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山东省貂源铜绿假单胞菌的分离鉴定及三价灭活菌对小鼠的免疫效力评价

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山东省貂源铜绿假单胞菌的分离鉴定及三价灭活菌对小鼠的免疫效力...

作者：赵志腾东北农业大学

学位级别：硕士

水貂出血性肺炎是一种由铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)引起的以肺部瘀血、败血症为主要特征的水貂急性呼吸道传染病。该病以地方性流行为主,发病迅速,病死率高,常造成水貂养殖业巨大的经济损失。由于该病病原菌存在广泛,耐... 详细信息

水貂出血性肺炎是一种由铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)引起的以肺部瘀血、败血症为主要特征的水貂急性呼吸道传染病。该病以地方性流行为主,发病迅速,病死率高,常造成水貂养殖业巨大的经济损失。由于该病病原菌存在广泛,耐药菌株较多,致使貂感染发病后药物治疗效果不佳。目前认为,防治该病的主要措施是应用与致病菌血清型相匹配的灭活菌进行免疫接种。因此,水貂出血性肺炎流行地区的致病菌分离鉴定,血清型调查是制备多价灭活疫苗的前提和基础。本研究开展了山东省水貂源铜绿假单胞菌的分离鉴定、病原菌血清型分布调查和三价灭活菌对小鼠的免疫效力检测等方面的研究。病原菌分离鉴定。2013年至2014年,从山东省诸城、潍坊、临沂、文登、日照、莒县、胶南等地区的18个养貂场共采集77份病貂肺脏样本,分离得到120株疑似铜绿假单胞菌。经生化试验、16S r DNA的PCR扩增和血清型鉴定,最终确定其中53株分离菌为铜绿假单胞菌,分离率为44.2%(53/120)。53株铜绿假单胞菌包含11个已知血清型和一株未确定型。其中G型菌株最多,有27株;其次为B型、D型,分别为5株和4株。分离菌株中主要流行血清型为G型、B型和D型。免疫原的筛选。将分属于11个血清型的15株铜绿假单胞菌分别用甲醛灭活,与佐剂混合后对新西兰白兔连续免疫三次,采集免疫血清。用免疫血清分别与15株菌做交叉凝集试验,结果显示,G型、B型、D型、N型血清与多种血清型的菌株发生凝集。依据血清型鉴定结果和血清学交叉保护结果确定可以作为水貂出血性肺炎灭活疫苗的血清型为G、B、D型。通过血清交叉凝集试验、对小鼠半数致死量测定和生长曲线测定,确定了候选疫苗株为SD004、SD050、SD052。三价灭活菌免疫效力检测。测定候选株SD004、SD050、SD052传代稳定性,结果显示候选株SD004、SD050、SD052在20代内连续传代菌体含量虽有所变化,但都在同一数量级内浮动;20代内3株疫苗候选株致病性也在同一数量级内波动,3株候选株20代内的生长性能、致病性均稳定;对三株疫苗株进行包括培养基的选择,培养温度、时间、培养基p H等培养条件的优化,发现37℃条件下p H7.0～7.5的肉汤培养基中培养22～24h对候选株菌液生产应用最适宜;分别用相同菌体含量不同免疫剂量的三价灭活菌免疫昆明鼠,21 d后用10 LD5 0的候选株菌液攻毒,确定疫苗对小鼠的最小免疫剂量为0.15m L,即接种1.125×1011CFU三价灭活菌可以保证小鼠受到100%保护;小鼠肺脏病理组织学观察发现疫苗免疫剂量的增强可以有效保护小鼠,预防铜绿假单胞菌的感染;血清抗体水平检测表明水貂出血性肺炎三价灭活菌免疫小鼠后在28 d血清抗体达到峰值,42 d开始下降,49 d仍能检测到抗体存在;同时发现对小鼠两次免疫血清抗体滴度比一次免疫的抗体滴度要高,保护效果更好;将三价灭活菌0.15m L/只免疫昆明鼠,21 d后攻毒,小鼠无一死亡,证明其受到100%免疫保护。同时剖取免疫组小鼠的肺、肾、肝等内脏,发现免疫过三价灭活菌的小鼠攻毒后小鼠内脏无明显病理学变化,进一步证明三价灭活菌可以对小鼠提供有效保护。本研究证明,通过血清学调查并对优势流行菌株进行生物学特性的检测,获得分离菌株具有良好的免疫原性,诱导小鼠产生良好的免疫应答,可以作为预防水貂出血性肺炎流行的候选疫苗菌株。

关键词：铜绿假单胞菌血清型水貂出血性肺炎疫苗

Meyer-Schuster重排反应合成α'-芳醚和α'-芳胺取代α,β-不饱和酮研究

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Meyer-Schuster重排反应合成α'-芳醚和α'-芳胺取代α,β-不饱和...

