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人肝癌p57kip2启动子区甲基化及基因组不稳定性与mRNA和蛋白表达关系研究

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人肝癌p57kip2启动子区甲基化及基因组不稳定性与mRNA和蛋白表达...

作者：赵继智昆明医学院

学位级别：硕士

目的:为阐明p57基因异常与人肝细胞癌(Hepatocellular careinoma,HCC)发生发展的关系,本文从mRNA及蛋白质水平检测肝癌组织中p57基因的表达;并从基因结构分析肝癌组织中p57基因的杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)、微卫星不稳定... 详细信息

目的:为阐明p57基因异常与人肝细胞癌(Hepatocellular careinoma,HCC)发生发展的关系,本文从mRNA及蛋白质水平检测肝癌组织中p57基因的表达;并从基因结构分析肝癌组织中p57基因的杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)、微卫星不稳定性(Microsatelliteinstability,MSI)及甲基化状况,进而探讨其间的相互关系,以评价p57基因异常在肝癌发生及演进过程中作用与地位。方法:选取正常肝组织、癌周肝组织和肝细胞肝癌组织各30例,采用原位杂交和免疫组化技术,分别检测p57基因mRNA的表达状况和p57蛋白的表达水平的改变。对p57所在染色体11p15.5区域的二个微卫星位点(D11S2351和D115569)运用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行杂合性缺失和微卫星不稳定性的检测。应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)对p57启动子区CpG岛进行甲基化分析。对p57mRNA、蛋白表达和甲基化之间的关系进行分析。结果:1.原位分子杂交技术显示:正常肝组织组未见表达,癌周肝组织组与肝癌组阳性表达率均为26.7%(8/30)。p57mRNA在不同分化程度的肝癌中的阳性表达率分别为高分化组0%,中分化组20.8%,低分化组60%。p57mRNA表达在正常组与癌周肝组织组,正常肝组织组与肝癌组之间比较差异有统计学意义。癌周肝组织组与肝癌组比较差异无统计学意义。高、中和低分化三组不同分化程度的肝癌之间p57mRNA表达差异有统计学意义。 2.免疫组织化学法显示:正常肝组织组未见表达,癌周肝组织组与肝癌组阳性表达率均为56.67%(17/30)。p57蛋白表达在正常组与癌周肝组织组,正常组与肝癌组之间比较差异有统计学意义。癌周肝组织组与肝癌组比较差异无统计学意义。p57蛋白在不同分化程度的肝癌中的阳性表达率分别为高分化组0%,中分化组54.1%,低分化组80%,p57蛋白的表达在不同分化程度的肝癌之间差异有统计学意义。 3.采用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果:在30例肝癌组织标本中,仅在D11S569位点检测到1例杂合性缺失,在D11S2351和D11S569两个位点上共检测到4例微卫星不稳定,其中肝癌组微卫星位点D11S2351发生MSI与p57mRNA表达有正相关性但无生物学意义,与p57蛋白表达呈负相关性有生物学意义。 ***检测结果:在30例肝癌组织标本中检测到6例p57启动子甲基化,其p57启动子区甲基化与p57mRNA和蛋白表达异常没有关联性。结论:1.p57mRNA和蛋白表达异常提示p57在原发性肝癌发生发展过程中可能不具有肿瘤抑制基因特性。 2.与p57基因同一区域2个微卫星位点(D11S2351和D11S569)不是p57基因LOH和MSI的频发位点。 ***和MSI可能不是导致p57mRNA和蛋白表达异常的原因。 4.甲基化也不是导致p57mRNA和蛋白表达异常的原因。

关键词：肝细胞癌甲基化 p57kip2基因杂合性缺失微卫星不稳定

IL-12增强CIK细胞对食管癌EC9706细胞的杀伤活性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2013年第2期20卷 197-200页

作者：梅家转刘桂举张晓娟赵继智郑州人民医院肿瘤内科河南郑州450003

目的:探讨IL-12对细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞的表型和CIK细胞在体外对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响。方法:体外分离人外周血单个核细胞,分为两组:对照组以IFN-γ、IL-2和CD3单抗诱导培养CIK细胞;IL-12组... 详细信息

