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人源溶菌酶基因在杆状病毒系统中的表达

中国生物制品学杂志 2012年第12期25卷 1623-1626页

作者：陈锐孙晓宇万一门欣路鹏鹏李玥沈卫荣陕西省微生物研究所微生物资源中心西安710043

目的在杆状病毒系统中表达人源溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,为其临床应用和大规模生产奠定基础。方法将人工合成的含信号肽和不含信号肽的溶菌酶基因克隆至重组杆状病毒表达系统的载体中,构建重组穿梭质粒,转染sf9细胞,SDS-PAGE和We... 详细信息

目的在杆状病毒系统中表达人源溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,为其临床应用和大规模生产奠定基础。方法将人工合成的含信号肽和不含信号肽的溶菌酶基因克隆至重组杆状病毒表达系统的载体中,构建重组穿梭质粒,转染sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达,溶菌试验验证表达产物的溶菌酶活性。结果重组克隆质粒PFastBacHTA-signal-lysozyme和PFastBac HTA-lysozyme的PCR产物分别可见444和393 bp的目的基因条带,测序结果证实重组克隆质粒构建正确。PCR结果显示Lysozyme-1、Lysozyme-2、slysozyme-1、slysozyme-2、slysozyme-3、slysozyme-4号重组穿梭质粒可扩增出目的条带。sf9-PHLY和sf9-PHSLY的表达产物经12%SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约17 500和19 300的特异蛋白条带;表达的两种重组蛋白均可与鼠抗6×His单抗特异性结合;表达产物具有溶菌酶活性。结论成功在杆状病毒表达系统中表达了hLY基因,为其临床应用和大规模生产奠定了基础。

关键词：溶菌酶杆状病毒基因表达

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陕北地区石油降解菌的筛选及降解条件研究

江苏农业科学 2009年第3期37卷 401-403页

作者：高小朋路鹏鹏徐盈刘海迪边志波延安大学生命科学学院陕西延安716000

以陕西省延安市宝塔区川口乡和子长县两地被石油污染的土壤和油井附近的油泥为菌源,经过筛选得到CY-L1、CT-L6等2株对石油具有较高降解率的菌株,当石油初始浓度为20 mg/ml时,降解率分别为61%、63%。通过研究得知,在pH值接近7、初始石油... 详细信息

以陕西省延安市宝塔区川口乡和子长县两地被石油污染的土壤和油井附近的油泥为菌源,经过筛选得到CY-L1、CT-L6等2株对石油具有较高降解率的菌株,当石油初始浓度为20 mg/ml时,降解率分别为61%、63%。通过研究得知,在pH值接近7、初始石油浓度较低时,CY-L1和CT-L6菌株对石油具有较高的降解率。

关键词：生物修复石油污染菌株降油率

基于Web of Science数据库的微生物肥料研究发展趋势分析

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中国农业科技导报 2019年第3期21卷 1-12页

作者：田稼路鹏鹏孙超吴小杰李飞齐凡陕西省微生物研究所西安710043 中国科学院西安分院科技处西安710043 陕西省科学院科技处西安710043

微生物肥料研究是目前肥料行业的热点领域之一,为了明确该领域在世界范围内的研究现状,通过Web of Science数据库对1900-2018年以来关于微生物肥料的论文进行文献计量分析统计,以探讨该领域的研究现状、研究重点及发展趋势。结果表明:... 详细信息

微生物肥料研究是目前肥料行业的热点领域之一,为了明确该领域在世界范围内的研究现状,通过Web of Science数据库对1900-2018年以来关于微生物肥料的论文进行文献计量分析统计,以探讨该领域的研究现状、研究重点及发展趋势。结果表明:微生物肥料研究从20世纪90年代开始逐渐增长,2003年开始进入全面快速发展时期。以美国、中国、印度、德国和英国等国家的发文量最多;中国科学院、西班牙高等科学研究委员会、法国国家农业研究院、法国国家科学研究院等是主要的发文机构。在研究水平方面表现出欧美等发达国家强于发展中国家的现状,但发展中国家有研究投入不断加大的趋势。在学科分布上主要集中在农学、环境科学及生态学、植物科学及微生物学等学科,在未来表现出以环境科学和农学为主要学科且具有学科交叉的趋势;主要研究主题依然是固氮作用、生物降解与修复和促生长作用等内容,但生物降解与修复、有机质腐熟、改善土壤生态环境和增强作物抗逆性等主题将在未来的研究中成为快速增长的热点领域。上述结果可为微生物肥料学科发展规划和政府管理部门决策的制定提供一定参考。

关键词：微生物肥料发展趋势文献计量 Web of Science

枝顶孢霉制剂防治根结线虫过程中土壤酶活性和微生物数量的变化

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江苏农业科学 2017年第6期45卷 277-280页

作者：路鹏鹏陈锐孙晓宇赵玲侠瞿佳沈卫荣陕西省微生物研究所陕西西安710043

为了了解枝顶孢霉制剂在设施黄瓜根结线虫防治过程中对土壤微生态环境的影响,通过田间试验研究了黄瓜不同生长期土壤酶活性和微生物数量变化。结果发现,枝顶孢霉制剂对土壤酶活性和微生物数量的影响在幼苗期较显著,盛果期和拉秧期影响较... 详细信息