作者：赵志腾浙江工业大学

学位级别：硕士

α,β-不饱和酮同时含有撲基和烯基,具有酮、烯烃和共轭二烯烃的性质,是有机合成中重要的合成前体或关键中间体,是Michael加成反应和Diels-Alder反应的良好受体,可广泛应用于医药、农药、精细化学品等工业领域。如:具有药效基团的α,β... 详细信息

α,β-不饱和酮同时含有撲基和烯基,具有酮、烯烃和共轭二烯烃的性质,是有机合成中重要的合成前体或关键中间体,是Michael加成反应和Diels-Alder反应的良好受体,可广泛应用于医药、农药、精细化学品等工业领域。如:具有药效基团的α,β-不饱和酮可用于抗肿瘤抑制剂的合成,具有香味的天然α,β-不饱和酮可用于精细化学品的合成。羟醛缩合是α,β-不饱和酮的经典合成方法,但在反应过程中底物会发生自身的缩合而导致副反应的发生,产物收率低。因此,研究一种高效的合成α,β-不饱和酮的方法具有一定的理论意义和应用价值。炔丙醇化合物端位的炔基和羟基可参与许多官能团之间的转化,在有机合成中是一类重要的合成砌块,它还是天然药物和具有高生物活性的药物中间体。利用炔丙醇的Meyer-Schuster重排合成α,β-不饱和酮是其在有机合成中的重要应用之一,而传统意义用Br(?)nsted酸催化该反应并没有获得较为理想的收率,近年来研究的催化剂多为金属元素的复配型催化剂,催化剂制备成本高。本文首先合成芳醚和芳胺取代的炔丙醇类化合物,用FeCl3·6HO催化上述炔丙醇类化合物的Meyer-Schuster重排反应,合成α’-芳醚和α’-芳胺取代的α,β-不饱和酮类化合物。1.以各种取代的苯酚和苯胺为原料,与溴丙炔发生取代反应,得到8个芳基炔丙基醚和芳基炔丙基胺类化合物。2.以芳基炔丙基醚和芳基炔丙基胺类化合物为原料,经格氏试剂拔氢及与二苯甲酮的加成反应合成了 13个芳醚和芳胺取代炔丙醇衍生物。3.以芳醚和芳胺取代的炔丙醇衍生物为原料,在FeCl3·6HO的催化作用下发生Meyer-Schuster重排反应得到12个α’-芳醚和α’-芳胺取代α,β-不饱和酮。通过对反应条件的优化得到如下最佳工艺参数:以乙腈为反应溶剂,以FeCl3·6HO为催化剂,催化剂用量为20%,反应温度为室温,反应时间为3h。本文用FeCl3·6HO催化炔丙醇类化合物,通过Meyer-Schuster重排反应合成α,β-不饱和酮,反应条件温和、催化剂价廉易得、产物收率高,为α’-芳醚和α’-芳胺取代α,β-不饱和酮的制备提供了一种便捷高效的合成方法。

关键词： Meyer-Schuster重排 α,β-不饱和酮 FeCl3·6H2O 炔丙醇

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中国民间智库参与公共政策执行的问题研究

时代报告 2019年第4期 136-137页

作者：赵志腾广西师范大学政治与公共管理学院

民间智库是专项从事政策研究、提供决策咨询的服务组织机构,在公共决策中具有传统行政部门无法替代的专业建议功能。文章以公共政策执行的政策宣传、政策分解、政策实验、政策监控四个环节为基点,剖析其受自身发展限制,在社会影响力、... 详细信息

民间智库是专项从事政策研究、提供决策咨询的服务组织机构,在公共决策中具有传统行政部门无法替代的专业建议功能。文章以公共政策执行的政策宣传、政策分解、政策实验、政策监控四个环节为基点,剖析其受自身发展限制,在社会影响力、专业服务力、资金筹措渠道、自身独立性方面暴露出的不足,提出重视公共传播、吸引人才聚集、健全筹资机制、创新运作机制的优化路径,以便为民间智库提高政策执行质量提供理论参考。

关键词：民间智库政策执行政策咨询

牛源产Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及重组毒素制备

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畜牧兽医学报 2014年第8期45卷 1336-1341页

作者：袁超文刘文鑫关玮琨孟相秋唐杰李星月赵志腾师东方东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

产Ⅱ型不耐热肠毒素(LT-Ⅱ)大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解LT-Ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况,本研究对2010-2012年间分离的138株大肠杆菌进行了LT-Ⅱ毒素基因的检测,对分离到的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌... 详细信息

