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人类PIF1解螺旋酶的功能研究

人类PIF1解螺旋酶的功能研究

作者：赵德根石河子大学

学位级别：硕士

目的：PIF1基因被普遍认为是辐射敏感型的基因，通过研究PIF1基因参与电离辐射诱导的DNA损伤修复，来探讨PIF1基因参与DNA损伤修复的分子机制。利用RNA干扰技术“敲低”PIF1全长基因，进一步的研究PIF1解螺旋酶的生理功能。构建三种重... 详细信息

目的：PIF1基因被普遍认为是辐射敏感型的基因，通过研究PIF1基因参与电离辐射诱导的DNA损伤修复，来探讨PIF1基因参与DNA损伤修复的分子机制。利用RNA干扰技术“敲低”PIF1全长基因，进一步的研究PIF1解螺旋酶的生理功能。构建三种重组质粒，用脂质体转染法将其分别转染到HeLa细胞中来筛压稳转过表达的细胞系，用于对PIF1基因的更深入的研究。方法：对培养的HeLa细胞进行不同剂量的γ射线照射，用Western blot和Real-Time PCR来检测PIF1基因的表达量的变化，从变化中来了解和研究PIF1基因在DNA损伤修复中可能存在的功能。利用RNA干扰技术“沉默”PIF1全长基因，通过Western blot和Real-Time PCR来检测敲低细胞PIF1基因的敲低效果。观察敲低的细胞系与野生型细胞系在生长状态上的差异.对敲低的细胞系进行不同剂量的γ射线照射，通过活细胞计数了解细胞的增殖能力，流式细胞仪测细胞周期，克隆形成率等实验来观察敲低细胞株与野生型细胞株在γ射线照射前后细胞的生存能力、DNA损伤修复情况及细胞周期变化情况。从pCR2.1-TOPO-PIF1原始质粒中，利用PCR方法扩增目的基因PIF1、PIF1N及PIF1C，将目的基因和目的载体pcDNA3.1（-）分别酶切定向连接，构建出三种重组质粒【PcDNA3.1（-）-PIF1、PcDNA3.1（-）-PIF1N、PcDNA3.1（-）-PIF1C】。通过脂质体转染法将这三种重组质粒分别转染到HeLa细胞中，筛压稳转过表达的细胞系。结果：1. HeLa细胞经不同剂量的γ射线处理后通过Western blot检测发现PIF1蛋白表达量在不同时间点有先降低后升高的趋势，用Real-Time PCR的方法检测发现PIF1基因在mRNA水平上也出现不同时间点有先降低后升高的趋势。2.通过Western blot和Real-Time PCR的方法检测出敲低的细胞系与对照细胞相比较在转录与翻译水平上都有不同程度的敲低现象。对敲低的细胞系进行不同剂量的γ射线照射处理后，活细胞计数发现Sh-PIF1-Hela敲低细胞比Sh-NC-Hela对照细胞的生长速度要慢很多且细胞凋亡增加。克隆形成率实验发现随着细胞照射剂量的增加，细胞的增殖能力降低，形成克隆数减少，敲低细胞与对照细胞相比，细胞的生存能力降低。流式细胞仪测细胞周期发现敲低细胞G2/M期阻滞明显延长。3.成功构建出三种重组质粒，并对其转染的三种过表达的细胞系，通过Western blot法并没有检测出PIF1蛋白表达量的升高，但用Real-TimePCR的方法测出PcDNA3.1-PIF1全长和PcDNA3.1-PIF1C端的mRNA相对表达量都有一定程度的增加，而PcDNA3.1-PIF1N端的mRNA的相对表达量并没有增加。是否构建出稳转的细胞系有赖于进一步的实验验证。结论1. PIF1基因具有辐射敏感性，与DNA损伤修复相关。2.成功的构建出稳转敲低的细胞系（Sh-PIF1-Hela）。发现PIF1基因与凋亡密切相关。3.成功的构建出三种重组质粒。

关键词： PIF1 敲低细胞系重组质粒过表达细胞系 DNA损伤

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做好基层司法所思想政治工作初探

新西部（中旬·理论） 2016年第10期 58-58,54页

作者：赵德根南京市江宁区基层法律援助工作站江苏南京211134

文章叙述了基层司法所思想政治工作的重要性,探讨如何做好司法所思想政治工作的对策:首先,提高整个司法队伍的法律素养和政治素养;其次,要充分利用网络、微博、微信等新媒体的宣传方式,加大思想政治工作的宣传力度;再次,在工作内容上,... 详细信息

文章叙述了基层司法所思想政治工作的重要性,探讨如何做好司法所思想政治工作的对策:首先,提高整个司法队伍的法律素养和政治素养;其次,要充分利用网络、微博、微信等新媒体的宣传方式,加大思想政治工作的宣传力度;再次,在工作内容上,既要注意宏观方面价值观念的树立,又要从微观方面关注职工的思想问题和生活问题。