为了了解枝顶孢霉制剂在设施黄瓜根结线虫防治过程中对土壤微生态环境的影响,通过田间试验研究了黄瓜不同生长期土壤酶活性和微生物数量变化。结果发现,枝顶孢霉制剂对土壤酶活性和微生物数量的影响在幼苗期较显著,盛果期和拉秧期影响较小;幼苗期,土壤脲酶活性降低,蔗糖酶活性升高,过氧化氢酶和磷酸酶变化不显著;土壤中细菌数量减少,放线菌数量变化不显著,真菌数量增加;盛果期仅蔗糖酶活性提高,拉秧期土壤酶活性和微生物数量变化均不显著;土壤微生物数量和土壤酶活性具有一定相关性,且随黄瓜生长期发生变化。结果表明,枝顶孢霉制剂对土壤微生态环境的影响主要在幼苗期,此影响有利于黄瓜幼苗生长和根结线虫的防治。

关键词：枝顶孢霉过氧化氢酶脲酶蔗糖酶磷酸酶微生物数量

培养时间对小鼠树突状细胞及其外泌体免疫相关膜蛋白的影响

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实用医学杂志 2024年第7期40卷 941-947页

作者：肖俐罗淑敏徐芳路鹏鹏邢恩鸿李伟华承德医学院附属医院河北省泛血管疾病重点实验室河北承德067000 首都医科大学附属北京佑安医院肝病研究所北京100069

目的明确培养时间对树突状细胞及其外泌体免疫相关膜蛋白(CD80、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ)的影响,为今后相关研究提供实验依据。方法小鼠骨髓细胞经重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化成树突状细胞,再加入肿瘤坏死... 详细信息

目的明确培养时间对树突状细胞及其外泌体免疫相关膜蛋白(CD80、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ)的影响,为今后相关研究提供实验依据。方法小鼠骨髓细胞经重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化成树突状细胞,再加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导为成熟树突状细胞;超速离心法提取外泌体;蛋白印迹法和Amnis量化成像流式细胞仪对外泌体进行鉴定;Amnis量化成像流式细胞仪检测小鼠树突状细胞以及树突状细胞外泌体膜上免疫相关蛋白CD80、CD11c、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达情况。结果体外培养第5天后,约50%以上的树突状细胞表达CD80、CD11c、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ,第13天达最高水平,其中CD80阳性率为(97.29±0.63)%,CD11c阳性率为(92.31±1.18)%,MHC-Ⅰ阳性率为(97.91±0.49)%,MHC-Ⅱ阳性率为(97.91±0.49)%,差异具有统计学意义(P<0.001)。第13天后逐渐减少,至第30天,仍有约80%的树突状细胞表达MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ免疫分子。外泌体膜上CD80、CD11c、和MHC-Ⅱ表达水平以第5天最高,然后随培养时间延长,总体呈下降趋势,除外MHC-Ⅰ分子,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论体外培养的小鼠树突状细胞表达较高的免疫相关膜蛋白,在合适的培养条件下可长时间稳定维持。其分泌的外泌体表面也携带有丰富的免疫相关膜蛋白,但树突状细胞与外泌体膜表面的免疫相关蛋白未发现明显相关性。

关键词：小鼠树突状细胞外泌体免疫膜蛋白

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陕北石油污染区土壤细菌群落结构解析

环境污染与防治 2017年第11期39卷 1181-1185页

作者：陈锐赵玲侠孙晓宇瞿佳路鹏鹏沈卫荣陕西省微生物研究所陕西西安710043

为了解陕北地区石油污染对土壤微生物群落结构的影响,采用高通量测序对石油污染土壤中细菌群落结构进行研究,考察了石油污染土样的理化性质、可培养微生物数量及细菌群落结构,探讨石油污染程度与细菌群落结构间的关系。结果表明,石油污... 详细信息

为了解陕北地区石油污染对土壤微生物群落结构的影响,采用高通量测序对石油污染土壤中细菌群落结构进行研究,考察了石油污染土样的理化性质、可培养微生物数量及细菌群落结构,探讨石油污染程度与细菌群落结构间的关系。结果表明,石油污染土样中残油量为28.7~870.0mg/kg,相对于未污染土样,石油污染土样的总碳随残油量的增加呈增加趋势。石油污染土样中可培养细菌数量大于未污染土样,而可培养放线菌数量则相反。细菌群落结构分析表明,石油污染土样中细菌群落数量显著低于未污染土样,操作分类单元(OTU)数从未污染土样的7 707个最低下降到2 034个,且物种丰富度显著降低,其中厚壁菌门、放线菌门及变形菌门为优势菌群,随土壤残油量增加,厚壁菌门、变形菌门及拟杆菌门比例显著上升,而酸杆菌门、芽单胞菌门等比例则显著降低。