产Ⅱ型不耐热肠毒素(LT-Ⅱ)大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解LT-Ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况,本研究对2010-2012年间分离的138株大肠杆菌进行了LT-Ⅱ毒素基因的检测,对分离到的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌进行了测序及分析。进一步将LT-Ⅱcl毒素基因双顺反子的ORF克隆入pET30a表达载体、转化Rossatta感受态并诱导表达重组LT-Ⅱcl毒素,经Y-1小鼠肾上腺皮质细胞对重组毒素进行了初步的毒性验证。结果显示,所分离的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中,有8株表达LT-Ⅱcl毒素,1株表达LT-Ⅱc4毒素,1株表达LT-Ⅱc6毒素。SDS-PAGE和Western Blot结果表明成功地制备出LT-Ⅱcl重组毒素,该重组毒素可以使Y-1小鼠肾上腺皮质细胞发生明显的病变,其细胞最小致死量为17.8 pg。本研究为中国国内首次分离到牛源产LT-Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌,为深入研究LT-Ⅱ毒素奠定了基础。

关键词：大肠杆菌Ⅱ型不耐热肠毒素重组毒素细胞毒性

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中国式邻避困境中多元利益冲突与纾解

天水行政学院学报（哲学社会科学版） 2023年第1期24卷 72-76页

作者：郝环一赵志腾桂林学院广西桂林541006 山东电子职业技术学院山东济南250200

多元利益主体间的非均衡博弈是引起中国式邻避困境的主要根源。在邻避效应发生发展的不同阶段,以地方政府、相关企业、周边公众和社会群体为代表的不同利益群体间相互博弈,形成多重利益冲突和“囚徒困境”。因此,诠释多元利益主体的价... 详细信息

多元利益主体间的非均衡博弈是引起中国式邻避困境的主要根源。在邻避效应发生发展的不同阶段,以地方政府、相关企业、周边公众和社会群体为代表的不同利益群体间相互博弈,形成多重利益冲突和“囚徒困境”。因此,诠释多元利益主体的价值偏好和利益诉求,并剖析多元利益主体博弈行为逻辑演变机理,通过完善利益共识机制、利益表达机制、利益补偿机制的路径,实现“不合作博弈”向“合作博弈”转变,利于有效化解邻避困境,推进社会基层治理现代化。

关键词：非均衡博弈囚徒困境认同机制合作博弈

大肠杆菌耐热肠毒素基因多拷贝串联表达及其单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2015年第3期37卷 233-237页

作者：韩林林阿力马斯别克.哈山李金萍唐杰刘文鑫关玮琨李星月赵志腾师东方东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 铁买克乡畜牧兽医站新疆富蕴836302

为制备具有免疫原性的重组大肠杆菌耐热肠毒素蛋白(STp)及抗STp特异性单克隆抗体(MAb),本研究将5拷贝estp串联,克隆于p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-estp5-his,并转化于大肠杆菌中进行重组蛋白STp5-His(r STp5-His)的表达。以r ST... 详细信息

为制备具有免疫原性的重组大肠杆菌耐热肠毒素蛋白(STp)及抗STp特异性单克隆抗体(MAb),本研究将5拷贝estp串联,克隆于p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-estp5-his,并转化于大肠杆菌中进行重组蛋白STp5-His(r STp5-His)的表达。以r STp5-His为免疫原,重组蛋白MBP-5STp为检测抗原,制备和筛选阳性杂交瘤细胞株,并采用western blot、阻断ELISA方法对MAb进行鉴定。结果显示,r STp5-His主要以包涵体形式表达,大小约为38 ku,具有良好的免疫原性,以其作为免疫原制备了4株能够识别天然STp的MAb,特异性良好。研究表明,多拷贝基因串联表达可以制备具有免疫原性的重组STp蛋白,所制备的MAb为天然STp和重组STp蛋白检测方法的建立奠定了基础。

关键词：大肠杆菌耐热肠毒素基因串联体免疫原性单克隆抗体

山东省貂源铜绿假单胞菌分离株的血清型和致病性

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中国预防兽医学报 2017年第1期39卷 38-41,58页

作者：赵志腾江俄尔汗.热斯拜陶婧关玮琨李星月李婷婷师东方东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 铁买克乡畜牧兽医站新疆富蕴836302

为了解山东省貂源铜绿假单胞菌(PA)的血清型分布,本研究从部分市县采集的山东77份水貂肺脏病料样品中分离PA,并进行生化鉴定、分子生物学鉴定、血清学鉴定、生长曲线测定和半数致死量(LD_(50))测定。结果显示,共分离获得53株PA,分别属... 详细信息