关键词：基层司法所思想政治工作

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自适应局部惩罚样条回归模型探讨

统计与决策 2017年第21期33卷 5-9页

作者：江坤杨联强丁梦珍赵德根安徽大学数学科学学院合肥230601 安徽大学商学院合肥230601

在惩罚样条回归方法中,截断幂基系数的惩罚权重是相等的,这导致在数据具有局部异质性时不能很好地去拟合原函数。文章以结点两端数据点的方差构造了一种新的局部惩罚样条回归方法,能够很好地解决数据具有局部异质性的问题。该方法对数... 详细信息

在惩罚样条回归方法中,截断幂基系数的惩罚权重是相等的,这导致在数据具有局部异质性时不能很好地去拟合原函数。文章以结点两端数据点的方差构造了一种新的局部惩罚样条回归方法,能够很好地解决数据具有局部异质性的问题。该方法对数据波动较小的区域给予较大的惩罚,而对数据波动较大的区域给予较小的惩罚,从而实现惩罚的局部性。通过模拟的结果可知,当数据具有局部异质性时,构造的新的局部惩罚样条比整体惩罚样条和光滑样条具有更好的拟合效果。

关键词：方差局部惩罚样条异质性

^(60)Coγ射线照射人肝癌细胞诱导PIF1基因mRNA变化

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辐射防护 2016年第3期36卷 149-153页

作者：王彬张莹赵德根李忠秋杨洋李超朱茂祥顾永清石河子大学生命科学学院新疆石河子832003 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 石河子大学医学院新疆石河子832003 蚌埠市第三人民医院安徽蚌埠233000

分别用2 Gy和4 Gy^(60)Coγ射线照射人肝细胞HepG2,利用real-time PCR方法检测PIF1基因mRNA表达量的变化,以探讨PIF1基因是否参与电离辐射致DNA损伤应答。结果表明,不同剂量的γ射线照射HepG2细胞后,PIF1 mRNA表现出一致的变化规律:即... 详细信息

分别用2 Gy和4 Gy^(60)Coγ射线照射人肝细胞HepG2,利用real-time PCR方法检测PIF1基因mRNA表达量的变化,以探讨PIF1基因是否参与电离辐射致DNA损伤应答。结果表明,不同剂量的γ射线照射HepG2细胞后,PIF1 mRNA表现出一致的变化规律:即照后先轻微降低随后一直高表达,高表达至少持续到照射后12 h。提示电离辐射能够诱导PIF1表达,表达水平与剂量、时间相关。

关键词： PIF1解螺旋酶电离辐射 DNA损伤修复实时荧光定量PCR

AECOPD患者铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌感染因素分析

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医学动物防制 2023年第5期39卷 456-460,464页

作者：段友红郭普梁友宝陈尧赵德根常滋毓蚌埠市第一人民医院检验科安徽233000 蚌埠医学院第一附属医院检验科

目的探讨慢性阻塞性肺部疾病急性加重(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD),铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PAE)感染患者和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)感染患者感染的风险因素和疾病转归。方法以2018年1月至2020年12月蚌埠市某医院114例AECOPD病例为研究对象,根据是否发生肺部感染分为KPN感染组25例,PAE感染组39例,无感染对照组50例。收集所有病例临床资料,单因素和多因素回归分析AECOPD患者PAE和KPN感染的危险因素,比较3组患者再入院和死亡率的结果探讨疾病转归的差异。结果单因素和多因素回归分析结果显示,住院时间[OR=1.304(95%CI:1.014~1.677)]、合并肺源性心脏病[OR=7.884(95%CI:1.081~57.508)]、抗生素使用天数[OR=1.440(95%CI:1.079~1.922)]、机械通气[OR=26.976(95%CI:1.239~587.162)]是AECOPD患者发生PAE感染的独立危险因素(P0.05)及最快再入院间隔时间(χ^(2)=0.529,P>0.05)差异无统计学意义。结论住院时间、合并肺源性心脏病、抗生素使用天数和机械通气与AECOPD患者PAE感染有关,住院时间和合并肺源性心脏病与KPN感染有关,临床医生要针对风险因素早期采取预防治疗措施,降低病死率,保障患者生命健康。

关键词： AECOPD 铜绿假单伯菌肺炎克雷伯菌危险因素转归分析

1543例医院职工健康体检空腹血糖检测结果分析

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中国处方药 2018年第3期16卷 120-121页

作者：赵德根金强胡恩赑李峰唐新宇蚌埠市第三人民医院检验科安徽蚌埠233000

目的了解蚌埠市第三人民医院本院职工健康体检糖尿病和空腹血糖受损(IFG)情况。方法统计2015年7~8月职工健康体检有效人员1 543例的空腹血糖检测结果,分析年龄、性别对糖尿病和IFG的影响。结果 1 543例受检者中,检出糖尿病患者79例,总... 详细信息

