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2013年第7期29卷 690-697页

作者：宋齐鲁王书平张改生陈征郭佳林车会学西北农林科技大学国家杨凌农业生物技术育种中心/国家小麦改良中心杨凌分中心/小麦育种教育部工程研究中心/陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室陕西杨凌712100

以生长到Feekes 8.5时期小麦旗叶为试验材料,通过差速离心结合两相法提取并纯化质膜蛋白,进而在裂解液选择、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对质膜蛋白质双向电泳体系进行了优化.结果表明,采用6.4%PEG 3 350/Dextran T-500(W/W)两... 详细信息

以生长到Feekes 8.5时期小麦旗叶为试验材料,通过差速离心结合两相法提取并纯化质膜蛋白,进而在裂解液选择、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对质膜蛋白质双向电泳体系进行了优化.结果表明,采用6.4%PEG 3 350/Dextran T-500(W/W)两相体系可以获得纯度高达87.9%质膜微囊.经TCA-丙酮法裂解蛋白,以12%SDS-PAGE分离胶对900μg质膜蛋白进行双向电泳,在2-DE图谱上可分辨出173个蛋白点.建立了一套用于小麦旗叶高纯度质膜的提取方法及其蛋白质组学双向电泳体系.

关键词：小麦旗叶质膜蛋白两相法双向电泳

三例小麦细胞质雄性不育系线粒体DNA的扩增片段长度多态性分析

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生物工程学报 2013年第5期29卷 646-656页

作者：朱启迪张新钵 Ejaz M 张改生车会学王书平宋齐鲁杨书玲张龙雨西北农林科技大学农学院陕西杨凌712100

细胞质雄性不育是小麦杂种优势利用的重要途径,为了鉴定3例小麦雄性不育系的细胞质类型,对其线粒体DNA(mtDNA)进行扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析。文中利用差速离心法和不连续蔗糖密度梯度超速... 详细信息

细胞质雄性不育是小麦杂种优势利用的重要途径,为了鉴定3例小麦雄性不育系的细胞质类型,对其线粒体DNA(mtDNA)进行扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析。文中利用差速离心法和不连续蔗糖密度梯度超速离心法提取纯化小麦线粒体。结果表明:通过该提取方法获得的mtDNA,其质量和纯度能够满足PCR反应和遗传学分析。在64对选扩引物中,筛选到了4对特异性引物,其中引物E1/M7在ms(Kots)-90-110不育系扩增出3条特异条带;引物E4/M2在ms(Ven)-90-110不育系扩增出2条特异条带;引物E7/M6在ms(S)-90-110不育系中扩增出2条特异条带;引物E6/M4在ms(Kots)-90-110不育系中扩增出2条特异条带。这些特异引物可以用来作为鉴定具有粘果山羊草Aegilops kotschyi、偏凸山羊草***、斯卑尔脱小麦Triticum spelta 3类不育细胞质型小麦雄性不育系的细胞质分子标记,为研究小麦细胞质雄性不育机理奠定了分子基础。

关键词：小麦细胞质雄性不育线粒体DNA 扩增片段长度多态性分子标记

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小麦品种中麦4072良种生产技术

中国种业 2021年第6期 106-108页

作者：张玉马云国车会学徐国芳山东鑫丰种业股份有限公司聊城252400

中麦4072是中国农业科学院作物科学研究所在2015年育成,2019年通过国家黄淮海冬小麦北片区审定后与山东鑫丰种业股份有限公司合作开发的小麦品种。该品种抗病抗倒、高产易管理,适宜在山东、河北、山西等地种植。对中麦4072的品种特征特... 详细信息

中麦4072是中国农业科学院作物科学研究所在2015年育成,2019年通过国家黄淮海冬小麦北片区审定后与山东鑫丰种业股份有限公司合作开发的小麦品种。该品种抗病抗倒、高产易管理,适宜在山东、河北、山西等地种植。对中麦4072的品种特征特性等进行了介绍,并总结了中麦4072在山东省进行良种生产的关键技术,具体包括播种及各个生育期的田间管理、病虫害防治等内容,以期为中麦4072良种高效生产提供参考。