关键词：石油污染微生物群落结构微生物多样性

不同棚龄及种植期对土壤微生物代谢功能的影响

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北方园艺 2017年第11期 179-185页

作者：陈锐孙晓宇路鹏鹏赵玲侠瞿佳沈卫荣陕西省微生物研究所陕西西安710043

为了解不同年限(3、6、9、15年)及不同种植期(定植期、坐果期、盛果期、拉秧期)的设施棚室土壤微生物对碳源利用的变化趋势,对土壤理化性质和土壤微生物碳源利用进行了检测分析。结果表明:种植年限增加导致棚室土壤pH约降低0.52,土壤可... 详细信息

为了解不同年限(3、6、9、15年)及不同种植期(定植期、坐果期、盛果期、拉秧期)的设施棚室土壤微生物对碳源利用的变化趋势,对土壤理化性质和土壤微生物碳源利用进行了检测分析。结果表明:种植年限增加导致棚室土壤pH约降低0.52,土壤可溶性盐分、总磷及总碳随着棚龄增加逐渐累积。不同棚龄土壤中,9年棚室微生物碳源代谢活性最高,15年棚室有所下降,但差别不显著。与不同棚龄棚室土壤代谢差异显著相关的碳源有15种。不同种植期土壤样本中,微生物群落对各类碳源代谢均呈现坐果期最强,拉秧期最弱的特征,并且差异显著,与其代谢差异显著相关的碳源19种。

关键词：细菌 Biolog ECO平板微生物群落代谢功能

一株胶质芽胞杆菌YA-07的鉴定及固体发酵研究

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中国农业科技导报 2014年第5期16卷 67-77页

作者：田稼孙超路鹏鹏马瑜柯杨李勃杨明琰陕西省微生物研究所西安710043 中国科学院西安分院西安710043 长安大学环境科学与工程学院西安710064

胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus）是一类能分解土壤中磷、钾和硅酸盐矿物的化能异养型好氧细菌,广泛应用于微生物肥料中。该菌在微生物肥料生产过程中主要是经液体发酵后由草炭吸附而成,这种工艺生产的微生物肥料有效活菌数和芽... 详细信息

胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus）是一类能分解土壤中磷、钾和硅酸盐矿物的化能异养型好氧细菌,广泛应用于微生物肥料中。该菌在微生物肥料生产过程中主要是经液体发酵后由草炭吸附而成,这种工艺生产的微生物肥料有效活菌数和芽胞率均较低。因此,如何通过改善胶质芽胞杆菌的发酵方式和发酵条件以提高其有效活菌数和芽胞率显得尤为重要。对陕西省洛川县苹果园土壤中分离到的一株YA-07菌株通过形态学、生理生化实验和16s rDNA序列比对鉴定为胶质芽胞杆菌（Bacillus mucilaginosus）。通过单因素实验和正交试验,建立了一种使该菌产生高密度有效活菌数和高芽胞率的固体发酵条件。结果表明：YA-07能够产生大量有效活菌数和高芽胞率的培养基组分为500 mL培养瓶装草炭50 g,淀粉添加量3%,蛋白胨添加量3%,不添加无机盐和微量元素。在培养温度30℃,pH 7.0左右,接种量10%,培养时间144 h条件下,YA-07的有效活菌数可以达到1.58×10^-9 cfu/g,芽胞率可以达到91.3%。利用固体发酵技术提高了胶质芽胞杆菌的有效活菌数和芽胞率,在改善微生物肥料产品质量的同时减少了环境的污染,对促进我国绿色农业的发展具有重要意义。

关键词：胶质芽胞杆菌固体发酵分类鉴定正交试验单因素实验

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一株抗铅细菌的分离鉴定与抗铅性能研究

西北农业学报 2016年第8期25卷 1195-1200页

作者：瞿佳赵玲侠孙晓宇陈锐路鹏鹏沈卫荣陕西省微生物研究所微生物资源中心西安710043

为获得可应用于农田土壤重金属污染治理的铅(Pb)降解功能菌株,从陕西商洛铅锌矿区周边农田土壤中分离筛选出1株抗铅细菌,命名为PS8,对其形态特征、生理生化、16SrDNA同源性及抗铅性能进行研究。结果表明,菌株PS8为革兰氏阴性细菌,菌落... 详细信息

为获得可应用于农田土壤重金属污染治理的铅(Pb)降解功能菌株,从陕西商洛铅锌矿区周边农田土壤中分离筛选出1株抗铅细菌,命名为PS8,对其形态特征、生理生化、16SrDNA同源性及抗铅性能进行研究。结果表明,菌株PS8为革兰氏阴性细菌,菌落呈圆形、淡黄色;最适生长温度为30℃,最适pH为7.0;可还原亚硝酸盐,氧化酶、接触酶反应呈阳性;与粪产碱菌Alcaligenes faecali高度同源;在Pb2+浓度为0.5和1.0mmol/L时,去除率分别为99.08%和97.24%。菌株PS8对重金属铅具有高抗性和较强降解能力,是高效、环境友好的土壤重金属铅污染微生物修复菌株。

关键词：抗铅微生物产碱菌鉴定抗铅性能