目的了解蚌埠市第三人民医院本院职工健康体检糖尿病和空腹血糖受损(IFG)情况。方法统计2015年7~8月职工健康体检有效人员1 543例的空腹血糖检测结果,分析年龄、性别对糖尿病和IFG的影响。结果 1 543例受检者中,检出糖尿病患者79例,总检出率为5.12%。在21~30岁的受检者中检出2名女性糖尿病患者。41~50岁、51~60岁两年龄组及糖尿病总检出率均是男性高于女性(P<0.05),且随着年龄增长,糖尿病患者检出率逐渐增加(P<0.05);共检出IFG患者296例,总检出率为19.18%,IFG发生于各个年龄组且总检出率存在男性高于女性的趋势,随着年龄的增长其检出率也随之升高(P<0.05)。结论在中青年人群中,男性较女性患糖代谢异常病症的几率大大增加,且随着年龄增大,IFG、糖尿病患病率存在增高趋势。因此,不仅要重视对老年受检者筛查糖尿病,还应重视对中青年受检者筛查糖尿病和IFG,将他们纳入糖尿病健康管理工作当中,以达到预防和延缓糖尿病的发生,提高其生命和生活质量的目的。

关键词：空腹血糖健康体检空腹血糖受损糖尿病

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小干扰RNA的研究进展

现代生物医学进展 2014年第4期14卷 792-794页

作者：赵德根王建校刘旭徐涛顾永清石河子大学医学院新疆石河子832000 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年发展起来的一种新技术。RNAi是指通过外源性或内源性的双链RNA在体内诱导靶基因mRNA产生特异性降解,进而引起不同水平的基因沉默,其效应分子主要是小干扰RNA(siRNA)。siRNA是生物界普遍存在的一种... 详细信息

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年发展起来的一种新技术。RNAi是指通过外源性或内源性的双链RNA在体内诱导靶基因mRNA产生特异性降解,进而引起不同水平的基因沉默,其效应分子主要是小干扰RNA(siRNA)。siRNA是生物界普遍存在的一种抵御外来基因和病毒感染的基因调控方式,也是一种重要的研究工具。大量的研究工作致力于设计合理的siRNA片段用于基因功能研究,并将其作为一种治疗方法用于肿瘤、病毒性疾病等基因治疗以及药物靶向研究。因此本文对siRNA的作用机制、设计原则及其在临床应用中的缺点和解决方法进行综述。

关键词： siRNA 干扰机制设计原则缺点

人PIF1解螺旋酶克隆表达及2种细胞裂解法纯化PIF1蛋白比较

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中华实用诊断与治疗杂志 2013年第4期27卷 322-324页

作者：赵德根王建校李珊珊顾永清石河子大学医学院生物化学教研室新疆维吾尔自治区石河子市832000

目的克隆、表达人类全长PIF1解螺旋酶,建立PIF1纯化方法。方法从Hela细胞的cDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶cDNA,插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞使PIF1蛋白在大... 详细信息

目的克隆、表达人类全长PIF1解螺旋酶,建立PIF1纯化方法。方法从Hela细胞的cDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶cDNA,插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b-PIF1重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞使PIF1蛋白在大肠杆菌中表达,分别用溶菌酶热裂解法和玻璃珠震荡法裂解大肠杆菌细胞,再用高效液相的镍亲和柱亲和层析纯化PIF1蛋白,比较2种方法释放的PIF1蛋白。结果克隆了PIF1基因,并使PIF1蛋白在大肠杆菌中得到成功表达,2种裂解法均能使PIF1蛋白释放出来,玻璃珠裂解法释放的PIF1蛋白较热裂解法高2倍。结论玻璃珠震荡法裂解细胞能释放更多的PIF1蛋白,是纯化PIF1蛋白的一个较好的选择。

关键词： PIF1解螺旋酶蛋白表达细胞裂解

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蚌埠市部分体检人群血尿酸水平的现状分析

淮海医药 2018年第1期36卷 13-15页

作者：赵德根金强胡恩赑姚晓玲唐新宇安徽省蚌埠市第三人民医院检验科 233000

目的:了解蚌埠市区健康体检人群血清尿酸(UA)水平及高尿酸血症(HUA)的分布特点,为HUA的防治提供一定的科学依据。方法:用全自动生化分析仪对蚌埠市区2 551例健康体检者进行血清UA的测定,男性UA>428μmol/L,女性UA>357μmol/L为HUA的诊... 详细信息

目的:了解蚌埠市区健康体检人群血清尿酸(UA)水平及高尿酸血症(HUA)的分布特点,为HUA的防治提供一定的科学依据。方法:用全自动生化分析仪对蚌埠市区2 551例健康体检者进行血清UA的测定,男性UA>428μmol/L,女性UA>357μmol/L为HUA的诊断标准。按年龄段进行分组统计。结果:该市健康体检人群男性血清UA平均水平(371.93±76.47)μmol/L高于女性(273.30±73.93)μmol/L,差异有统计学意义(P0.05)。女性血清UA水平和HUA患病率的总趋势随年龄增加而增高。结论:蚌埠市区健康体检人群男性血清UA水平明显高于女性,而且男性人群中HUA患者出现年轻化趋势。

关键词：尿酸高尿酸血症健康体检