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荧光素酶表达载体yy625的构建及鉴定

分子植物育种 2022年

作者：李玉洁霍嘉鋆曹后男金美玉山本義治赵成日延边大学农学院岐阜大学应用生物科学部

本研究中为了构建含不同LUC报告基因的表达载体，利用TOYOBO公司pELuc(PEST)-test载体的ELuc′(PEST)基因替换yy621载体中的LUC基因，构建了yy625载体。利用PCR从pELuc(PEST)-test载体中克隆获得带有Bgl II和Xba I酶切位点的ELuc′(PEST)片段，经Bgl II和Xba I酶切后的片段插入到载体yy621的Bgl II和Xba I位点之间，替换LUC基因。经菌落筛选、PCR鉴定和测序，阳性菌落中的ELuc′(PEST)序列与载体pELuc(PEST)-test中的ELuc(PEST)序列一致，表明载体625构建成功。筛选出更加灵敏、信号强的LUC报告基因，对于研究启动子序列中包含的基因调控元件有着重要的意义。

关键词：

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软枣猕猴桃RAPD分子标记反应体系的优化

分子植物育种 2018年第18期16卷 6009-6016页

作者：赵成日延边大学农学院延吉133002

以长白山地区及韩国等9个采样点采集的软枣猕猴桃新鲜幼叶为试材,进行RAPD分子标记反应扩增体系的优化。对实验结果影响较大的5个因素(模板DNA浓度,引物浓度, MgCl_2浓度, dNTP浓度, Taq DNA聚合酶浓度)进行单因素设计,以寻找最佳反应... 详细信息

以长白山地区及韩国等9个采样点采集的软枣猕猴桃新鲜幼叶为试材,进行RAPD分子标记反应扩增体系的优化。对实验结果影响较大的5个因素(模板DNA浓度,引物浓度, MgCl_2浓度, dNTP浓度, Taq DNA聚合酶浓度)进行单因素设计,以寻找最佳反应浓度。结果表明,总反应体积为20μL时,模板DNA 40 ng、引物浓度0.3μmol/L、MgCl_2浓度2.0 mmol/L、dNTP浓度250μmol/L、Taq DNA聚合酶2.0 U。此时扩增条带多、电泳结果清晰稳定,表明该体系是一个适合软枣猕猴桃RAPD分子标记反应的体系。该体系的建立有利于软枣猕猴桃的亲缘关系和遗传多样性分析。

关键词：软枣猕猴桃(Actinidia arguta (Sieb.&Zucc) Planch. ex Miq.) RAPD 反应体系优化

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荧光素酶表达载体yy630的构建及鉴定

分子植物育种 2022年第2期20卷 479-485页

作者：李玉洁山本義治曹后男金美玉赵成日延边大学农学院延吉133002 岐阜大学应用生物科学部岐阜5011193日本

使用Promega公司pNL1.1[Nluc]载体的Nluc’基因替换yy621载体中的LUC+基因,构建yy630载体。通过PCR扩增的方法从pNL1.1[Nluc]载体中得到带有BglⅡ和XbaⅠ限制性酶切位点的Nluc’基因片段,经BglⅡ和XbaⅠ消化后的片段插入到载体yy621的Bg... 详细信息

使用Promega公司pNL1.1[Nluc]载体的Nluc’基因替换yy621载体中的LUC+基因,构建yy630载体。通过PCR扩增的方法从pNL1.1[Nluc]载体中得到带有BglⅡ和XbaⅠ限制性酶切位点的Nluc’基因片段,经BglⅡ和XbaⅠ消化后的片段插入到载体yy621的BglⅡ和XbaⅠ酶切位点之间,替换原有的LUC+基因。Nluc’基因是通过ATGGCTATGGCT序列替换pNL1.1[Nluc]载体Nluc基因的起始密码子ATG而形成的。经菌落筛选、PCR鉴定和测序验证,阳性菌落中的Nluc’基因序列与载体pNL1.1[Nluc]中的Nluc基因序列完全一致,载体630构建成功。本研究通过比较分析并筛选出适合植物体研究的荧光素酶载体对于研究植物基因调控机理有着重要的意义。

关键词：荧光素酶 yy630载体构建

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中韩野生软枣猕猴桃种质资源遗传多样性分析

果树学报 2018年第9期35卷 1043-1051页

作者：赵成日延边大学农学院吉林延吉133002

【目的】利用RAPD分子标记技术研究国内长白山地区和韩国由来野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性。【方法】以长白山地区和韩国由来的28个野生软枣猕猴桃的叶片为材料,利用RAPD分子标记技术进行了遗传多样性分析,并明确了它们之间的亲... 详细信息

