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内皮型一氧化氮合酶基因G-894T、T-786C多态性与散发性颅内动脉瘤的相关性

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南方医科大学学报 2013年第12期33卷 1733-1737页

作者：刘丽黄旭升蔡艺灵杜娟冯凯路浩军解放军总医院神经内科北京100853 解放军第306医院神经内科北京100101

目的探讨内皮型一氧化氮合酶基因(eNOS)G-894T、T-786C多态性与散发性颅内动脉瘤的相关性。方法在散发性颅内动脉瘤病例组及对照组中,应用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性(RFLP)的方法对eNOS基因2个多态位点进行研究,研究基因型及... 详细信息

目的探讨内皮型一氧化氮合酶基因(eNOS)G-894T、T-786C多态性与散发性颅内动脉瘤的相关性。方法在散发性颅内动脉瘤病例组及对照组中,应用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性(RFLP)的方法对eNOS基因2个多态位点进行研究,研究基因型及等位基因频率在两组中的分布,并分析其与颅内动脉瘤大小的关系。结果 eNOS基因G-894T位点基因型在病例组及对照组中的分布差异有显著意义。G-894T位点GG基因型较(GT+TT)基因型发生颅内动脉瘤的风险提高(OR:1.89,95%CI:1.02-3.52,P=0.04)。T-786C多态位点C等位基因较T等位基因发生颅内动脉瘤的风险增加(OR:2.116,95%CI:1.073-4.151,P=0.03)。eNOS两个位点的基因型及等位基因频率分布与颅内动脉瘤的大小无明显相关。结论 eNOS可能参与颅内动脉瘤的发生及发展过程。

关键词：颅内动脉瘤基因多态性蛛网膜下腔出血内皮型一氧化氮合酶基因

水通道蛋白-5基因多态性与中国北方汉族人群慢性阻塞性肺疾病的相关性分析

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解放军医学杂志 2013年第7期38卷 569-573页

作者：刘魁冯凯王萍贾海英任家庭路浩军彭文鸿解放军306医院呼吸与重症医学科北京100101 解放军306医院中心实验室北京100101 解放军306医院体检中心北京100101

目的探讨水通道蛋白-5（AQP5）基因多态性与中国北方汉族人群慢性阻塞性肺疾病（COPD）的遗传易感性及严重程度的关系。方法 2007年6月-2012年5月在解放军306医院呼吸科获得诊断的COPD急性加重（AECOPD）患者220例,男142例,女78例,年龄3... 详细信息

目的探讨水通道蛋白-5（AQP5）基因多态性与中国北方汉族人群慢性阻塞性肺疾病（COPD）的遗传易感性及严重程度的关系。方法 2007年6月-2012年5月在解放军306医院呼吸科获得诊断的COPD急性加重（AECOPD）患者220例,男142例,女78例,年龄37~101（74.0±10.0）岁,选取在我院进行体检,且年龄、性别与COPD患者相匹配的285例健康人群列入对照组,男183例,女102例,年龄44~97（72.5±8.6）岁。将COPD组分为4个亚组：第1秒用力呼气容积占用力肺活量百分比（FEV1/FVC）〈70%,第1秒用力呼气肺容积占计值百分比（FEV1%）≥80%为轻度组;50%≤FEV1%〈80%为中度组;30%≤FEV1〈50%为重度组;FEV1≤30%为极重度组,将轻度与中度合并为轻-中度组,重度与极重度合并为重度-极重度组。搜集研究对象外周血标本,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）和SNaPshot法检测AQP5基因3个标签单核苷酸多态性（tSNP）位点（rs3736309,rs296754和rs296759）的基因型分布。采用χ2检验进行Hardy-Weinberg平衡检验,用非条件logistic回归模型计算比数比（OR）及95%可信区间（CI）。比较AQP5 3个tSNP基因型频率分布在健康对照组和COPD患者间的差异,以明确AQP5基因多态性与中国北方汉族人群罹患COPD的相关性。比较轻-中度与重度-极重度COPD患者AQP5基因多态性的差异,以进一步明确AQP5基因多态性与COPD严重程度的关系。结果 AQP5基因rs3736309、rs296754和rs296759位点基因型分布在COPD患者与对照组中无明显差异。但在COPD患者中,rs3736309在轻-中度与重度-极重度患者中基因型分布的差异有统计学意义（P〈0.05）,提示rs3736309多态性位点可能与COPD患者气道阻塞严重程度相关。结论 AQP5基因多态性与COPD的易感性无关,但与COPD的肺功能损害严重程度有关。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性水通道蛋白-5 多态性,单核苷酸

