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宿主OAS2蛋白抑制非洲猪瘟病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2024年第5期54卷 577-583页

作者：赵思越史喜绢杨行张大俊赵登率陈国辉陈玲玲闫文倩别鑫恬赵美玉李平郑海学张克山郜原甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000

为了探究宿主蛋白2′,5′-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)与非洲猪瘟病毒(ASFV)复制之间的关系,本研究通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对宿主OAS2的调控作用;构建并合成OAS2真核表达质粒以及siRNA干扰... 详细信息

为了探究宿主蛋白2′,5′-寡腺苷酸合成酶2(OAS2)与非洲猪瘟病毒(ASFV)复制之间的关系,本研究通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对宿主OAS2的调控作用;构建并合成OAS2真核表达质粒以及siRNA干扰序列,通过RT-qPCR、Western-blot方法探究在MA-104细胞中外源过表达OAS2及在PAMs细胞中下调OAS2表达对ASFV体外复制的影响。结果显示,ASFV感染PAMs细胞后,OAS2的蛋白水平和转录水平皆上调,并且外源过表达OAS2显著抑制了ASFV的复制,下调OAS2表达促进了ASFV的复制。本研究通过对宿主蛋白OAS2进行过表达和敲低,证实了OAS2可以抑制ASFV体外复制,该结果为进一步研究宿主对ASFV的抗病毒免疫研究提供了理论基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 OAS2 天然免疫抑制

非洲猪瘟病毒D1133 L蛋白单克隆抗体抑制其复制

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 854-859页

作者：闫文倩侯景杨金柯郝雨杨行史喜绢张大俊别鑫恬陈国辉陈玲玲何路赵美玉赵思越郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)D1133L单克隆抗体对病毒复制的调控效应。在制备了ASFV D1133L单克隆抗体的基础上,将ASFV和不同浓度的单克隆抗体同时接种于PAMs,通过红细胞吸附试验(HAD 50)、实时荧光定量PCR(RT... 详细信息

旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)D1133L单克隆抗体对病毒复制的调控效应。在制备了ASFV D1133L单克隆抗体的基础上,将ASFV和不同浓度的单克隆抗体同时接种于PAMs,通过红细胞吸附试验(HAD 50)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹(Western blot)和荧光观察分析D1133L单克隆抗体对病毒复制的影响。结果显示:不同浓度的单克隆抗体在不同的感染时间对ASFV的病毒效价(P<0.01),蛋白表达水平,基因转录水平(P<0.01),ASFV-GFP绿色荧光蛋白的表达水平(P<0.05)均有显著抑制,且这种抑制作用具有剂量依赖性。综上所述,D1133L单克隆抗体可显著抑制ASFV的复制,试验结果在ASFV药物靶点的选择上具有一定的参考意义。

关键词：非洲猪瘟病毒 D1133 L蛋白单克隆抗体

抑制宿主脂肪酸合成关键酶活性影响O型口蹄疫病毒的复制

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 427-432页

作者：别鑫恬杨行陈国辉史喜绢张大俊赵登率闫文倩陈玲玲何路赵美玉赵思越蔺国珍郑海学张克山王明明西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州州730030 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型,监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用;通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用,筛选合适的抑制剂预处理浓度;用Western-blo... 详细信息

为探究宿主脂肪酸合成对O型口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,以猪肾细胞PK-15和IBRS-2细胞为模型,监测脂肪酸合成的关键酶抑制剂对FMDV复制的调控作用;通过CCK-8试剂盒检测抑制剂对细胞的毒性作用,筛选合适的抑制剂预处理浓度;用Western-blot和实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测添加外源C75和TOFA对FMDV复制的调控作用。结果显示,和对照组相比,添加脂肪酸合成的关键酶抑制剂C75和TOFA后,口蹄疫病毒蛋白水平和转录水平均显著下调。结论,抑制宿主细胞脂肪酸合成会降低FMDV在宿主细胞中的复制效率,这为进一步深入研究FMDV的致病机制开辟了新的方向。

关键词：口蹄疫病毒脂肪酸合成关键酶抑制影响

宿主蛋白BST-2抑制非洲猪瘟病毒体外复制的研究

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中国兽医科学 2024年第2期54卷 143-150页

作者：赵美玉杨行史喜绢张大俊赵登率陈玲玲别鑫恬闫文倩陈国辉赵思越李平郑海学栗孟飞张克山甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室甘肃兰州730000

