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单核细胞趋化蛋白-1诱导肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的作用及机制探讨

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中华医学杂志 2008年第6期88卷 400-405页

作者：李慧凛郑法雷赵班中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科 100730

目的探讨单核细胞趋化蛋白（MCP）-1诱导肾小管上皮细胞发生上皮-肌成纤维细胞转化（EMT）的作用和细胞分子机制，主要是EMT过程中Erk1／2、P38MAPK、RhoA、RhoC、Snail表达水平的变化。方法将HK-2细胞分为阴性对照组，阳性对照组（TGF-... 详细信息

目的探讨单核细胞趋化蛋白（MCP）-1诱导肾小管上皮细胞发生上皮-肌成纤维细胞转化（EMT）的作用和细胞分子机制，主要是EMT过程中Erk1／2、P38MAPK、RhoA、RhoC、Snail表达水平的变化。方法将HK-2细胞分为阴性对照组，阳性对照组（TGF-β1、5μg／L），MCP-1作用组（0．1、1、10、100μg／L），观察不同时间（12、24、48、72h）MCP-1刺激与α-SMA表达水平之间的变化。用Western印迹方法检测肾小管上皮细胞PErk1／2、Erk1／2、P-P38MAPK、P38MAPK、RhoA蛋白水平的变化，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RhoC、Snail基因水平的变化。此外，分别观察Erk、P38MAPK、Rho信号通路的阻断剂（PD98059、SB203580、Y27632）对MCP-1诱导EMT的影响。结果在不同浓度MCP-1刺激下，HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平均明显增强，以1μg／L刺激下表达最强；在1μg／LMCP-1作用下，24、48、72hα-SMAm RNA及蛋白表均达显著高于阴性对照组（均P〈0．05），48h作用达到最高峰。在不同浓度（0．1、1、10、100μg／L）MCP-1刺激5min时，HK-2细胞（PErk1／2）／（Erk1／2）和（P-P38MAPK）／（P38MAPK）的比值均显著高于阴性对照组（均P〈0．05），并表现为剂量依赖性。不同浓度MCP-1刺激下RhoA蛋白水平和RhoC基因表达水平与阴性对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0．05）。PD98059可以部分阻断MCP-1诱导的肾小管上皮细胞α-SMA蛋白表达水平，与阳性对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；而SB203580及Y27632均不能阻断MCP-1诱导的α-SMA蛋白表达，与阳性对照组比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。MCP-1（10、100μL）刺激下Snail基因表达水平明显升高，与阴性对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论MCP-1诱导体外培养的HK-2细胞发生EMT与上调Erk1／2信号转导通路有关，并可能与上调Snail转录因子水平有关，本研究未能证实该机制与P38MAPK信号通路及Rho信号转导通路有关。

关键词：单核细胞化学吸引蛋白质1 肾小管成纤维细胞有丝分裂素激活蛋白激酶类

红细胞生成素（rHuEPO）对肾小管上皮—间充质细胞转化和肾间质纤维化的作用及机制探讨

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红细胞生成素（rHuEPO）对肾小管上皮—间充质细胞转化和肾间质纤...

作者：赵班中国协和医科大学

学位级别：硕士

背景与目的肾小管上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)是肾间质纤维化发生与进展的重要机制之一。有关研究表明，血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达减少与肾间质纤维化程度密切相关，外源性VEGF可部分抑制TGFβ... 详细信息