内皮素受体A基因多态性与散发性颅内动脉瘤的相关性

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南方医科大学学报 2014年第1期34卷 60-64页

作者：刘丽黄旭升蔡艺灵冯凯杜娟路浩军程飞飞解放军总医院神经内科北京100853 解放军第306医院神经内科北京100101

目的探讨内皮素受体A基因(EDNRA)多态性与散发性颅内动脉瘤的相关性。方法在散发性颅内动脉瘤及对照组中,应用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性(RFLP)的方法对EDNRA基因3个多态位点进行研究,分析上述多态位点基因型及等位基因频率在... 详细信息

目的探讨内皮素受体A基因(EDNRA)多态性与散发性颅内动脉瘤的相关性。方法在散发性颅内动脉瘤及对照组中,应用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性(RFLP)的方法对EDNRA基因3个多态位点进行研究,分析上述多态位点基因型及等位基因频率在两组中的分布,并分析其与颅内动脉瘤大小的关系。结果 EDNRA基因的rs5335、rs6842241、rs6841581位点基因型及等位基因频率在病例组及对照组中的分布无明显差异。Rs6841581 GG基因型频率分布与颅内动脉瘤大小有关,EDNRA的其它多态位点的基因型及等位基因频率与动脉瘤的大小无明显相关。结论 EDNRA基因rs6841581位点与颅内动脉瘤的大小相关,提示EDNRA基因可能参与了颅内动脉瘤的发生发展过程。

关键词：颅内动脉瘤基因多态性蛛网膜下腔出血内皮素受体A基因

MUC1模拟表位肽治疗表达人MUC1 T739荷瘤小鼠的实验研究

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免疫学杂志 2012年第5期28卷 394-397,402页

作者：崔志刚刘刚潘进勇路浩军张立新解放军306医院泌尿外科北京100101

目的观察MUC1的模拟表位肽对表达人MUC1 T739荷瘤小鼠的治疗作用。方法建立稳定表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,培养T739小鼠成熟树突状细胞,荷瘤小鼠随机分为4组,用负载模拟表位肽成熟DC免疫表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,第1组皮下注射等渗盐水,... 详细信息

目的观察MUC1的模拟表位肽对表达人MUC1 T739荷瘤小鼠的治疗作用。方法建立稳定表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,培养T739小鼠成熟树突状细胞,荷瘤小鼠随机分为4组,用负载模拟表位肽成熟DC免疫表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,第1组皮下注射等渗盐水,第2组注射空DC,第3组注射负载1号肽的DC,第4组注射负载2号肽的DC,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积,称瘤重,并观察小鼠存活期。结果两组DC+肽免疫的小鼠瘤体积减小明显,与1、2组相比差异非常显著(P<0.01)。平均瘤重1、2组与3、4组相比差异非常显著(P<0.01)。第1～4组荷瘤鼠的生存期分别为(34.6±3.507)d,(35.2±3.564)d,(58.4±5.595)d,(59±6.819)d,3、4两组荷瘤小鼠生存期较1、2组明显延长,差异有显著性意义(P<0.01)。结论 MUC1模拟表位肽能明显抑制表达人MUC1 T739荷瘤小鼠肿瘤生长,显著延长T739荷瘤小鼠生存时间。

关键词： MUC1粘蛋白模拟抗原表位肿瘤疫苗膀胱癌

磷酸镁/胶原肽复合骨水泥:胶原肽的缓凝作用

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中国组织工程研究 2018年第26期22卷 4101-4109页

作者：曹霄峰王毅虎路浩军马铭郭燕川毛克亚李江涛中国科学院理化技术研究所光化学转换与功能材料重点实验室中国科学院理化技术研究所杭州研究院生物材料研究中心中国科学院大学解放军总医院(301医院)骨科中国科学院理化技术研究所低温工程学重点实验室

背景:磷酸镁骨水泥是一种具有良好生物相容性和生物活性的骨修复材料,克服了磷酸钙骨水泥的一些缺点,但也存在固化过程反应速率快,凝固时间短,高放热等缺点。胶原肽是一种多肽混合物,具有增强人体骨密度,预防和治疗骨关节炎以及骨质疏... 详细信息

