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B7-H1协同刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抑制性T细胞

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中国免疫学杂志 2007年第8期23卷 680-683,687页

作者：辛利军焦志军丁庆路丽明周芸周光炎上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

目的:探讨B7-H1分子在抗原诱导的免疫反应中的作用。方法:在可溶性抗原PPD诱导淋巴细胞增殖体系中,加入中和抗体检测B7-H1的协同刺激作用。转染表达B7-H1的ECV304细胞,观测其对PPD诱导的淋巴细胞增殖、细胞因子分泌及淋巴细胞亚群比例... 详细信息

目的:探讨B7-H1分子在抗原诱导的免疫反应中的作用。方法:在可溶性抗原PPD诱导淋巴细胞增殖体系中,加入中和抗体检测B7-H1的协同刺激作用。转染表达B7-H1的ECV304细胞,观测其对PPD诱导的淋巴细胞增殖、细胞因子分泌及淋巴细胞亚群比例的影响。将刺激后的淋巴细胞过继至自体或同种异体增殖体系中,检测其功能。结果:抗B7-H1中和抗体可降低PPD诱导的淋巴细胞增殖反应和细胞因子分泌;转染B7-H1的ECV304细胞可协同刺激抗原诱导的淋巴细胞增殖,促进细胞因子IL-10的表达,并改变T细胞亚群分布,增加CD4+T细胞亚群比例;自体或同种异体过继实验显示,B7-H1刺激后的淋巴细胞具有显著的免疫抑制功能。结论:B7-H1分子可协同刺激淋巴细胞增殖并诱导产生具有免疫抑制功能的T细胞亚群。

关键词： B7-H1 淋巴细胞增殖 IL-10 免疫抑制

H2O2抑制小鼠肾小管上皮细胞Klotho的表达

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中华肾脏病杂志 2015年第8期31卷 598-603页

作者：沈玥严玉澄路丽明钱盈盈关雪晶倪兆慧钱家麒上海交通大学医学院附属仁济医院肾脏科 200127 上海市免疫学研究所 200127

目的研究过氧化氢（H2O2）引起的氧化应激损伤对小鼠肾小管上皮细胞（TCMK-1）Klotho蛋白表达的影响及可能的作用机制.方法体外培养TCMK-1细胞,以不同浓度的H2O2刺激细胞,采用流式细胞术检测活性氧族（ROS）生成;CCK-8检测细胞生存率... 详细信息

目的研究过氧化氢（H2O2）引起的氧化应激损伤对小鼠肾小管上皮细胞（TCMK-1）Klotho蛋白表达的影响及可能的作用机制.方法体外培养TCMK-1细胞,以不同浓度的H2O2刺激细胞,采用流式细胞术检测活性氧族（ROS）生成;CCK-8检测细胞生存率;流式细胞术和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western印迹法检测Klotho蛋白、细胞凋亡相关蛋白和抗氧化酶的表达.结果与正常对照组比较,H2O2刺激后TCMK-1细胞内ROS水平升高（均P＜ 0.05）,抗氧化酶锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,SOD2）和过氧化氢酶（catalase,CAT）表达水平降低（均P＜0.05）;Klotho蛋白的表达水平降低（均P＜0.05）;TCMK-1细胞生存率显著降低（均P＜0.05）,且呈剂量依赖（0.3～0.9 mmol/L H2O2）;TCMK-1凋亡细胞比例呈剂量依赖性增加（均P＜ 0.05）;Bax/Bcl-2表达比升高,JNK、p38蛋白磷酸化水平均升高（均P＜ 0.05）.结论 H2O2刺激TCMK-1细胞诱导氧化应激损伤,抑制Klotho蛋白的表达,而Klotho表达下降伴随着细胞凋亡的增加和p38、JNK通路的活化.