背景与目的肾小管上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)是肾间质纤维化发生与进展的重要机制之一。有关研究表明，血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达减少与肾间质纤维化程度密切相关，外源性VEGF可部分抑制TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞EMT。基础和临床实验研究结果均表明，人工重组红细胞生成素(rHuEPO)具有抑制肾间质纤维化、延缓慢性肾病进展的作用，但此种作用是否与肾小管上皮细胞EMT有关，目前尚未见报告。本研究之目的在于，探讨红细胞生成素(rHuEPO)对体外培养的近端肾小管上皮细胞EMT的作用及其与该细胞VEGF表达变化的关系。方法实验一，观察rHuEPO对EMT的抑制作用及其VEGF变化的关系：将体外培养的HKC细胞分为(1)阴性对照组：无血清培养细胞48h;(2)阳性对照组：TGF-β1(8ng／ml)处理细胞48h;(3)TGF-β1与rHuEPO共同处理组：不同浓度rHuEPO(0.1、1、10、50、100 IU／ml)和TGF-β1(8ng／ml)共同处理细胞48h;(4)rHuEPO单独处理组：不同浓度rHuEPO(1、10、50、100 Iu／ml)处理细胞48h;(5)rHuEPO预处理组：不同浓度rHuEPO(1、10、50、100 IU／ml)预处理细胞24h后，再加入TGF-β1(8ng／ml)作用24h。用间接免疫荧光方法检测各组细胞角蛋白的表达;用免疫组化双染方法检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，E钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。用半定量RT-PCR方法检测(1)、(2)、(3)组细胞α-SMA mRNA和VEGF mRNA的表达;用western blot方法检测(1)、(2)、(3)组细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，E钙粘蛋白(E-cadherin)，血管内皮细胞生长因子(VEGF)的蛋白表达。实验二，观察不同时间rHuEPO处理对EMT的作用及其VEGF变化的关系：将体外培养的HKC细胞分为(1)TGF-β1处理组：TGF-β1(8ng／ml)处理细胞72h;(2)rHuEPO预处理组：rHuEPO(100IU／ml)处理细胞24h后再加入TGF-β1(8ng／ml)再共同处理细胞72h，(3)rHuEPO同时处理组：rHuEPO(100IU／ml)与TGF-β1(8ng／ml)共同处理细胞72h，(4)rHuEPO滞后处理组：以时间效应分为4组，分别在TGF-β1(8ng／ml)处理细胞12h、24h、36h、48h后加入rHuEPO(100IU／ml)。用半定量RT-PCR方法检测各组HKC细胞α-SMA mRNA和VEGF mRNA的表达，用western blot方法检测HKC细胞α-SMA，E-cadherin，VEGF的蛋白表达。实验一、二均应用UVI凝胶成像分析系统进行扫描并记录光密度强度，蛋白表达强度以待测品光密度与β-actin光密度的比值表示，mRNA表达强度以待测品光密度与3-磷酸葡萄糖醛酸脱氢酶mRNA(GAPDH mRNA)光密度的比值表示。结果实验一(1)免疫荧光结果示：阴性对照组、rHuEPO单独作用组、rHuEPO(50、100IU／ml)和TGF-β1(8ng／ml)共同作用组及rHuEPO(50、100IU／ml)预处理组细胞角蛋白荧光表达为阳性。阳性对照组、rHuEPO(0.1、1、10IU／ml)和TGF-β1(8ng／ml)共同作用组及rHuEPO(1、10IU／ml)预处理组角蛋白荧光表达呈阴性。(2)免疫组化双染结果示：阴性对照组、rHuEPO单独作用组、rHuEPO(50、100IU／ml)和TGF-β1(8ng／ml)共同作用组及rHuEPO(50、100IU／ml)预处理组细胞E-cadherin表达阳性。阳性对照组、rHuEPO(0.1、1、10IU／ml)和TGF-β1(8ng／ml)共同作用组及rHuEPO(1、10IU／ml)预处理组细胞E-cadherin的表达明显减弱，多数细胞处于同时表达E-cadherin和α-SMA的中间状态。(3)阳性对照组α-SMAmRNA和α-SMA蛋白表达明显高于阴性对照组，E-cadherin蛋白表达明显低于阴性对照组，VEGFmRNA和VEGF蛋白表达明显低于阴性对照组(p＜0.01)。(4)rHuEPO(50，100IU／ml)与TGF-β1(8ng／ml)共同处理组α-SMA mRNA和α-SMA蛋白表达明显低于阳性对照组(p＜0.01)，高于阴性对照组(p＜0.01);VEGF mRNA和VEGF蛋白表达明显高于阳性对照组(p＜0.01)，低于阴性对照组(p＜0.01);E-cadherin蛋白水平明显高于阳性对照组(p＜0.01)，低于阴性对照组(p＜0.01)。实验二：(1)rHuEPO滞后处理组、

关键词：肾小管上皮细胞转分化红细胞生成素(EPO) 转化生长因子-β1 血管内皮生长因子单侧输尿管梗阻肾小管上皮细胞转分化转化生长因子-β1 单核细胞趋化蛋白-1 肾小管上皮-间充质细胞转化 α-平滑肌肌动蛋白单核细胞趋化因子整合素连接激酶