背景:磷酸镁骨水泥是一种具有良好生物相容性和生物活性的骨修复材料,克服了磷酸钙骨水泥的一些缺点,但也存在固化过程反应速率快,凝固时间短,高放热等缺点。胶原肽是一种多肽混合物,具有增强人体骨密度,预防和治疗骨关节炎以及骨质疏松等性质。目前文献中未见将胶原肽引入磷酸镁骨水泥制成磷酸镁/胶原肽复合骨水泥并研究其理化性质和细胞毒性的报道。目的:制备一种固化速率与反应放热可调的磷酸镁/胶原肽复合骨水泥,研究其理化性质与细胞毒性。方法:将低活性氧化镁、磷酸二氢钾、十水合四硼酸钠混合制成磷酸镁骨水泥,将不同量的胶原肽引入其中,形成磷酸镁/胶原肽复合骨水泥。测试了复合骨水泥的初凝、终凝时间,反应过程温度变化以及模拟体液中浸泡1 d和7 d后的抗压强度。四唑盐比色实验测试了骨水泥的细胞毒性。结果与结论:将胶原肽加入磷酸镁骨水泥中制得了磷酸镁/胶原肽复合骨水泥材料。胶原肽的含量影响了复合骨水泥的理化和生物性质。胶原肽含量的增加延长了复合骨水泥材料的初凝和终凝时间,降低了复合骨水泥水化固化过程中的最高温度,延后了出现最高温度的时间。磷酸镁骨水泥以及复合骨水泥的水化固化产物都是MgKPO4·6H2O。上述实验结果表明胶原肽对复合骨水泥具有良好的缓凝作用,不改变固化产物的物相。机械性质的实验结果表明适量的胶原肽能够提高复合骨水泥的抗压强度,但进一步提高胶原肽的含量会降低复合骨水泥的抗压强度。同时试样在模拟体液中静置时间也对骨水泥的抗压强度具有明显的影响。四唑盐比色实验结果表明胶原肽的加入进一步促进了MC3T3-E1细胞和L929细胞的增殖。结果为推动磷酸镁/胶原肽复合骨水泥在临床中应用提供了技术依据。

关键词：镁化合物生物相容性材料组织工程骨水泥鸟粪石多肽胶原肽缓凝作用抗压强度细胞毒性生物材料

人Toll样受体4基因5'远端增强子样区定位及反式作用因子鉴定

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解放军医学杂志 2012年第5期37卷 394-399页

作者：彭建亮冯凯路浩军张军郑燕华景青萍安徽医科大学解放军306临床学院北京100101

目的对人Toll样受体4(TLR4)基因5'远端增强子样区进行定位,并鉴定参与其转录调控的反式作用因子。方法采用PCR克隆方法,将TLR4基因5'旁侧-1337^-683序列及其缺失片段与荧光素酶报告基因载体pGL-3-promoter进行重组,构建pGL-3--1337^-683... 详细信息

目的对人Toll样受体4(TLR4)基因5'远端增强子样区进行定位,并鉴定参与其转录调控的反式作用因子。方法采用PCR克隆方法,将TLR4基因5'旁侧-1337^-683序列及其缺失片段与荧光素酶报告基因载体pGL-3-promoter进行重组,构建pGL-3--1337^-683-promoter重组质粒及其系列缺失质粒。将构建成功的质粒转染入人白血病K562细胞,检测各质粒的荧光素酶活性,根据缺失序列对荧光素酶活性的影响来确定TLR4基因5'远端增强子样区的位置。采用转录因子数据库检索和电泳迁移率实验(EMSA)两种方法对TLR4基因5'远端增强子样区反式作用因子进行鉴定。结果 TLR4基因5'远端增强子样区位于-923～-679的245bp范围内,并再细化为-923～-742和-721～-679两个功能单元。EMSA和转录因子数据库检索证实激活蛋白-1(AP1)是与-721～-679功能单元结合的转录因子,淋巴增强因子-1(LEF-1)可能是与该功能单元结合的另一个转录因子。结论 TLR4基因5'远端增强子样区中的一个功能单元定位在-721～-679的43bp片段中,AP1是与该区域结合的反式作用因子,可能与LEF-1共同起到转录增强作用。

关键词： Toll样受体4 反式激活因子类增强子元件(遗传学) 脓毒症

淋巴毒素A基因多态性与慢性阻塞性肺疾病并发骨质疏松的关系

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解放军医学杂志 2010年第8期35卷 1007-1009,1015页