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的高致死率传染病。骨髓基质细胞抗原2(BST-2,也称为Tetherin/HM1.24/CD317)被鉴定为一种抑制包膜病毒释放的新型宿主限制因子,它可以将病... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的高致死率传染病。骨髓基质细胞抗原2(BST-2,也称为Tetherin/HM1.24/CD317)被鉴定为一种抑制包膜病毒释放的新型宿主限制因子,它可以将病毒颗粒结合到细胞表面,随后在溶酶体中进行内化和降解,从而抑制病毒复制。因此,它对宿主的抗病毒作用十分重要。本实验室前期研究表明,怀孕猪血清会促进ASFV的复制。ITRAQ分析表明,BST-2蛋白属于下调前十的蛋白之一。为探究宿主蛋白BST-2与ASFV复制之间的关系,本试验通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV感染对BST-2表达的影响;构建并合成了BST-2真核表达质粒以及siRNA干扰序列,通过RT-qPCR、Western-blot去探究外源过表达BST-2及敲低BST-2对ASFV体外复制的调控作用。结果显示,外源过表达BST-2显著抑制了ASFV的复制,敲低BST-2促进了ASFV的复制。本研究通过对BST-2进行过表达和敲低,证实了BST-2作为一种宿主抗病毒分子能抑制ASFV的体外复制,为进一步深入研究宿主蛋白抗ASFV功能提供了新的途径,也为ASF的防控提供了新思路。

关键词：非洲猪瘟病毒 BST-2 天然免疫宿主蛋白抑制体外复制

宿主蛋白SIRT5在代谢和疾病进程中的作用

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中国兽医科学 2024年第2期54卷 261-266页

作者：陈国辉史喜绢杨行张大俊赵登率闫文倩陈玲玲别鑫恬赵美玉赵思越何路刘湘涛郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室甘肃兰州730046

SIRT5作为Sirtuins家族的成员之一,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的赖氨酸去酰化酶,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化、去戊二酰化酶活性。SIRT5是细胞稳态的重要调节因子,参与调节不... 详细信息

SIRT5作为Sirtuins家族的成员之一,是一种依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)的赖氨酸去酰化酶,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化、去戊二酰化酶活性。SIRT5是细胞稳态的重要调节因子,参与调节不同代谢过程中蛋白质的活性,例如:糖酵解、三羧酸循环(TCA循环)、脂肪酸-β氧化、活性氧(ROS)解毒等。SIRT5还可以充当肿瘤激活或抑制因子,在神经退行性疾病中发挥重要作用。此外,SIRT5亦可在抗病毒天然免疫反应中起关键作用。本文通过对SIRT5的结构、酶活性、生物学功能以及在疾病进程中发挥的作用进行综述,以全面了解SIRT5研究现状。

关键词： SIRT5 酶活性代谢肿瘤天然免疫

猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

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中国人兽共患病学报 2024年第5期40卷 421-429页

作者：陈国辉史喜绢别鑫恬杨行赵思越张大俊赵登率闫文倩陈玲玲赵美玉何路郑海学刘霞张克山甘肃农业大学生命科学技术学院兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控国家重点实验室兰州730046

目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。

关键词：猪源SIRT5 FMDV-O 干扰素刺激基因 PK-15细胞

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体育旅游研究的文献计量学可视化分析

体育旅游研究的文献计量学可视化分析

作者：赵思越天津体育学院

学位级别：硕士

体育旅游结合了体育竞技和旅游文化,既能满足体育爱好者的需求,也为游客提供了一种全新的旅游体验,是旅游业中最具发展潜力的领域之一。体育旅游科研也经历着日新月异的变化,尤其是以欧美为首的西方发达国家发表了大量与体育旅游相关的... 详细信息