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第60例:右肺阴影、呼吸困难、双下肢无力

中华老年医学杂志 2003年第1期22卷 58-61页

作者：赵班乔趣柏李树芬卫生部北京医院内科 100730

病历摘要患者女,80岁,因呼吸困难渐加重1年,伴双下肢无力,为进一步诊治于1999年10月29日收入院.1997年6月X线胸片检查发现在右肺中部原肺结核病变上新增一结节状阴影,后行CT证实为实质性病变,疑为肿物,专家会诊建议手术切除,但患者不同... 详细信息

病历摘要患者女,80岁,因呼吸困难渐加重1年,伴双下肢无力,为进一步诊治于1999年10月29日收入院.1997年6月X线胸片检查发现在右肺中部原肺结核病变上新增一结节状阴影,后行CT证实为实质性病变,疑为肿物,专家会诊建议手术切除,但患者不同意,也不愿意接受放化疗或其他治疗,只定期追踪.患者无咳嗽、咳痰,受凉后有时轻咳,有少量黏痰或微黄痰.1998年10月曾咳嗽并咯血痰10余小口,以后有数次痰中带血,胸前时有压迫堵塞感,右支气管内有时有辣痛感.1999年10月28日痰病理找到1次腺癌细胞.

关键词：右肺阴影呼吸困难双下肢无力肺肿瘤诊断临床病理学

雷帕霉素对人肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的抑制作用

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基础医学与临床 2007年第6期27卷 635-642页

作者：李慧凛郑法雷赵班中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科北京100730

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对体外培养的人肾小管上皮细胞发生上皮肌成纤维细胞转化(Epi-thelial-Myofibroblast Transition,EMT)的作用,以及该作用与上皮细胞中锌指蛋白(Snail)基因水平变化的关系。方法体外培养的人近端肾小管... 详细信息

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对体外培养的人肾小管上皮细胞发生上皮肌成纤维细胞转化(Epi-thelial-Myofibroblast Transition,EMT)的作用,以及该作用与上皮细胞中锌指蛋白(Snail)基因水平变化的关系。方法体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为阴性对照组、转化生长因子β-1(TGF-β1)(1μg/L)阳性对照组和TGF-β1+RAPA组。TGF-β1+RAPA组不同浓度的雷帕霉素(0.1μg/L,1μg/L,10μg/L,100μg/L)与TGF-β1(1μg/L)共同作用,各组作用时间均为48h。用间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法分别检测细胞平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)表达,同时用RT-PCR方法检测细胞Snail mRNA水平的变化。再选取最大作用浓度的雷帕霉素作用不同时间(12h、24h、48h、72h),用RT-PCR、Western Blot方法检测α-SMA表达水平变化。结果间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法检测均表明,TGF-β1阳性作用组较阴性对照组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著增强(P<0.05),而E-cadherin表达则几乎消失,Snail mRNA表达水平显著增强(P<0.05)。与阳性对照组相比,雷帕霉素(10μg/L,100μg/L)与TGF-β1共同作用组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而E-cadherin表达则有部分恢复,显著高于阳性对照组(P<0.05),而Snail mRNA表达水平比阳性对照组显著降低(P<0.05)。雷帕霉素以浓度依赖方式抑制TGF-β1诱导的HKC细胞Snail mRNA表达。结论应用体外培养的肾小管上皮细胞研究表明,雷帕霉素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用。此作用可能与该药诱导的Snail表达下调有关。

关键词：肾小管上皮-肌成纤维细胞转化(EMT) 转化生长因子β-1 雷帕霉素锌指蛋白Snail

老年急性肾损伤患者的诊断标准选择及新型生物标志物的应用进展

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中华老年医学杂志 2021年第9期40卷 1194-1198页

作者：孟晨赵班毛永辉北京医院肾内科国家老年医学中心中国医学科学院老年医学研究院 100730

急性肾损伤(AKI)是指由各种原因引起的肾小球滤过率在短期内急剧下降的临床综合征。老年患者由于肾脏储备功能低下、基础疾病复杂、急性事件频发、临床合并用药种类繁多等原因,导致老年患者的AKI发病率明显高于普通人群,并呈现逐年增加... 详细信息