目的:探讨IL-12对细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞的表型和CIK细胞在体外对食管癌EC9706细胞杀伤活性的影响。方法:体外分离人外周血单个核细胞,分为两组:对照组以IFN-γ、IL-2和CD3单抗诱导培养CIK细胞;IL-12组在对照组基础上加用IL-12培养。培养至第14天,流式细胞仪检测两组CIK细胞的免疫表型;LDH释放法测定效靶比20∶1、30∶1时两组CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性;观察效靶比30∶1时,NKG2D单抗对两组CIK细胞杀伤活性的影响。结果:IL-12组与对照组相比较,CIK细胞免疫表型的CD3+CD56+细胞比例[(28.23±1.71)%vs(16.34±0.59)%,P0.05)]。效靶比20∶1和30∶1时,IL-12组CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性均较对照组明显增强[(43.92±1.67)%vs(35.34±1.22)%,(55.95±0.88)%vs(43.91±1.10)%;均P<0.05];以NKG2D单抗阻断后,IL-12组、对照组CIK细胞杀伤活性均明显下降[(19.72±0.56)%vs(55.95±0.88)%,(19.83±1.20)%vs(43.91±1.10)%;均P<0.05]。结论:IL-12能够上调CIK细胞NKG2D和穿孔素的表达,从而增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性。

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞 NKG2D 食管癌 IL-12

厄洛替尼增强肺腺癌A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性

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中国肿瘤临床 2013年第11期40卷 617-620页

作者：刘桂举梅家转张晓娟赵继智冯睿婷郑州人民医院肿瘤内科郑州市450003

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及CIK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:流式细胞仪检测厄洛替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3K抑制剂)、SB203580(MAPK抑制剂)、STAT21(STAT3抑... 详细信息

目的:研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼对人肺腺癌A549细胞NKG2D配体表达及CIK细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法:流式细胞仪检测厄洛替尼、EGFR下游分子LY294002(PI3K抑制剂)、SB203580(MAPK抑制剂)、STAT21(STAT3抑制剂)作用A549细胞24 h后A549细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法测定不同效靶比时,CIK细胞对10μmol/L厄洛替尼作用前、后A549细胞的杀伤活性。结果:厄洛替尼下调A549细胞MICA表达,上调MICB、ULBP1表达,EGFR下游分子MAPK、STAT3抑制剂不影响A549细胞NKG2D配体的表达,PI3-K抑制剂下调A549细胞MICA表达,厄洛替尼增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。结论:EGFR TKI抗肺癌作用与其增强肺癌细胞对免疫细胞杀伤的敏感性有关。

关键词：肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂细胞因子诱导杀伤细胞 NKG2D配体

顺铂和紫杉醇对CIK细胞杀伤食管癌细胞活性的影响及其分子机制研究

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中国肿瘤临床 2015年第12期42卷 608-613页

作者：梅家转徐虹刘桂举赵继智郑州人民医院肿瘤内科郑州市450003

目的:研究紫杉醇、顺铂对人食管癌EC9706细胞NKG2D配体表达及CIK细胞杀伤活性的影响,探讨相关分子机制。方法:MTT法测定紫杉醇、顺铂对EC9706细胞的24 h半数抑制浓度(IC50)。流式细胞仪检测1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用前、后EC9706细... 详细信息

目的:研究紫杉醇、顺铂对人食管癌EC9706细胞NKG2D配体表达及CIK细胞杀伤活性的影响,探讨相关分子机制。方法:MTT法测定紫杉醇、顺铂对EC9706细胞的24 h半数抑制浓度(IC50)。流式细胞仪检测1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用前、后EC9706细胞NKG2D配体的表达。乳酸脱氢酶释放法检测效靶比20:1、30:1时,CIK细胞对1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用前、后EC9706细胞的杀伤活性。荧光定量PCR法检测1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用EC9706细胞24 h前、后DNA损伤修复基因(ATM、ATR、CHK1、CHK2、P53)表达的变化。结果:紫杉醇、顺铂的24 h半数抑制浓度分别为10、5μg/m L。1/2 IC50浓度紫杉醇作用24 h后,EC9706细胞MICB、ULBP2、ULBP3表达均明显增强(P0.05);1/2 IC50浓度顺铂作用24 h后,EC9706细胞MICA、MICB、ULBP2、ULBP3表达均明显增强(P0.05)。效靶比20:1、30:1时,CIK细胞对1/2 IC50浓度紫杉醇、顺铂作用后的EC9706细胞的杀伤活性均明显增强(P0.05);1/2 IC50浓度顺铂作用24 h后,ATM、ATR、CHK1、CHK2基因表达均明显增加(P0.05)。结论:顺铂、紫杉醇均可增强CIK细胞的杀伤活性,其分子机制可能与激活DNA损伤修复基因,进而增加NKG2D配体表达有关。