关键词：氧化性应激细胞凋亡丝裂原激活蛋白激酶 Klotho

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人可溶性TRAIL基因的克隆及表达

上海免疫学杂志 2002年第5期22卷 308-312,292页

作者：路丽明李宁丽沈佰华余奇文刘莉莉张冬青周光炎上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

为了利用大肠杆菌表达人可溶性肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体 (TRAIL )蛋白 ,应用RT PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增人可溶性TRAIL蛋白cDNA ,克隆入PCR2 1 载体 ,测序验证后用基因重组法分别构建了人可溶性TRAIL蛋白的... 详细信息

为了利用大肠杆菌表达人可溶性肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体 (TRAIL )蛋白 ,应用RT PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增人可溶性TRAIL蛋白cDNA ,克隆入PCR2 1 载体 ,测序验证后用基因重组法分别构建了人可溶性TRAIL蛋白的真核与原核表达质粒载体。将重组质粒分别转入COS 7和大肠杆菌M1 5中表达。用流式细胞仪检测人可溶性TRAIL蛋白在COS 7细胞中的瞬时表达 ,用SDS PAGE电泳和Westernblot鉴定大肠杆菌中的表达产物。所表达融合蛋白为人可溶性TRAIL蛋白分子 ,相对分子质量为 2 1 0 0 0 ,表达量约为 2mg/ml。所表达的人可溶性TRAIL蛋白具有诱导HL 60细胞凋亡的作用。上述结果提示大肠杆菌可良好表达具有生物活性的人可溶性TRAIL蛋白 ,为深入研究TRAIL分子在肿瘤与自身免疫性疾病中的可能应用提供了材料。

关键词：克隆人可溶性TRAIL蛋白融合蛋白大肠杆菌表达基因凋亡调节蛋白

天花粉蛋白合成肽通过诱导CD8抑制性T细胞治疗实验性自身反应性脑脊髓炎

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现代免疫学 2008年第3期28卷 199-202页

作者：杨能史桂英路丽明周芸马妍慧周光炎上海交通大学医学院上海市免疫学研究所上海交通大学医学院细胞生物学教研室上海200025

为了探讨天花粉蛋白合成肽(M-Tk)治疗实验性自身反应性脑脊髓炎(EAE)的可能性及其作用机制,应用自身抗原MBP衍生肽MOG35-55免疫C57BL/6小鼠成功地诱发EAE后,以流式细胞术测定小鼠淋巴结细胞及脾细胞T亚群及细胞因子的表达,并通过临床评... 详细信息

为了探讨天花粉蛋白合成肽(M-Tk)治疗实验性自身反应性脑脊髓炎(EAE)的可能性及其作用机制,应用自身抗原MBP衍生肽MOG35-55免疫C57BL/6小鼠成功地诱发EAE后,以流式细胞术测定小鼠淋巴结细胞及脾细胞T亚群及细胞因子的表达,并通过临床评分观察M-Tk治疗EAE的有效性,包括以HE和LFB染色观察髓鞘病变。结果发现,M-Tk可抑制MOG35-55特异性T细胞的增殖反应,选择性诱导CD8+CD28-T调节细胞的扩增,明显提高IL-10的分泌和降低IFN-γ的产生,并有效改善EAE小鼠神经功能评分。采用M-Tk诱导的CD8 T细胞作体内输注可取得相似甚至更好的治疗效果(P>0.01)。提示M-Tk在体内诱导产生CD8+CD28-抑制性T细胞并上调IL-10分泌降低IFN-γ产生,是对EAE取得疗效的关键。

关键词：天花粉蛋白实验性变态反应性脑脊髓炎 CD8+CD28-调节性T细胞

混合培养的供、受者骨髓细胞过继回输延长小鼠移植心脏存活时间

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中华器官移植杂志 2009年第10期30卷 604-607页

作者：王慧杨能周佩军邵琨赵菊平徐达王祥慧沈周俊路丽明刘世雄浙江省台州市中心医院泌尿外科 318000 上海交通大学医学院附属瑞金医院泌尿外科上海市免疫学研究所

目的将供、受者骨髓细胞经混合培养后过继回输，以观察其对同种异体移植心脏存活时间和受者免疫功能的影响。方法取Balb／c小鼠和C57BL／6J小鼠的骨髓细胞，进行混合培养。配制含Balb／c小鼠和C57BL／6J小鼠脾淋巴细胞的混合淋巴细胞反... 详细信息