作者：赵燕冯凯彭文鸿路浩军王萍李成林解放军第306医院普通外科北京100101 解放军第306医院中心实验室北京100101 解放军第306医院呼吸内科北京100101

目的探讨淋巴毒素A(LTA)基因多态性与北方汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)并发症骨质疏松的关系。方法收集2007年6-12月因COPD急性加重收住院治疗的122例COPD患者,在排除慢性肾功能不全以及甲状腺、甲状旁腺等疾病后,最后纳入101例COPD... 详细信息

目的探讨淋巴毒素A(LTA)基因多态性与北方汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)并发症骨质疏松的关系。方法收集2007年6-12月因COPD急性加重收住院治疗的122例COPD患者,在排除慢性肾功能不全以及甲状腺、甲状旁腺等疾病后,最后纳入101例COPD患者作为研究对象。采用双能X线骨密度测定仪测定患者的腰椎及股骨近端骨密度,根据骨密度情况将患者分为骨质疏松组(n=67)和非骨质疏松组(n=34)。以PCR直接测序法检测两组患者的6个LTA基因的tSNP位点(rs2844482,rs2071590,rs2239704,rs909253,rs2229094,rs1041981)的基因型分布,用χ2检验进行Hardy-Weinberg平衡检验,用非条件logistic回归模型计算比值比及95%可信区间,比较两组的差异。结果骨质疏松与非骨质疏松COPD患者LTA基因6个SNP位点的基因型分布频率均无显著性差异(P>0.05)。结论 LTA基因多态性与COPD并发骨质疏松可能无相关性。

关键词：淋巴毒素A 肺疾病,慢性阻塞性骨质疏松多态性,单核苷酸

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MUC1黏蛋白模拟表位的筛选和原核表达

第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1154-1156页

作者：崔志刚宋波张立新路浩军李春海第三军医大学西南医院全军泌尿外科中心重庆400038 军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物学实验室北京100850

目的从噬菌体随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位,构建MUC1模拟表位的原核表达载体。方法通过生物淘洗、基因测序和氨基酸序列比较,筛选出模拟表位,构建重组表达质粒PET-31b(+),用IPTG诱导表达,亲和层析纯化,W estern b lot鉴定其抗... 详细信息

目的从噬菌体随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位,构建MUC1模拟表位的原核表达载体。方法通过生物淘洗、基因测序和氨基酸序列比较,筛选出模拟表位,构建重组表达质粒PET-31b(+),用IPTG诱导表达,亲和层析纯化,W estern b lot鉴定其抗原性。结果筛选到的模拟表位与MUC1单克隆抗体的亲和力较强。成功构建了重组表达质粒,重组蛋白在BL21(DE3)p lysS中得到诱导表达,纯化的目的蛋白在SDS-PAGE上呈现特异的单一条带,W estern印迹也检测到目的蛋白特异条带。结论筛选到了MUC1的模拟表位,成功表达和纯化了MUC1模拟表位蛋白,为研究其在肿瘤疫苗方面的应用奠定基础。

关键词： MUC1 噬菌体表面展示模拟表位克隆表达

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MUC1黏蛋白模拟表位的筛选和鉴定

免疫学杂志 2006年第2期22卷 210-212页

作者：崔志刚宋波张立新路浩军李春海第三军医大学西南医院泌尿外科重庆400038 军事医学科学院附属医院肿瘤分子生物学实验室北京100850

目的从噬菌体表面展示的随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位。方法通过生物淘洗,获得阳性噬菌体克隆,通过基因测序,推导氨基酸序列,同MUC1核心序列比较,选出2个模拟表位,进行抗原表位预测和竞争抑制实验。结果筛选到的两个模拟表位与... 详细信息

目的从噬菌体表面展示的随机12肽库中筛选出MUC1抗原的模拟表位。方法通过生物淘洗,获得阳性噬菌体克隆,通过基因测序,推导氨基酸序列,同MUC1核心序列比较,选出2个模拟表位,进行抗原表位预测和竞争抑制实验。结果筛选到的两个模拟表位与MUC1单克隆抗体的亲和力均较强,能特异性抑制MUC1的抗原抗体结合,且包含有与某些MHCⅠ类分子较好结合的位点。结论从噬菌体12肽库中筛选出两个MUC1的模拟表位可以作为靶向MUC1肿瘤疫苗的候选肽。

关键词： MUC1 噬菌体表面展示模拟表位