关键词：食管癌紫杉醇顺铂细胞因子诱导的杀伤细胞 NKG2D配体 DNA损伤修复基因

顺铂与CIK细胞对A549细胞杀伤协同作用机制的初步研究

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中华肿瘤防治杂志 2013年第16期20卷 1229-1231页

作者：张晓娟梅家转赵继智冯睿婷刘桂举郑州人民医院肿瘤内科河南郑州450003

目的:探讨不同浓度顺铂作用人肺腺癌A549细胞24h后,NKG2D配体表达的改变及细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的变化。方法:MTT法测定顺铂作用A549细胞24h的50%抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测IC50、1/2IC50和1/4IC50浓度顺铂分别作用A... 详细信息

目的:探讨不同浓度顺铂作用人肺腺癌A549细胞24h后,NKG2D配体表达的改变及细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的变化。方法:MTT法测定顺铂作用A549细胞24h的50%抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测IC50、1/2IC50和1/4IC50浓度顺铂分别作用A549细胞24h后,A549细胞表面NKG2D配体表达的变化,配体包括MHC-I类链相关分子MICA和MICB以及人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白ULBP1、ULBP2和ULBP3;乳酸脱氢酶释放法检测不同效靶比时,CIK细胞对IC50浓度的顺铂作用前及作用24h后A549细胞的杀伤活性。结果:不同浓度顺铂作用24h后,A549细胞表面MICA(F=12.490,P=0.002)、MICB(F=41.492,P<0.001)、ULBP2(F=375.773,P<0.001)和ULBP3(F=59.594,P<0.001)表达均显著升高;ULBP1表达降低,F=55.693,P<0.001。效靶比10∶1时,IC50浓度顺铂作用24h前、后的A549细胞的杀伤活性分别为(11.88±1.57)%和(17.64±1.44)%,F=21.770,P=0.010;20∶1时分别为(35.56±1.98)%和(46.39±3.51)%,F=21.653,P=0.010;30∶1时分别为(45.03±1.74)%和(73.81±1.62)%,F=439.578,P<0.001。结论:顺铂提高A549细胞NKG2D配体MICA、MICB、ULBP2和ULBP3的表达,增强A549细胞对CIK细胞杀伤的敏感性。

关键词：肺癌顺铂细胞因子诱导的杀伤细胞 NKG2D配体化疗

BDNF对食管癌细胞株ECa9706体外侵袭能力的影响

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世界华人消化杂志 2015年第8期23卷 1218-1223页

作者：冯睿婷梅家转栗敏赵继智白桦刘桂举郑州人民医院肿瘤内科河南省郑州市450003

目的:本研究观察脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对食管癌细胞株ECa9706体外增殖和迁移能力的影响以及机制.方法:采用MTT和Transwell方法分别观察BDNF以及酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,Trk B)抑制剂K252a对ECa9706细胞增殖和迁移能力的影响,采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q PCR)和Western blot方法分别检测ECa9706细胞中Trk B和磷脂酶C(phospholipase C,PLC)-γ1的m RNA和蛋白表达水平.结果:BDNF可显著促进ECa9706细胞增殖和迁移能力,该作用可被K252a拮抗.与对照组相比,BDNF可诱导Trk B的m RNA和蛋白表达显著增加,并提高PLC-γ1的蛋白表达水平.结论:BDNF/Trk B/PLC-γ1在食管癌细胞迁移浸润中具有重要作用.

关键词：脑源性神经营养因子食管癌增殖迁移

HER2阳性乳腺癌组织中MICA/B的表达及其临床意义

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第5期24卷 544-546页

作者：李景艳梅家转赵继智刘桂举南方医科大学附属郑州人民医院肿瘤内科河南郑州450003

目的:通过检测MHC-Ⅰ类分子链相关蛋白A/B(MHC classⅠchain-related protein A/B,MICA/B)在HER2阳性乳腺癌组织中的表达水平,探讨其与患者临床病理特征的关系。方法:收集2009年1月至2010年6月在南方医科大学附属郑州人民医院乳腺外科... 详细信息