关键词：中麦4072 特征特性小麦良种生产技术

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小麦品种鑫麦807及高产栽培技术

中国种业 2021年第6期 110-111页

作者：车会学马云国李进秋张玉吴静山东鑫丰种业股份有限公司聊城252411

鑫麦807是山东鑫丰种业股份有限公司采用系谱法选育出的小麦品种。该品种半冬性、稳产高产、综合抗性较好,尤其是抗倒春寒能力强。从整地、播种及田间管理等方面提出该品种的高产高效栽培技术措施,为其推广应用提供参考。

关键词：鑫麦807 特征特性栽培技术

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玉米品种鑫研218及高产栽培技术

中国种业 2019年第10期 79-80页

作者：张玉马云国车会学马雪蕾李中政山东鑫丰种业股份有限公司

鑫研218是山东鑫丰种业股份有限公司用SX1395与SX393杂交选育而成的玉米杂交种。2017-2018年分别通过了国家黄淮海夏播玉米区、东华北中晚熟玉米区和西北春玉米区审定。该品种具有高产性好、抗病抗倒性好、适宜机收、适应性广等突出特... 详细信息

鑫研218是山东鑫丰种业股份有限公司用SX1395与SX393杂交选育而成的玉米杂交种。2017-2018年分别通过了国家黄淮海夏播玉米区、东华北中晚熟玉米区和西北春玉米区审定。该品种具有高产性好、抗病抗倒性好、适宜机收、适应性广等突出特点。介绍了鑫研218的选育经过、特征特性、产量表现以及高产栽培技术要点。

关键词：鑫研218 高产选育栽培技术

基因HAT1在小麦生理型雄性不育系中的表达分析

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麦类作物学报 2013年第5期33卷 869-874页

作者：车会学巴青松张改生陈征宋齐鲁刘红占桑青西北农林科技大学国家杨凌农业生物技术育种中心/国家小麦改良中心杨凌分中心/小麦育种教育部工程研究中心/陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室陕西杨凌712100

组蛋白乙酰转移酶(HAT)在生物生殖发育中对染色体的结构修饰和基因的表达调控发挥着重要作用。为探讨组蛋白乙酰化与小麦生理型雄性不育的关系,利用实时荧光定量技术,分析了化学杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育小麦花药各发育时期组蛋... 详细信息

组蛋白乙酰转移酶(HAT)在生物生殖发育中对染色体的结构修饰和基因的表达调控发挥着重要作用。为探讨组蛋白乙酰化与小麦生理型雄性不育的关系,利用实时荧光定量技术,分析了化学杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育小麦花药各发育时期组蛋白乙酰转移酶基因HAT1的表达水平。结果表明,与同期可育花药相比,生理型雄性不育小麦花药的HAT1基因表达水平在单核期显著升高,二核期变化趋势基本相同,三核期显著降低。DNA Ladder显示,不育花药在单核期出现明显的DNA片段化,比正常花药提前凋亡。这表明SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育可能与HAT1基因表达异常和花药细胞提前凋亡有关。

关键词：小麦生理雄性不育组蛋白乙酰转移酶基因(HAT1) DNA损伤修复细胞凋亡

小麦生理型雄性不育系中反式烯脂酰-CoA还原酶基因(TaECR)的克隆及表达分析

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农业生物技术学报 2013年第7期21卷 792-798页

作者：巴青松张改生车会学刘红占张龙雨王书平西北农林科技大学国家杨凌农业生物技术育种中心/国家小麦改良中心杨凌分中心/小麦育种教育部工程研究中心/陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室