急性肾损伤(AKI)是指由各种原因引起的肾小球滤过率在短期内急剧下降的临床综合征。老年患者由于肾脏储备功能低下、基础疾病复杂、急性事件频发、临床合并用药种类繁多等原因,导致老年患者的AKI发病率明显高于普通人群,并呈现逐年增加趋势。老年人AKI防治应该重视危险因素识别及早期诊断,现有诊断标准的临床实用性及适用性存在争议,新型的AKI诊断生物标.志物在老年人群AKI诊断中的应用是否可行尚有疑问。本文就老年人AKI的诊断标准选择及新型生物标志物的临床应用进行综述,以期更好地指导老年人AKI的诊治。

关键词：急性肾损伤诊断标准生物学标记

8-氧化鸟苷对慢性肾脏病患者肾功能的评估价值

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中华医学杂志 2018年第42期98卷 3415-3419页

作者：徐冷楠赵班王海涛蔡剑平毛永辉北京医院国家老年医学中心肾内科 100730 北京医院老年医学研究所 100730

目的探讨来源于DNA的氧化产物8氧化脱氧鸟苷（8-oxo-dGsn）和来源于RNA的8氧化鸟苷（8-oxo-Gsn）与慢性肾脏病（CKD）的关系。方法2015年1月至2016年12月就诊于北京医院肾内科的146例CKD患者，年龄21～88（56.43±16.79）岁，其中男70... 详细信息

目的探讨来源于DNA的氧化产物8氧化脱氧鸟苷（8-oxo-dGsn）和来源于RNA的8氧化鸟苷（8-oxo-Gsn）与慢性肾脏病（CKD）的关系。方法2015年1月至2016年12月就诊于北京医院肾内科的146例CKD患者，年龄21～88（56.43±16.79）岁，其中男70例，占47.95%，CKD 1～5期分别为30、30、31、30、25例，收集空腹血及晨尿。应用同位素稀释高效液相-串联质谱（ID-LC-MS/MS）定量测定所有患者血浆和晨尿8-oxo-dGsn、8-oxo-Gsn水平。结果CKD 1～5期患者尿8-oxo-Gsn/Cr分别为（3.07±1.07）μmol/mol、（3.42±1.34）μmol/mol、（3.72±1.47）μmol/mol、（3.90±1.93）μmol/mol、（3.75±2.26）μmol/mol，其中CKD 4期患者尿8-oxo-Gsn含量高于其他4期（均P〈0.05）；CKD 1～5期患者血/尿8-oxo-Gsn分别为0.02±0.02、0.03±0.02、0.06±0.04、0.10±0.05、0.34±0.03，CKD 4～5期患者明显升高，以5期升高更明显（均P〈0.05）。8-oxo-Gsn与肾功能呈现较好的相关性：血8-oxo-Gsn与血肌酐相关系数r＝0.629（P〈0.001），尿/血8-oxo-Gsn与eGFR相关系数r＝0.799（P〈0.001），血/尿8-oxo-Gsn与血/尿肌酐相关系数r＝0.888（P〈0.001）。随着年龄增长，CKD患者RNA氧化增加，≥60岁患者尿8-oxo-Gsn明显升高（P〈0.05）。多重线性回归分析结果显示，8-oxo-Gsn仅与血肌酐有相关性（β＝0.656，t＝8.275，P〈0.001）。结论RNA氧化与肾脏疾病的发生发展密切相关，随着疾病进展，RNA氧化加重。血/尿8-oxo-Gsn的显著升高对终末期肾脏病有评价意义。

关键词：慢性肾脏病氧化性应激 8-氧化鸟苷 8-氧化脱氧鸟苷

牛磺酸减轻碘海醇诱导的人肾小管上皮细胞损伤

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中华肾脏病杂志 2010年第10期26卷 770-774页

作者：李天慧吴华赵班陈欢北京医院肾内科 100730

目的探讨牛磺酸能否减轻碘海醇导致的HK-2细胞（人近端肾小管上皮细胞）损伤及作用机制.方法不同碘浓度（25、50、100、125 gI/L）的碘海醇作用HK-2细胞6h;碘浓度为100 gI/L的碘海醇作用HK-2细胞不同时间（2 h、4 h、6 h）,观察细胞... 详细信息

