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灵芝多糖拮抗黑素瘤细胞上清对同型小鼠淋巴细胞CD71及FasL抑制作用的研究

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灵芝多糖拮抗黑素瘤细胞上清对同型小鼠淋巴细胞CD71及FasL抑制作...

作者：赵红侠承德医学院

学位级别：硕士

目的:恶性肿瘤细胞产生的多种生物活性分子,抑制机体的免疫功能,构成肿瘤免疫逃逸的重要机制。灵芝多糖的抗肿瘤作用已被很多实验证实,灵芝多糖可增强细胞免疫和体液免疫。本实验用B16F10细胞上清加入不同浓度的灵芝多糖(0.2,0.8,3.2,1... 详细信息

目的:恶性肿瘤细胞产生的多种生物活性分子,抑制机体的免疫功能,构成肿瘤免疫逃逸的重要机制。灵芝多糖的抗肿瘤作用已被很多实验证实,灵芝多糖可增强细胞免疫和体液免疫。本实验用B16F10细胞上清加入不同浓度的灵芝多糖(0.2,0.8,3.2,12.8μg/ml),培养同型小鼠淋巴细胞,同时用以RPMI-1640培养液培养同型小鼠淋巴细胞作对照,通过免疫细胞化学染色和蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测小鼠淋巴细胞表面FasL的表达情况,用免疫荧光和流式细胞仪技术检测小鼠淋巴细胞表面CD71的表达情况来探讨灵芝多糖拮抗肿瘤细胞培养上清对淋巴细胞的抑制作用。材料及方法:1.细胞来源:本实验采用的B16F10细胞是一种来源于C57BL/6小鼠的高转移黑素瘤细胞系,淋巴细胞为新鲜制备的C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞。2.制备B16F10细胞培养上清(简称肿瘤上清):2× 105/ml B16F10细胞,接种于50ml培养瓶,每瓶10ml,培养至细胞长满80%时换液,继续培养8h,收集培养上清,0.22μm滤纸滤菌,分装,-20℃冻存备用。3.免疫细胞化学染色检测灵芝多糖拮抗肿瘤上清对淋巴细胞FasL表达的抑制作用实验:C57BL/6小鼠脾淋巴细胞培养于肿瘤上清或正常培养基中,1× 106细胞/孔,同时向培养于肿瘤上清中的脾淋巴细胞加入不同浓度的灵芝多糖,以不加灵芝多糖者为对照(肿瘤上清对照组),培养72小时,收集淋巴细胞,涂片,进行细胞免疫化学染色,显微镜观察结果,以胞浆染成棕色为阳性。*** blot检测灵芝多糖拮抗肿瘤上清对淋巴细胞FasL表达的抑制作用实验:小鼠脾淋巴细胞培养于肿瘤上清或正常培养基中,1 × 106细胞/孔,同时向培养于肿瘤上清中的脾淋巴细胞加入不同浓度的灵芝多糖,以不加灵芝多糖者为对照,培养72小时,收集淋巴细胞,提取蛋白,应用Western blot方法测定FasL的表达。5.免疫荧光技术检测灵芝多糖拮抗肿瘤上清对淋巴细胞CD71表达的抑制作用实验:小鼠脾淋巴细胞培养于肿瘤上清或正常培养基中,1× 106细胞/孔,同时向培养于肿瘤上清中的脾淋巴细胞加入不同浓度的灵芝多糖,以不加灵芝多糖者为对照,培养48小时,收集淋巴细胞,在荧光显微镜下观察淋巴细胞CD71表达,并照相记录。以显示红色荧光信号为阳性。6.流式细胞仪检测灵芝多糖拮抗肿瘤上清对淋巴细胞CD71表达的抑制作用实验:小鼠脾淋巴细胞培养于肿瘤上清或正常培养基中,1 × 106细胞/孔,同时向培养于肿瘤上清中的脾淋巴细胞加入不同浓度的灵芝多糖,以不加灵芝多糖者为对照(上清对照),培养48小时,收集淋巴细胞,应用流式细胞仪检测淋巴细胞CD71表达,全部数据经FACSCalibur流式细胞仪及Cell Quest软件获取和分析。7.数据统计分析:应用SPSS15.0统计学软件,对结果进行单因素方差分析,p<0.05表示差别有统计学意义。结果1 免疫细胞化学染色检测肿瘤上清对淋巴细胞FasL表达的抑制作用:在肿瘤上清作用下,PHA诱导后72h的同基因小鼠脾淋巴细胞FasL免疫细胞化学染色阳性程度低于RPMI 1640培养液对照组。2 Western blot检测肿瘤上清对淋巴细胞FasL表达的抑制作用:在肿瘤上清作用下,PHA诱导后72h的同基因小鼠脾淋巴细胞FasL的表达水平为0.524±0.208明显低于RPMI 1640培养液对照组的 1.054±0.171,差异有显著性(t=3.409,p<0.05)3 免疫荧光技术检测肿瘤上清对淋巴细胞CD71表达的抑制作用:在肿瘤上清作用下,PHA诱导后48h的同基因小鼠脾淋巴细胞CD71免疫荧光阳性程度低于RPMI 1640培养液对照组。4 流式细胞仪检测肿瘤上清对淋巴细胞CD71表达的抑制作用:在肿瘤上清作用下,PHA诱导后48h的同基因小鼠脾淋巴细胞CD71的表达水平为53.645± 1.280低于RPMI 1640培养液对照组的 60.108±1.469,差异有高度显著性(t=5.755,p<0.05)。5免疫细胞化学染色检测灵芝多糖拮抗肿瘤上清对淋巴细胞FasL表达的抑制作用:在不同浓度灵芝多糖作用下,肿瘤上清对PHA诱导后72h的同基因小鼠脾淋巴细胞FasL表达的抑制作用明显减低或消失,免疫细胞化学染色阳性程度明显高于未经灵芝多糖作用的肿瘤上清对照组。6 Western blot检测灵芝多糖拮抗肿瘤上清对淋巴细胞FasL表达的抑制作用:在不同浓度灵芝多糖(0.2μg/ml,0.8μg/ml,3.2μg/ml和12.8μg/ml)作用下,肿瘤上清对PHA诱导后72h的同基因小鼠脾淋巴细胞FasL表达的抑制作用明显减低或消失,FasL蛋白表达水平分别为 0.799±0.168、1.233±

