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宿主OAS2蛋白抑制非洲猪瘟病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 577-583页

作者：赵思越史喜绢杨行张大俊赵登率陈国辉陈玲玲闫文倩别鑫恬赵美玉李平郑海学张克山郜原甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为了探究宿主蛋白2′,5′-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)与非洲猪瘟病毒(ASFV)复制之间的关系,本研究通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对宿主OAS2的调控作用;构建并合成OAS2真核表达质粒以及siRNA干扰... 详细信息

为了探究宿主蛋白2′,5′-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)与非洲猪瘟病毒(ASFV)复制之间的关系,本研究通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对宿主OAS2的调控作用;构建并合成OAS2真核表达质粒以及siRNA干扰序列,通过RT-qPCR、Western-blot方法探究在MA-104细胞中外源过表达OAS2及在PAMs细胞中下调OAS2表达对ASFV体外复制的影响。结果显示,ASFV感染PAMs细胞后,OAS2的蛋白水平和转录水平皆上调,并且外源过表达OAS2显著抑制了ASFV的复制,下调OAS2表达促进了ASFV的复制。本研究通过对宿主蛋白OAS2进行过表达和敲低,证实了OAS2可以抑制ASFV体外复制,该结果为进一步研究宿主对ASFV的抗病毒免疫研究提供了理论基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 OAS2 天然免疫抑制

抑制宿主脂肪酸合成关键酶活性影响O型口蹄疫病毒的复制

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 427-432页

作者：别鑫恬杨行陈国辉史喜绢张大俊赵登率闫文倩陈玲玲何路赵美玉赵思越蔺国珍郑海学张克山王明明西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州州730030 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型,监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用;通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用,筛选合适的抑制剂预处理浓度;用Western-blo... 详细信息

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型,监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用;通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用,筛选合适的抑制剂预处理浓度;用Western-blot和实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测添加外源C75和TOFA对FMDV复制的调控作用。结果显示,和对照组相比,添加脂肪酸合成的关键酶抑制剂C75和TOFA后,口蹄疫病毒蛋白水平和转录水平均显著下调。结论,抑制宿主细胞脂肪酸合成会降低FMDV在宿主细胞中的复制效率,这为进一步深入研究FMDV的致病机制开辟了新的方向。

关键词：口蹄疫病毒脂肪酸合成关键酶抑制影响

宿主蛋白BST-2抑制非洲猪瘟病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2024年第2期54卷 143-150页

作者：赵美玉杨行史喜绢张大俊赵登率陈玲玲别鑫恬闫文倩陈国辉赵思越李平郑海学栗孟飞张克山甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室甘肃兰州730000

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的高致死率传染病。骨髓基质细胞抗原2(BST-2,也称为Tetherin/HM1.24/CD317)被鉴定为一种抑制包膜病毒释放的新型宿主限制因子,它可以将病... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的高致死率传染病。骨髓基质细胞抗原2(BST-2,也称为Tetherin/HM1.24/CD317)被鉴定为一种抑制包膜病毒释放的新型宿主限制因子,它可以将病毒颗粒结合到细胞表面,随后在溶酶体中进行内化和降解,从而抑制病毒复制。因此,它对宿主的抗病毒作用十分重要。本实验室前期研究表明,怀孕猪血清会促进ASFV的复制。ITRAQ分析表明,BST-2蛋白属于下调前十的蛋白之一。为探究宿主蛋白BST-2与ASFV复制之间的关系,本试验通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对BST-2表达的影响;构建并合成了BST-2真核表达质粒以及siRNA干扰序列,通过RT-qPCR、Western-blot去探究外源过表达BST-2及敲低BST-2对ASFV体外复制的调控作用。结果显示,外源过表达BST-2显著抑制了ASFV的复制,敲低BST-2促进了ASFV的复制。本研究通过对BST-2进行过表达和敲低,证实了BST-2作为一种宿主抗病毒分子能抑制ASFV的体外复制,为进一步深入研究宿主蛋白抗ASFV功能提供了新的途径,也为ASF的防控提供了新思路。

关键词：非洲猪瘟病毒 BST-2 天然免疫宿主蛋白抑制体外复制

宿主蛋白SIRT5在代谢和疾病进程中的作用

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中国兽医科学 2024年第2期54卷 261-266页

作者：陈国辉史喜绢杨行张大俊赵登率闫文倩陈玲玲别鑫恬赵美玉赵思越何路刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室甘肃兰州730046

SIRT5作为Sirtuins家族的成员之一,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的赖氨酸去酰化酶,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化、去戊二酰化酶活性。SIRT5是细胞稳态的重要调节因子,参与调节不... 详细信息

SIRT5作为Sirtuins家族的成员之一,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的赖氨酸去酰化酶,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化、去戊二酰化酶活性。SIRT5是细胞稳态的重要调节因子,参与调节不同代谢过程中蛋白质的活性,例如:糖酵解、三羧酸循环(TCA循环)、脂肪酸-β氧化、活性氧(ROS)解毒等。SIRT5还可以充当肿瘤激活或抑制因子,在神经退行性疾病中发挥重要作用。此外,SIRT5亦可在抗病毒天然免疫反应中起关键作用。本文通过对SIRT5的结构、酶活性、生物学功能以及在疾病进程中发挥的作用进行综述,以全面了解SIRT5研究现状。

关键词： SIRT5 酶活性代谢肿瘤天然免疫

猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

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中国人兽共患病学报 2024年第5期40卷 421-429页

作者：陈国辉史喜绢别鑫恬杨行赵思越张大俊赵登率闫文倩陈玲玲赵美玉何路郑海学刘霞张克山甘肃农业大学生命科学技术学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室兰州730046