目的探讨牛磺酸能否减轻碘海醇导致的HK-2细胞（人近端肾小管上皮细胞）损伤及作用机制.方法不同碘浓度（25、50、100、125 gI/L）的碘海醇作用HK-2细胞6h;碘浓度为100 gI/L的碘海醇作用HK-2细胞不同时间（2 h、4 h、6 h）,观察细胞损伤程度.选用碘海醇（100 gI/L、6 h）作为刺激组,用不同浓度牛磺酸（3、12、24 mmol/L）共孵育进行干预.细胞增殖-毒性试剂盒（CCK-8）测定细胞活力.Hoechst33342染色、荧光显微镜下观察细胞凋亡形态.流式Annexin V-FITC-PI双染和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性比色法观察细胞凋亡.Western印迹检测Bcl-2、Bax的表达.流式DCFH-DA细胞内标记法测定细胞内活性氧（ROS）.结果碘海醇呈碘浓度和时间依赖性诱导HK-2细胞活力下降、凋亡增加（P＜0.05）.碘海醇（100 gI/L、6 h）导致HK-2细胞ROS升高（P＜0.05）.牛磺酸呈浓度依赖性增加HK-2细胞活力,减轻凋亡.牛磺酸（3、12、24 mmol/L）干预组与碘海醇刺激组比较,细胞活力分别为（88.0±1.00）%、（91.33±0.58）%、（95.67±1.52）%比（76.67±1.53）%（均P＜0.05）;细胞凋亡率分别为（8.84：±1.75）%、（7.86±1.82）%、（6.30±1.50）%比（11.98±0.39）%（均P＜0.05）;caspase-3的活性分别为（1.33±0.10）、（1.27±0.0）、（1.10±0.04）比（1.42±0.1）（均P＜0.05）.牛磺酸上调HK-2细胞Bcl-2表达,降低了细胞内ROS的升高（均P＜0.05）.结论碘海醇可致HK-2细胞凋亡增加.氧化应激参与了HK-2细胞损伤.牛磺酸通过减轻细胞内氧化应激、促进Bcl-2表达上调,减轻碘海醇诱导的HK-2细胞凋亡和损伤.

关键词：碘海醇细胞凋亡活性氧牛磺酸肾小管上皮细胞

单核细胞趋化蛋白-1在肾间质炎症损伤和纤维化中的作用

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世界医学杂志 2004年第13期8卷 29-33页

作者：赵班郑法雷中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科 100730

单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)又名单核细胞趋化及激活因子(MCAF／CCL2)，主要由浸润的单核／巨噬细胞、血管平滑肌细胞，以及肾固有细胞如。肾小球系膜细胞、内皮细胞、间质纤维母细胞、足突细胞、... 详细信息

单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)又名单核细胞趋化及激活因子(MCAF／CCL2)，主要由浸润的单核／巨噬细胞、血管平滑肌细胞，以及肾固有细胞如。肾小球系膜细胞、内皮细胞、间质纤维母细胞、足突细胞、肾小管上皮细胞(TEC)等在各种细胞因子、理化因素的刺激下合成和分泌，是趋化性细胞因子中在。肾脏表达最广的因子。MCP-1的高度特异性同源受体CCR2主要分布在单核／巨噬细胞、树突状细胞、嗜碱性细胞、T细胞、NK细胞的表面，近端肾小管上皮细胞被推测可能存在MCP-1的受体。

关键词：单核细胞趋化蛋白-1 肾间质炎症损伤肾纤维化肾小管上皮细胞激活

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慢性肾衰竭患者冠状动脉血管成形术治疗现状

中国血液净化 2005年第11期4卷 622-624,635页

作者：赵班吴华卫生部北京医院肾内科北京100730

冠状动脉粥样硬化性心脏病是目前严重危害人类健康的慢性疾病之一,具有较高的发病率及病死率.据有关资料统计在慢性肾衰竭患者中,冠心病的发病率显著高于普通人群.随着血液透析技术的发展,慢性肾衰竭患者生存时间延长,缺血性心脏病的发... 详细信息

冠状动脉粥样硬化性心脏病是目前严重危害人类健康的慢性疾病之一,具有较高的发病率及病死率.据有关资料统计在慢性肾衰竭患者中,冠心病的发病率显著高于普通人群.随着血液透析技术的发展,慢性肾衰竭患者生存时间延长,缺血性心脏病的发生率也随之增加[1],并明显成为导致慢性肾衰竭患者死亡的主要原因[2-4],约占所有死亡原因的45%[5],其中大约22%是由急性心肌梗死所致[6].

关键词：慢性肾衰竭患者冠状动脉血管成形术治疗现状冠状动脉粥样硬化性心脏病血液透析技术缺血性心脏病急性心肌梗死慢性疾病人类健康资料统计