为了解山东省貂源铜绿假单胞菌(PA)的血清型分布,本研究从部分市县采集的山东77份水貂肺脏病料样品中分离PA,并进行生化鉴定、分子生物学鉴定、血清学鉴定、生长曲线测定和半数致死量(LD_(50))测定。结果显示,共分离获得53株PA,分别属于11个血清型,其中G型27株、B型5株、D型4株。其他血清型分离株较少。其中G、B和D型分离株SD004、SD050、SD052生长性能良好,对小鼠的LD50分别为1.99×10^(10) cfu、2.51×10^(10)cfu、5.62×10^(10)cfu。该研究为水貂出血性肺炎灭活疫苗菌株的选择提供实验依据。

关键词：水貂出血性肺炎铜绿假单胞菌血清型致病性

重组大肠杆菌肠毒素蛋白LTA_(192)-STa_(13)的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究

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中国预防兽医学报 2015年第4期37卷 304-309页

作者：杜元策沙木哈吾.别开刘文鑫关玮琨孟相秋韩林林李金萍袁超文唐杰李星月赵志腾师东方东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 克孜勒希力克乡畜牧兽医站新疆富蕴836106

为研究重组大肠杆菌肠毒素融合蛋白LTA192-STa13的免疫原性,本研究将产肠毒素大肠杆菌(ETEC)elt A和est A基因定点突变后构建融合基因,进行重组蛋白LTAR192G-STaG13Q的表达。利用纯化的重组蛋白和灭活菌液分别免疫小鼠,比较不同抗原诱... 详细信息

为研究重组大肠杆菌肠毒素融合蛋白LTA192-STa13的免疫原性,本研究将产肠毒素大肠杆菌(ETEC)elt A和est A基因定点突变后构建融合基因,进行重组蛋白LTAR192G-STaG13Q的表达。利用纯化的重组蛋白和灭活菌液分别免疫小鼠,比较不同抗原诱导小鼠体液免疫应答能力,以及体外免疫血清对毒素的中和作用。结果显示,各组免疫小鼠均可以产生高滴度抗LTA和STa抗体,其血清抗体可以通过乳汁传递给新生仔鼠,其中蛋白免疫组血清抗体效价更高。体内外中和试验证明,实验组小鼠三免后的血清能够中和LT和STa毒素对实验鼠的毒性作用,并且能够中和LT对Y-1细胞的毒性作用,蛋白免疫组血清抗体中和效价可达到1∶89.13,明显高于灭活菌免疫组。研究表明,重组蛋白LTA192-STa13对小鼠具有良好的免疫原性,能够诱导免疫鼠产生良好的体液免疫应答,可以作为ETEC亚单位疫苗的候选抗原。

关键词：大肠杆菌肠毒素重组蛋白体液免疫

东北地区仔猪腹泻大肠杆菌EAST1基因调查

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黑龙江畜牧兽医 2016年第1期 8-11页

作者：唐杰袁超文刘文鑫孟相秋关玮琨李星月赵志腾王时葛建松郭德民江松泽师东方东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 哈尔滨维科生物技术开发公司哈尔滨150069

大肠杆菌肠聚集性热稳定肠毒素Ⅰ(EAST1)是近年来备受关注的一种肠毒素。为进一步了解EAST1毒力基因在东北地区仔猪腹泻大肠杆菌中的存在情况,以及EAST1毒力基因与其他毒力基因的存在关系进行研究,试验于2010—2013年从东北地区38个规... 详细信息

大肠杆菌肠聚集性热稳定肠毒素Ⅰ(EAST1)是近年来备受关注的一种肠毒素。为进一步了解EAST1毒力基因在东北地区仔猪腹泻大肠杆菌中的存在情况,以及EAST1毒力基因与其他毒力基因的存在关系进行研究,试验于2010—2013年从东北地区38个规模化猪场共采集断奶仔猪腹泻粪便样品290份,经染色镜检和生化试验鉴定出362株大肠杆菌,应用PCR检测方法对STa、STb、LTa、LTb、paa、AIDA-I、afa E、irp2和EAST1等毒力基因进行检测。结果表明:有286株大肠杆菌携带毒力基因,其中89株(占31.12%)携带EAST1毒力基因,只含有EAST1毒力基因的有49株(占17.13%),同时携带其他毒力基因的有40株(占13.99%)。EAST1毒力基因可以协同F1菌毛、paa基因频繁交叉出现在同一致病菌中,但这些毒力基因编码的毒素之间是否存在协同致病关系尚需进一步研究。

关键词：大肠杆菌仔猪腹泻 EAST1毒力基因黏附因子