体育旅游结合了体育竞技和旅游文化,既能满足体育爱好者的需求,也为游客提供了一种全新的旅游体验,是旅游业中最具发展潜力的领域之一。体育旅游科研也经历着日新月异的变化,尤其是以欧美为首的西方发达国家发表了大量与体育旅游相关的科研成果,形成了理论与实践互动的良好局面。那么如何在众多文献中,挖掘体育旅游研究的经典主题,探寻各个时期的前沿热点,预测未来研究的发展趋势,已经成为备受关注的课题,对这些研究成果的追踪和梳理工作也势在必行。本文基于文献计量学理论和科学知识图谱理论,使用文献资料法、数理统计法、逻辑分析法、文献计量法、知识图谱法等研究方法,对Web of Science核心合集中1990-2022年体育旅游研究的1665篇文献进行可视化分析,讨论体育旅游研究的时空分布、主体特征、研究主题以及引文情况。体育旅游研究主要分为三个阶段,由早期缓慢起步,到中期平稳增长,再到近期快速发展。借助期刊、学科这两种不同维度的载体,将知识空间进行区域划分,确定体育旅游的学术研究阵地。体育旅游研究主体包括作者、机构、国家三个层次,在分析其规模特征的基础上,对合作关系进行共现分析。通过对关键词进行词频分析、共现分析、演进分析以及聚类分析,把握体育旅游的热点主题与前沿趋势。从文献共被引、作者共被引、期刊共被引三个方面探索体育旅游的理论基础、学术奠基人以及知识来源分布,探究科学研究的继承与发展关系。在梳理国外体育旅游研究的基础上,进行国内外对比分析,探究国内外体育旅游研究的差异与特征,据此为国内体育旅游研究的未来发展提出以下结论建议:丰富理论体系,优化整体认知;创办主题期刊,打造科研阵地;健全培养机制,储备科研力量;融合多元视角,拓展深度广度;打破固有思维,明确学科定位;高质量引进来,高水平走出去。

关键词：体育旅游研究文献计量学可视化分析对比分析

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中国滨海体育文化传播的现状分析及对策建议

中国滨海体育文化传播的现状分析及对策建议

基于L-CNG加气站冷能利用的蓄冰槽性能研究

2022年粤港澳大湾区滨海体育休闲产业发展论坛

作者：赵思越天津体育学院

研究目的:建设"21世纪海上丝绸之路"的合作倡议,为滨海体育创造了跨区域合作与传播的新机遇,使滨海体育成为继冰雪运动之后建设体育强国的又一热点议题。本文以此为背景,从文化传播的视角出发,在分析滨海体育文化传播主体、传播媒介与...

研究目的:建设"21世纪海上丝绸之路"的合作倡议,为滨海体育创造了跨区域合作与传播的新机遇,使滨海体育成为继冰雪运动之后建设体育强国的又一热点议题。本文以此为背景,从文化传播的视角出发,在分析滨海体育文化传播主体、传播媒介与传播内容的基础上,阐述滨海体育文化的传播现状,对未来发展提出参考性建议。

关键词：

来源： cnki会议评论

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基于L-CNG加气站冷能利用的蓄冰槽性能研究

作者：赵思越上海交通大学

学位级别：硕士

随着人们环境保护意识的不断提高和传统化石燃料煤和石油对环境造成的巨大危害,天然气逐渐进入人们的视野,天然气汽车在中国发展迅速。L-CNG加气站是天然气加气站的一种形式,在L-CNG加气站内,LNG气化会释放出冷量,在常规L-CNG加气站中,... 详细信息

随着人们环境保护意识的不断提高和传统化石燃料煤和石油对环境造成的巨大危害,天然气逐渐进入人们的视野,天然气汽车在中国发展迅速。L-CNG加气站是天然气加气站的一种形式,在L-CNG加气站内,LNG气化会释放出冷量,在常规L-CNG加气站中,这部分冷量多被直接排放,造成能源的浪费。通过设计基于L-CNG加气站冷能利用的冰蓄冷系统,可以很好的解决加气站冷量不连续的问题,将LNG气化的这部分冷量回收并加以利用。本文以此为研究背景,通过模拟和实验的研究,对比此系统与常规冰蓄冷系统的不同,探寻在此系统中影响结冰的主要因素,同时系统的改进提出建议。首先,文章通过文献调研,选择了合适形式的蓄冰槽和载冷剂,提出了基于能量平衡方程和有限元分析法的结冰厚度计算方法。接下来,文章利用Fluent软件中Solidification/Melting模型,建立了长为1m的套管模型,通过ICEM软件划分网格,进行结冰的软件模拟,在模拟中发现乙二醇溶液进口温度对结冰的影响较大,乙二醇溶液流速和水的初始温度的变化对结冰影响较小。同时,本文还设计了一套实验系统进行结冰的模拟,在实验中,为了清晰的看到套管内结冰的现象,主要实验段采用双层有机玻璃管套管的形式,既保证了实验的可视化,又防止了冷量的散失。在实验中,本文发现重力对蓄冰槽内水的冻结具有重要的影响。内管下侧结冰比上侧结冰厚。文章对两种方法进行对比分析,结果基本吻合,但软件模拟在结冰界面分析上仍然存在一定误差。最后,文章对结果进行总结,提出了适合L-CNG加气站冷能利用系统冰蓄冷空调的运行工况和设计建议。

关键词： L-CNG加气站冷能利用冰蓄冷结冰