【目的】利用RAPD分子标记技术研究国内长白山地区和韩国由来野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性。【方法】以长白山地区和韩国由来的28个野生软枣猕猴桃的叶片为材料,利用RAPD分子标记技术进行了遗传多样性分析,并明确了它们之间的亲缘关系。【结果】利用131个随机引物进行PCR,从中筛选出了多态性高、重复性好且扩增条带清晰的24个引物。24个引物在28个野生软枣猕猴桃中共扩增出191条带,其中多态性条带为186条,占97.4%。平均每个引物产生7.75个多态性条带。应用NTSYSpc 2.10e软件进行遗传一致度和遗传距离分析后用UPGMA方法进行聚类分析。28个野生软枣猕猴桃种质资源之间的遗传距离为0.020 2~0.934 2。遗传距离0.58时可将28个野生种划分成2大类。在遗传距离最小的0.02处,有蛟河2号和3号2个野生种,其RAPD分子标记相似性为98%。【结论】来自不同地理区域的野生软枣猕猴桃之间存在较高的遗传多样性,而在同一地理区域内遗传多样性较低。韩国野生软枣猕猴桃之间的遗传多样性较低,且与二道白河、汪清、左家等地的野生软枣猕猴桃亲缘关系较近。即具有同一地理区域聚类趋势,且不同地理区域间存在较高的遗传多样性。

关键词：软枣猕猴桃遗传多样性 RAPD 长白山地区韩国

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湍流扩散方程数学解析的探讨

环境科学进展 1993年第3期1卷 55-61页

作者：赵成日朝鲜金日成综合大学地理系

本文讨论了水流场中平流、分子扩散、湍流扩散、离散作用所引起的扩散物质质量通量的数学解析以及几种水质数学模型的应用条件。

关键词：水流场平流分子扩散湍流扩散

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教会学校对中国近代教育的影响

教会学校对中国近代教育的影响

作者：赵成日吉林大学

学位级别：硕士

从19世纪40年代起,西方传教士开始大规模进入中国。为了达到扩大基督教在中国影响的目的,在认识到中国自古便有重视教育的传统之后,传教士们便在中国创办了大量教会学校。随着清末中国传统教育情况的衰落,这些教会学校逐渐取代传统教育... 详细信息

从19世纪40年代起,西方传教士开始大规模进入中国。为了达到扩大基督教在中国影响的目的,在认识到中国自古便有重视教育的传统之后,传教士们便在中国创办了大量教会学校。随着清末中国传统教育情况的衰落,这些教会学校逐渐取代传统教育体系,成为近代中国教育发展的主要参照模式。教会学校对中国近代教育的发展进步产生了较为积极良好的作用。随着教会学校规模和影响力的扩大,传教士越来越重视兴办教会学校,希冀以此对中国教育改革运动施加影响,并在客观上推动了中国教育的近代化进程。教会学校自身的出现和发展,在一定程度上打破了国人陈旧僵腐的教育观念,对以科举考试为中心的传统教育发出了猛烈的挑战,给中国教育的发展起到了一种直接的示范和模仿的作用。从教学模式到办学体系,从教学内容到学校规制,近代中国教育体系中到处都可以看到教会学校的影响。另一方面,近代来华传教士对于中国教育改革提出过各种方案与构想并进行了各种具体的实践活动,对日后中国教育思想和形态的发展都起到了很深远的影响。

关键词：教会学校传教士教育近代

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长白山地区野生软枣猕猴桃遗传多样性研究

北方园艺 2018年第8期 53-58页

作者：赵成日延边大学农学院

利用RAPD分子标记技术对长白山地区24个野生软枣猕猴桃种质资源进行检测,应用NTSYSpc 2.10e软件对遗传一致性和遗传距离进行分析。以期解析长白山地区野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性、亲缘关系。结果表明:用24个扩增效果良好的引... 详细信息

利用RAPD分子标记技术对长白山地区24个野生软枣猕猴桃种质资源进行检测,应用NTSYSpc 2.10e软件对遗传一致性和遗传距离进行分析。以期解析长白山地区野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性、亲缘关系。结果表明:用24个扩增效果良好的引物进行RAPD扩增反应后,共扩增出187条带,其中多态性条带为181条,占96.8%,平均每个引物产生7.54个多态性条带。24个野生软枣猕猴桃种质资源之间遗传距离为0.02;.58,并具有同一地理区域聚类趋势,且不同地理区域间存在较高的遗传多样性。

关键词：长白山地区软枣猕猴桃遗传多样性 RAPD

应用AFLP标记构建珲春桃×正满早生遗传连锁图谱

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应用AFLP标记构建珲春桃×正满早生遗传连锁图谱

作者：赵成日延边大学

学位级别：硕士

本研究应用优化后的AFLP标记技术，利用32个F代群体，构建了珲春桃×正满早生遗传连锁图谱。其主要结论如下：桃AFLP技术体系的建立。完全酶切体系：25μl反应体积中，含500ng桃DNA、5U EcoR Ⅰ和5U Mse Ⅰ限制性内切酶、2.5μl 10... 详细信息