目的:通过检测MHC-Ⅰ类分子链相关蛋白A/B(MHC classⅠchain-related protein A/B,MICA/B)在HER2阳性乳腺癌组织中的表达水平,探讨其与患者临床病理特征的关系。方法:收集2009年1月至2010年6月在南方医科大学附属郑州人民医院乳腺外科手术切除的HER2阳性乳腺癌标本62例及其临床资料,免疫组化法检测乳腺癌组织中MICA/B的表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系。结果:MICA/B表达率为90.32%,高表达为64.52%。MICA/B的表达与患者的临床分期、ER、PR表达有关(均P0.05)。结论:MICA/B的表达可能与HER2阳性乳腺癌的发生发展有关,有望成为免疫治疗的新靶点。

关键词：人表皮生长因子受体2 MHC—I类分子链相关蛋白A/B 乳腺癌 NKG2D

可手术肺腺癌主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A和B的表达及临床意义

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中华医学杂志 2016年第26期96卷 2081-2085页

作者：赵继智梅家转宋玮刘桂举冯睿婷郑州人民医院肿瘤内科 450003 河南省人民医院呼吸内科

目的检测可手术肺腺癌组织中主要组织相容性复合体－Ⅰ类分子链相关蛋白A和B（MICA/B蛋白）的表达，探讨其临床意义。方法回顾分析郑州人民医院2002年1月至于2003年12月诊治的可手术肺腺癌100例。免疫组织化学染色法检测其MICA/B蛋白的... 详细信息

目的检测可手术肺腺癌组织中主要组织相容性复合体－Ⅰ类分子链相关蛋白A和B（MICA/B蛋白）的表达，探讨其临床意义。方法回顾分析郑州人民医院2002年1月至于2003年12月诊治的可手术肺腺癌100例。免疫组织化学染色法检测其MICA/B蛋白的表达，按照免疫组织化学染色评分标准≥5分者为高表达组，〈5分者为低表达组。运用χ2检验分析MICA/B蛋白与患者临床病理特征的关系。Kaplan－Meier生存曲线及Log－rank检验计算MICA/B蛋白表达与可手术肺腺癌总生存期之间的关系。采用Cox回归模型分析各个协变量单一及联合效应。结果MICA/B蛋白在可手术肺腺癌组织中的高表达率为38%（38/100）。MICA/B蛋白表达在EGFR基因突变组中的高表达率显著高于EGFR基因野生组（93.8%比11.8%，P〈0.001），而在患者不同年龄、性别、TNM分期、T分期、组织学分级及淋巴结转移之间差异均无统计学意义。MICA/B蛋白高表达组的总生存期显著短于低表达组（10.4比28.9个月，P＝0.005）。结论可手术肺腺癌组织中MICA/B蛋白高表达，与EGFR基因突变型及总生存期有密切关系，有可能是可手术肺腺癌患者预后不良的指标。

关键词：腺癌,细支气管肺泡基因,MHC Ⅰ类基因,erbB-1 预后

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乳腺癌患者肺部真菌感染的临床特点分析

中华医院感染学杂志 2014年第3期24卷 647-649页

作者：高方方梅家转李瑞君赵继智刘桂举郑州人民医院肿瘤内科河南郑州450003

目的分析乳腺癌患者肺部真菌感染的临床特点，为其临床预防治疗及抗菌药物使用提供理论指导。方法回顾性调查肿瘤内科2010年4月-2013年4月收治的295例乳腺癌患者，对其肺部真菌感染进行分析。结果295例患者中共发生肺部感染42例，感染... 详细信息

目的分析乳腺癌患者肺部真菌感染的临床特点，为其临床预防治疗及抗菌药物使用提供理论指导。方法回顾性调查肿瘤内科2010年4月-2013年4月收治的295例乳腺癌患者，对其肺部真菌感染进行分析。结果295例患者中共发生肺部感染42例，感染率14．24％；共检出真菌55株，以白色假丝酵母菌最多，占61．82％；患者肿瘤分期、白细胞（WBC）水平、抗菌药物应用时间长差异有统计学意义（P〈0．05），其与年龄、侵入性操作差异无统计学意义；多因素回归分析发现，肿瘤分期Ⅲ-Ⅳ期、WBC％2×10^9。／L及抗菌药物应用≥14d是导致乳腺癌患者肺部真菌感染的独立危险因素（P〈0．05）。结论乳腺癌患者肺部真菌感染以白色假丝酵母菌为主，而肿瘤分期Ⅲ～Ⅳ期、WBC〈2×10^9。／L及抗菌药物应用≥14d是导致其感染率增加的主要原因，应做好抗菌药物的使用及相关支持治疗，最大限度降低患者感染的发生，同时，应密切关注患者感染症状，做到早发现、早治疗，保证其生存率。

关键词：乳腺癌肺部真菌感染临床特点