超长链脂肪酸(VLCFAs)代谢在花药发育中发挥着重要的作用,而反式烯脂酰-CoA还原酶(trans-2,3-enoyl-CoA reductase,ECR)是催化超长链脂肪酸合成的脂肪酰-CoA延长酶之一。为进一步研究杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育的机理,根据已报道二穗... 详细信息

超长链脂肪酸(VLCFAs)代谢在花药发育中发挥着重要的作用,而反式烯脂酰-CoA还原酶(trans-2,3-enoyl-CoA reductase,ECR)是催化超长链脂肪酸合成的脂肪酰-CoA延长酶之一。为进一步研究杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育的机理,根据已报道二穗短柄草(Brachypodium distachyon)ECR基因,采用电子克隆获得序列并设计引物,从小麦(Triticum aestivum)中克隆ECR的开放阅读框cDNA序列,命名为TaECR,将该序列提交至GenBank,登录号为KC222053。序列分析表明,TaECR基因编码310个氨基酸,具有反式烯脂酰-CoA还原酶的经典结构域。表达分析表明,TaECR基因在小麦花药、颖片、叶和根中均有表达,其中在根中的表达量最底;与可育系相比,TaECR基因在生理型不育系三核期中表达急剧下调,在单核期和二核期表达趋势无显著变化,并与其蜡质积累量变化趋势基本一致,这表明TaECR基因调节的超长链脂肪合成途径可能参与了SQ-1诱导的败育过程。

关键词：小麦杀雄剂SQ-1 TaECR 超长链脂肪酸雄性不育

小麦染色体组蛋白泛素化与生理型雄性不育相关性的研究

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农业生物技术学报 2013年第4期21卷 396-406页

作者：桑青刘红占张改生朱启迪祝万万张龙雨车会学西北农林科技大学国家杨凌农业生物技术育种中心/国家小麦改良中心杨凌分中心/小麦育种教育部工程研究中心/陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室

小麦(Triticum aestivumL.)杂种优势利用与雄性不育机理的研究,多年来一直是世界性设法攻克的科学难关。为了研究小麦生理型雄性不育与组蛋白泛素化的关系,进而为揭示小麦生理型雄性不育的机理奠定基础。以小麦品种西农1376为供试材料,... 详细信息

小麦(Triticum aestivumL.)杂种优势利用与雄性不育机理的研究,多年来一直是世界性设法攻克的科学难关。为了研究小麦生理型雄性不育与组蛋白泛素化的关系,进而为揭示小麦生理型雄性不育的机理奠定基础。以小麦品种西农1376为供试材料,化学杂交剂SQ-1为雄性不育诱导剂,首先创建其可育与不育等生理系,然后提取两者的组蛋白,采用Westernblot的方法研究其泛素化水平;克隆出催化组蛋白H2B泛素化的E2酶基因RAD6的cDNA功能序列,并对其进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR技术分析RAD6基因的表达特性。结果显示,在小花发育的3个时期,组蛋白H3的泛素化修饰水平在可育株与不育株之间无明显差异。在单核期,组蛋白H2A的泛素化修饰仅发生在可育株中,而不育株中没有发生;组蛋白H2B的泛素化水平在不育株中明显低于可育株,同时不育株中RAD6基因的表达明显受到抑制。这些均表明,在小麦生理型雄性不育败育关键期(单核期),不育株小花中RAD6基因的表达显著下降,同时其催化的组蛋白H2B泛素化水平也明显下降,以及组蛋白H2A没有泛素化修饰,可能影响某些关键基因的转录而导致小麦败育。由此可见,小麦组蛋白泛素化水平与生理型雄性不育密切相关,这为小麦生理型雄性不育组蛋白泛素化调控机制提供了科学依据,进而为深入探究小麦生理型雄性不育机理提供了坚实的表观遗传研究基础资料。

关键词：小麦杀雄剂SQ-1 免疫印迹组蛋白泛素化 RAD6 荧光定量PCR 生物信息学