目的将供、受者骨髓细胞经混合培养后过继回输，以观察其对同种异体移植心脏存活时间和受者免疫功能的影响。方法取Balb／c小鼠和C57BL／6J小鼠的骨髓细胞，进行混合培养。配制含Balb／c小鼠和C57BL／6J小鼠脾淋巴细胞的混合淋巴细胞反应体系（MLR）以及含Balb／c小鼠和C3H小鼠脾淋巴细胞的MLR，分别加入混合培养的骨髓细胞，观察其对MLR中细胞增殖的影响。以C57BL／6J小鼠为供者，Balb／c小鼠为受者行腹腔异位心脏移植，实验分为4组：（1）移植对照组，受者仅进行心脏移植，不作其他处理；（2）实验对照组，心脏移植后给予西罗莫司灌胃；（3）实验组，移植手术结束前注射混合培养的骨髓细胞1×10^7个，术后给予西罗莫司；（4）第三方对照纽，受者接受C3H小鼠的移植心脏，手术结束前注射混合培养的骨髓细胞1×10^7个，术后给予西罗莫司。记录移植心脏存活时间；移植心脏停跳当日，取受者外周血，检测CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞的比例及供者来源的H-2K“细胞的比例。结果加入混合培养的骨髓细胞后，Balb／c和C57BL／6J的MLR的淋巴细胞增殖率低于Balb／c和C3H的MLR。实验组移植心脏的存活时间长于其他3组（P〈0．05）。实验组CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞的百分率高于其他3组（P〈0．05）。实验组外周血中H2K^6细胞的比例高于其他3组（P〈0．05）。结论受者输注混合培养的供、受者骨髓细胞可在一定程度上调节免疫应答，延长小鼠移植心脏的存活时间，该作用具有供者抗原特异性。

关键词：器官移植骨髓移植免疫调节调节性T细胞

重组人可溶性TRAIL分子诱导细胞凋亡机理探讨

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上海第二医科大学学报 2003年第1期23卷 10-14页

作者：李宁丽路丽明沈佰华刘莉莉王利余奇文张冬青上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

目的探讨重组人可溶性TRAIL蛋白(rhsTRAIL)诱导细胞凋亡的机理。方法应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡;流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局,荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。结果100ng/m... 详细信息

目的探讨重组人可溶性TRAIL蛋白(rhsTRAIL)诱导细胞凋亡的机理。方法应用DNA染料和流式细胞仪定性分别检测rhsTRAIL诱导的细胞凋亡;流式细胞仪检测靶细胞膜表面TRAIL受体表达格局,荧光定量法检测凋亡细胞中Caspase-3活性。结果100ng/ml人可溶性TRAIL蛋白分子对外周血淋巴细胞无明显毒性,但可诱导肿瘤细胞凋亡,不同的肿瘤细胞凋亡率有差异,凋亡范围在26％-57％。不同细胞表面TRAIL受体表达量不同,外周血淋巴细胞的死亡受体DR4、DR5受体表达5％,而诱骗受体DcRl表达55％,相反肿瘤细胞上的DR4、DR5表达高(40％-88％),而DcRI表达很低(8％-17％)。rhsTRAIL诱导HL-60细胞发生凋亡,其细胞内Caspase-3活性增高。ActD可增加TRAIL抑制细胞生长活性。结论重组人可溶性TRAIL蛋白分子可诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡活性TRAIL受体类型及Caspase-3活性增高有关。

关键词：人可溶性TRAIL蛋白细胞凋亡 Caspase-3 诱骗受体死亡受体

补体相关性肾病人群中脑膜炎球菌疫苗和补体抑制剂联用的专家共识

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慢性病学杂志 2023年第8期 1156-1159页

作者：时念民李林康邵祝军张文宏吴疆吕敏郑佳音陈直平刘晓强张宏谭颖刘小荣赵明辉罗哲吕继成路丽明北京生物制品研究会北京101108 罕见病联盟中国疾病控制中心传染病预防控制所国家传染病医学中心北京市疾病预防控制中心浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310057 云南省疾病预防控制中心疫苗临床研究中心云南昆明650034 北京大学肾脏病研究所北京大学第一医院首都医科大学附属北京儿童医院复旦大学附属中山医院上海200032 上海交通大学附属胸科医院

补体相关性肾病人群是指有补体参与的肾脏疾病人群。当补体系统受到抑制时,会导致脑膜炎球菌感染风险增加。在使用补体抑制剂治疗前,患者需接种覆盖常见致病血清群的脑膜炎球菌疫苗,以降低感染风险。本共识基于国内外现有的研究资料,介... 详细信息