本研究应用优化后的AFLP标记技术，利用32个F代群体，构建了珲春桃×正满早生遗传连锁图谱。其主要结论如下：桃AFLP技术体系的建立。完全酶切体系：25μl反应体积中，含500ng桃DNA、5U EcoR Ⅰ和5U Mse Ⅰ限制性内切酶、2.5μl 10×One-Plus All Buffer、37℃酶切3～12h：连接接头体系：50μl反应体积中，含25μl完全酶切产物、2.5μl 10×Buffer、30ng EcoR Ⅰ和30ng Mse Ⅰ adapter、1～3U T DNA ligase，37℃连接3h;预扩增体系：50μl反应体积中，含5μl稀释10倍的连接接头产物、5μl 10×PCR buffer、1.75mM MgCl、0.25mM dNTP、30ng E+1和30ngM+1 Primer、1U Taq DNA聚合酶，94℃预变性5min后，94℃ 30s、56℃ 1min、72℃ 1min的PCR条件30个循环;选择性扩增体系：20μl反应体积中，含5μl稀释10倍的预扩增产物、2μl 10×PCR buffer、1.5mM MgCl、0.2mM dNTP、15ng E+3 Primer和30ng M+3 Primer、0.4U Taq DNA聚合酶，94℃预变性5min后，94℃ 30s、65℃ 1min(-0.7℃／Cycles)、72℃ 1min的PCR条件13个循环，接着在94℃ 30s、56℃ 30s、72℃ 1min的PCR条件33个循环。本研究中选用扩增带型清晰、多态性丰富的16对引物组合，在两亲本及其F群体中共扩增出750条带，平均每对引物产生46.88条带：多态性带共扩增出172条，平均每对引物产生10.75条多态性带。平均每对引物组合多态性位点检出率为22.94％。 AFLP标记在珲春桃×正满早生杂种F代分离方式主要有三种：①孟德尔分离方式。占总标记位点的11.07％，占多态性分离位点的48.26％;②偏分离方式。占总标记位点的11.87％，占多态性分离位点的51.74％;③异常分离。占总标记位点的3.86％。因此，用此群体构建珲春桃饱和遗传图谱是可行的。应用AFLP标记构建珲春桃×正满早生遗传连锁图谱。共有12个连锁群，包含28个偏分离标记利38个孟德尔分离标记，长度358.17cM，标记间平均距离5.43cM。其中最长的连锁群包括13个偏分离标记和20个孟德尔分离标记，86.48cM长，标记间平均距离是2.62cM;最短的连锁群只有2个孟德尔分离标记，6.26cM长，标记间平均距离是3.13cM。连锁群中标记间最大的遗传距离是28.46cM，最小的遗传距离是0.01cM。

关键词： AFLP 珲春桃正满早生遗传连锁图谱

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车载无线自组网的QoS路由算法的研究

车载无线自组网的QoS路由算法的研究

作者：赵成日北京科技大学

学位级别：硕士

车载无线自组网（VANET, VehicularAd Hoc Network）是移动Ad Hoc网络在车辆之间通信领域的一个应用，是目前车辆移动通信领域的研究热点之一。由于车载无线自组网具有移动节点速度快、无线环境恶劣、移动线路的规律性等区别于传统移动A... 详细信息

车载无线自组网（VANET, VehicularAd Hoc Network）是移动Ad Hoc网络在车辆之间通信领域的一个应用，是目前车辆移动通信领域的研究热点之一。由于车载无线自组网具有移动节点速度快、无线环境恶劣、移动线路的规律性等区别于传统移动Ad Hoc网络的一些特点，使得现有的Ad Hoc网络的路由协议，比如AODV，在车载无线自组网，表现出路由频繁断裂、控制报文泛滥等缺点。目前车辆之间通信也越来越需要提供能够满足各种类型的数据传输需求的QoS机制，现有的Ad Hoc网络的QoS路由协议也不能很好地用于车载无线自组网。本文详细地分析了AODV路由协议机制和AODV协议的一些不足，从路由断裂的角度分析了车载无线自组网的链路稳定性，并提出了一种能够有效地分析路由协议链路稳定性的数学模型。本文设计了一种适用于车载无线自组网的QoS路由协议（QRPBA, QoSRouting Protocol Based on AODV），通过理论分析和仿真验证了其有效性和可行性。QRPBA协议能够有效地降低链路断裂率和丢包率，提高了网络的吞吐量和可扩展性。 QRPBA路由协议的链路稳定性判别方法可用于其他路由协议的QoS实现，以增强路由协议的性能。本研究得到国家高科技发展计划（863计划）-“基于Ad Hoc车载移动通信系统关键技术研究”项目的支持。

关键词：车载无线自组网路由协议 QoS 链路断链率带宽