关键词：灵芝多糖黑色素瘤脾淋巴细胞 FasL CD71

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电位滴定法测定近视乐滴眼液中总生物碱

理化检验（化学分册） 2009年第4期45卷 440-441,445页

作者：赵红侠尹德忠陕西诚信制药有限公司渭南715200 西北工业大学理学院西安710072

为克服近视乐滴眼液总生物碱高氯酸非水滴定中乙酸汞对环境的污染,提出了电位滴定法。以氢氧化钠为滴定液,一阶导数法确定终点,并与标准方法进行了比较。电位滴定法通过加入乙醇进行滴定,测定结果的精密度和准确度比非水滴定好。

关键词：电位滴定总生物碱滴眼液

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产后出血28例护理体会

陕西医学杂志 2002年第7期31卷 660-661页

作者：郑子琴赵红侠李海萍陕西省千阳县人民医院千阳721100

1 临床资料1999年1月至2001年12月我院共收住孕产妇1363例,发生产后出血28例.10例因产后出血急诊入院;18例为住院分娩产妇.

关键词：产后出血护理治疗

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亳州市蔬菜产业发展现状及对策

安徽农学通报 2018年第10期24卷 53-54页

作者：赵红侠涡阳县菜篮子工程办公室安徽涡阳233600

该文介绍了亳州市蔬菜产业发展现状、主要做法,针对目前存在问题提出了相应的发展对策。

关键词：蔬菜产业现状对策亳州市

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浅谈在物理教学中学生学习兴趣的培养

蒲白科技 2007年第1期 76-78,80页

作者：赵红侠蒲白矿务局教培中心

物理学习中．学生的学习兴趣至关重要，这里就如何培养学生的学习兴趣提出几点看法，与大家共同探讨。

关键词：趣味实验应用性教学情境

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新时期农村义务教育的思考与对策

新西部 2008年第8期 179-179页

作者：赵红侠陕西省凤翔县唐村乡中学

本文通过对现阶段新形势下农村教育状况、突出问题的分析,提出了应把农村教育作为一个战略性问题进行全局性的思考与对策,同时还从普及教育角度提出一些问题和建议,旨在以新的理念、方式让教育为新农村建设培养新式人才、为和谐社会做... 详细信息

本文通过对现阶段新形势下农村教育状况、突出问题的分析,提出了应把农村教育作为一个战略性问题进行全局性的思考与对策,同时还从普及教育角度提出一些问题和建议,旨在以新的理念、方式让教育为新农村建设培养新式人才、为和谐社会做出贡献。

关键词：新时期农村教育思考对策

奥运年发力DVM Plus Ⅲ引领行业先锋

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机电信息 2008年第7期 39-41页

作者：赵红侠

当时间刚刚跨越2008年的门槛，扑面而来奥运年的热情，似乎能够将冬日的冰雪也一并融化——几乎所有的人，都在期待着奥运年里的突破：股市的新高、奥运夺金的新高、经济发展的新高……

关键词：奥运 Plus DVM 行业经济发展股市

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中美称谓语差异的语用分析

重庆科技学院学报（社会科学版） 2012年第5期 147-149页

作者：赵红梅赵红侠烟台职业学院基础部山东烟台264070

称谓作为人们日常生活中应用最为频繁的话语之一,不仅是一种语言现象,也是一种社会现象。中国人和美国人都有称谓语系统,但它们之间存在很大的差别。在中外学者关于语言礼貌问题研究的基础上,从语用学"礼貌"的角度分析了这一差别。

关键词：中国与美国称谓语差异语用学礼貌

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高职院校英语高效课堂教学管理模式探索

佳木斯职业学院学报 2020年第1期36卷 48-49页

作者：赵红侠吉莉烟台职业学院山东烟台264670

随着我国社会经济的不断向前发展,我国与世界各国在各个领域的融合也越来越多。因此,我国的市场经济和国际地位也在不断地发生着变化,从而导致我国在人才的需求上也逐渐出现了转变。所以,在我国目前的高职教育中,很多学校都在努力扭转... 详细信息

随着我国社会经济的不断向前发展,我国与世界各国在各个领域的融合也越来越多。因此,我国的市场经济和国际地位也在不断地发生着变化,从而导致我国在人才的需求上也逐渐出现了转变。所以,在我国目前的高职教育中,很多学校都在努力扭转英语教学中出现的不科学现象,以期更好地促进本校的英语教学效果,培养出具有英语综合素养的全面性人才。本文主要从高职院校英语教学管理中存在的问题入手,并阐述解决这些问题的有效途径,从而促进高职院校英语教学的进一步发展。

关键词：高职院校英语教学管理模式高效课堂问题对策