补体相关性肾病人群是指有补体参与的肾脏疾病人群。当补体系统受到抑制时,会导致脑膜炎球菌感染风险增加。在使用补体抑制剂治疗前,患者需接种覆盖常见致病血清群的脑膜炎球菌疫苗,以降低感染风险。本共识基于国内外现有的研究资料,介绍了补体相关肾病以及补体抑制剂研究的进展、脑膜炎球菌疫苗和补体抑制剂联用的有效性和安全性、脑膜炎球菌疫苗和补体抑制剂联用尚需解决的问题和建议等,旨在探讨我国已上市脑膜炎球菌疫苗和补体抑制剂联用合规路径,以此推动实践,早日惠及患者。

关键词：补体相关性肾病人群补体抑制剂脑膜炎球菌疫苗联用合规路径

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无血预充大鼠体外循环模型的建立

中国体外循环杂志 2018年第3期16卷 184-188页

作者：李健郭震路丽明李欣上海交通大学附属胸科医院心外科上海200030 上海交通大学附属胸科医院体外循环室上海200030 上海交通大学医学院上海市免疫研究所上海200030 复旦大学附属中山医院心外科上海200030

目的建立稳定可重复的无血预充大鼠体外循环模型。方法 15只成年雄性SD大鼠,水合氯醛腹腔麻醉,14 G套管针行气管插管,呼吸机维持通气;自制前端带侧孔16 G套管针穿刺右颈外静脉置管作静脉引流,20 G、24 G、24 G套管针分别穿刺右颈总动脉... 详细信息

目的建立稳定可重复的无血预充大鼠体外循环模型。方法 15只成年雄性SD大鼠,水合氯醛腹腔麻醉,14 G套管针行气管插管,呼吸机维持通气;自制前端带侧孔16 G套管针穿刺右颈外静脉置管作静脉引流,20 G、24 G、24 G套管针分别穿刺右颈总动脉、左股动脉、左股静脉置管作动脉灌注、血压监测、静脉补液。采用无血预充,自体血液经小动物膜式氧合器进行气体交换,维持体外循环60 min。监测体外循环开始前、过程中、结束后的血流动力学并进行血气分析。结果连续15只大鼠建立模型过程中,头3只外科操作失败死亡,后12只大鼠体外循环模型成功建立,体外循环中及停机后生命体征稳定,存活时间超过1天。结论成功建立无血预充大鼠体外循环微创模型,为进一步探究体外循环相关损伤机制和保护措施提供了可靠动物平台。

关键词：体外循环动物模型大鼠

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SD大鼠星形胶质细胞的原代培养

中华神经医学杂志 2003年第5期2卷 346-347,355页

作者：周洪语路丽明沈建康罗其中上海第二医科大学附属瑞金医院上海200025 上海组织工程研究与开发中心上海200235 上海第二医科大学附属仁济医院上海200001

目的设计原代培养SD大鼠星形胶质细胞。方法取新生第2～3d SD红皮鼠,无菌操作下取大脑皮质,剪碎、胰酶消化结合机械吹打使细胞分散,网筛过滤,差速粘附处理去除成纤维细胞,将未粘附的细胞悬液接种培养9～12d,置摇床,舍弃含脱落细胞的细... 详细信息

目的设计原代培养SD大鼠星形胶质细胞。方法取新生第2～3d SD红皮鼠,无菌操作下取大脑皮质,剪碎、胰酶消化结合机械吹打使细胞分散,网筛过滤,差速粘附处理去除成纤维细胞,将未粘附的细胞悬液接种培养9～12d,置摇床,舍弃含脱落细胞的细胞悬液,以去除少突胶质细胞和小胶质细胞。细胞传代,GFAP免疫组化染色鉴定。结果成功分离培养了原代神经胶质细胞,并进行了星形胶质细胞的纯化,GFAP鉴定星形胶质细胞比例为95％以上。结论建立星形胶质细胞体外培养方法,总结操作关键,以此为实验材料对于比较学研究是非常有帮助的。

关键词： SD 大鼠星形胶质细胞原代培养胶质瘤