目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。

关键词：猪源SIRT5 FMDV-O 干扰素刺激基因 PK-15细胞

非洲猪瘟病毒抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2023年第11期53卷 1341-1347页

作者：赵登率张大俊史喜绢杨行郑海学刘湘涛张克山中国农业科学院、兰州兽医研究所、兰州大学动物医学与生物安全学院、动物疫病防控全国重点实验室、国家非洲猪瘟区域实验室甘肃兰州730046

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)和猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的猪病毒性传染病,对全球养猪业造成严重危害。随着PRRSV与ASFV的流行,增加了二者混合感染的可能性。前期工作已表明PRRSV在体外可以抑制ASFV复制。然而,ASFV是否影响PRRSV体外复制尚不可知。因此,本研究通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫印迹试验(Western-blot)检测了PRRSV疫苗株JXA1-R和ASFV弱毒株混合感染后PRRSV在猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)和猪骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)的复制水平以及CD163的mRNA水平。结果显示,混合感染抑制了PRRSV的复制水平,并降低CD163的mRNA水平。本研究证明ASFV可抑制PRRSV在体外的复制,并抑制CD163的mRNA水平。该结果为PRRSV和ASFV混合感染的防控提供了理论依据。

关键词：非洲猪瘟病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染抑制

抑制宿主脂肪酸合成关键酶活性影响O型口蹄疫病毒的复制

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中国兽医科学 2023年

作者：别鑫恬杨行陈国辉史喜绢张大俊赵登率闫文倩陈玲玲何路赵美玉赵思越蔺国珍郑海学张克山王明明甘肃省病原生物学基础学科研究中心中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室西北民族大学生命科学与工程学院

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒复制的影响，以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型，监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用；通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用，筛选合适的抑制剂预处理浓度；用Western-blo... 详细信息

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒复制的影响，以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型，监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用；通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用，筛选合适的抑制剂预处理浓度；用Western-blot和实时荧光定量（qPCR）方法检测添加外源TOFA和C75和TOFA对FMDV复制的调控作用。结果显示，和对照组相比，添加脂肪酸合成的关键酶抑制剂C75和TOFA后，口蹄疫病毒蛋白水平和转录水平均显著下调。本研究首次发现，抑制宿主细胞脂肪酸合成会降低FMDV在宿主细胞中的复制效率，这为进一步深入研究FMDV的致病机制开辟了新的方向。

关键词：口蹄疫病毒脂肪酸合成关键酶抑制影响

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同方期刊数据库

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β-雌二醇和孕酮促进非洲猪瘟病毒体外复制

畜牧兽医学报 2022年第7期53卷 2252-2259页

作者：袁兴国申超超赵登率杨博崔卉梅郝雨杨金柯陈学辉张婷张克山刘霞郑海学刘湘涛甘肃农业大学生命科学技术学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学兽医学院家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730000

旨在探究雌二醇(β-estradiol,E2)和孕酮(progesterone,P4)对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)体外复制的影响。采集空怀猪血清(non-pregnant swine serum,NPSS)和怀孕猪血清(pregnant swine serum,PSS)处理后,用添加胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、NPSS和PSS的培养液分别培养猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)和骨髓巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)并感染ASFV,利用绝对定量PCR和Western blot检测ASFV复制差异;用E2和P4 ELISA试剂盒检测各组血清中E2和P4含量;并在FBS组中单独或者混合添加E2和P4后感染ASFV,检测ASFV复制差异;用NPSS和PSS培养BMDM 24 h后,相对定量检测β-干扰素及下游抗病毒因子转录差异。PSS培养组ASFV复制高于NPSS培养组;PSS中E2和P4的含量均高于NPSS,且FBS中E2和P4的含量很低;在FBS组中单独或者混合添加E2和P4后ASFV复制量增加;PSS培养BMDM后会抑制β-干扰素及下游抗病毒因子的转录。PSS中高含量的E2和P4促进ASFV复制,本研究为解释临床上猪群感染非洲猪瘟(African swine fever,ASF)后母猪首先发病且怀孕母猪病情较重的现象提供一定的科学依据。

关键词：非洲猪瘟病毒雌二醇孕酮体外促进复制

基于改进水波算法的复杂多人共站装配线平衡研究

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计算机集成制造系统 2024年第1期30卷 129-143页

作者：张梅傅艳霞朱金辉邓率航华南理工大学自动化科学与工程学院广东广州510641 华南理工大学软件学院广东广州510006 华南理工大学大数据与智能机器人教育部重点实验室广东广州510006

针对实际装配环境中存在多人协同装配和共站的情况,研究了考虑工序复杂程度与工人能力差异的多人协作共站装配线平衡问题。首先,考虑到装配工序的复杂程度需指派不同规模和类型的工人组,建立了以最小化工作站数量和工人数量为目标函数... 详细信息

针对实际装配环境中存在多人协同装配和共站的情况,研究了考虑工序复杂程度与工人能力差异的多人协作共站装配线平衡问题。首先,考虑到装配工序的复杂程度需指派不同规模和类型的工人组,建立了以最小化工作站数量和工人数量为目标函数的多目标优化数学模型;在此基础上,提出一种改进的离散水波优化算法,对算子进行了离散化改造,并设计了基于拓扑排序的编码方案和启发式的解码方案,同时引入扰动个体和路径重连的搜索策略来增加解的多样性,进而提高解的质量;最后,通过求解两类测试用例,以线效率和平滑指数作为性能指标,验证了改进离散水波算法在求解复杂多人共站装配线平衡问题上的可行性与有效性,并将算法应用到动车装配线平衡优化中。

关键词：多人协作多人共站装配线平衡水波算法拓扑排序