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小麦转基因方法的回顾、比较与展望

河北农业大学学报 2002年第z1期25卷 5-7页

作者：赵化冰马峙英赵宏河北农业大学农学院河北保定071001

十多年来 ,对小麦转基因技术的研究有了长足的进展。以原生质体为受体的基因转导最先受到瞩目 ,但由于原生质体培养和再生困难而缺乏实用性。基因枪法是小麦转基因最常用的方法 ,其转基因体系已基本建立。农杆菌介导的小麦基因转化获得... 详细信息

十多年来 ,对小麦转基因技术的研究有了长足的进展。以原生质体为受体的基因转导最先受到瞩目 ,但由于原生质体培养和再生困难而缺乏实用性。基因枪法是小麦转基因最常用的方法 ,其转基因体系已基本建立。农杆菌介导的小麦基因转化获得了突破 ,并将以其诸多优点代替基因枪法成为今后研究的热点。花粉管通道法取得了实用性成果 ,以其简便易行被更多的育种家所接受。笔者回顾了 2 0世纪 80年代以来用于小麦的各种遗传转化方法 ,对其优缺点作一比较。

关键词：小麦遗传转化回顾比较展望

酚降解菌株的分离、鉴定和在含酚废水生物处理中的应用

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环境科学 2008年第2期29卷 482-487页

作者：任河山王颖赵化冰蔡宝立南开大学微生物学系生物活性材料教育部重点实验室天津300071

从石油化工厂的活性污泥和废水混合物中分离到10个降解酚的细菌菌株,经16S rRNA基因序列分析,5个菌株(PD1、PD2、PD6、PD7和PD39)被鉴定为假单胞菌(Pseudomonassp.),4个菌株(PD4、PD5、PD8和PD9)为不动杆菌(Acinetobactersp.),1个菌株(PD3)为丛毛单胞菌(Comamonassp.).对假单胞菌(Pseudomonassp.)PD39菌株的酚降解特性、最适生长条件、降解底物的范围、儿茶酚1,2-双加氧酶(C12O)和儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)活性、含酚废水的生物处理等,进行了详细研究.结果表明,PD39菌株的最适生长和降解条件是,培养基的起始pH为7.0,培养温度为30℃,酚浓度为800 mg/L,对酚的最大降解浓度为1 200 mg/L.酚浓度为637 mg/L的工业废水经72 h处理酚的去除率达到99.96%.PD39菌株有很好的应用潜力来作含酚废水活性污泥处理系统的强化菌株.

关键词：酚生物降解假单胞菌PD39 废水生物处理

恶臭假单胞菌ND6菌株catA基因的克隆和表达及其儿茶酚裂解途径探讨

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微生物学报 2007年第3期47卷 387-391页

作者：赵化冰陈威蔡宝立南开大学生命科学学院天津300071 南开大学环境科学与工程学院天津300071

恶臭假单胞菌ND6菌株的萘降解质粒pND6-1中编码儿茶酚1,2-双加氧酶的catA基因在大肠杆菌中进行了克隆和表达,并研究表达产物的酶学性质。结果表明:酶的Km为0.019μmol/L,Vmax为1.434μmol/(***);具有很好的耐热性,在50℃保温45min后仍... 详细信息

恶臭假单胞菌ND6菌株的萘降解质粒pND6-1中编码儿茶酚1,2-双加氧酶的catA基因在大肠杆菌中进行了克隆和表达,并研究表达产物的酶学性质。结果表明:酶的Km为0.019μmol/L,Vmax为1.434μmol/(***);具有很好的耐热性,在50℃保温45min后仍能够保留酶活力的93.7%;Fe2+对酶活性有显著的促进作用,其比活力是对照反应的292%;酶对4-氯儿茶酚的催化活性非常低,属于Ⅰ型儿茶酚1,2-双加氧酶。以萘为底物生长时,ND6菌株的细胞提取液中既存在催化邻位裂解途径的儿茶酚1,2-双加氧酶活性,也存在催化间位裂解途径的儿茶酚2,3-双加氧酶活性。以苯甲酸、对羟基苯甲酸和苯乙酸为唯一碳源生长时,ND6菌株细胞提取液的儿茶酚1,2-双加氧酶活性远远大于儿茶酚2,3-双加氧酶活性。表明ND6菌株既能通过儿茶酚间位裂解途径降解萘,也能通过儿茶酚邻位裂解途径降解萘,而以苯甲酸、对羟基苯甲酸和苯乙酸为诱导物时只利用儿茶酚邻位裂解途径。

关键词：恶臭假单胞菌ND6 儿茶酚1,2-双加氧酶 catA 儿茶酚邻位裂解途径

一种通过资源和操作进行权限控制的TMN安全方案

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计算机工程 2003年第22期29卷 98-100页

作者：赵化冰赵小宝芦东昕中兴通讯公司成都研究所成都610041

TMN(Telecommunication Management Network，电信管理网)是ITU-T提出的关于电信网络管理的解决方案，该文简单介绍了TMN的体系结构，并提出了一种针对资源和操作进行权限控制的TMN安全管理方案。

关键词：电信管理网安全管理权限

沙门菌MALDI-TOF-MS标准菌库的建立及应用研究

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卫生研究 2014年第1期43卷 40-46页

作者：胡骁林肖惠佟巍张丽张国辉赵化冰中国人民武装警察部队后勤学院天津市职业与环境危害防制重点实验室天津300162 国家食品安全风险评估中心

目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)构建标准沙门菌株数据库。方法利用MALDI-TOF-MS对21株标准沙门菌进行质谱数据采集,建立标准菌株数据库。相关菌株质谱数据通过菌株在相同培养环境不同培养时间下所得质谱数据... 详细信息

目的利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)构建标准沙门菌株数据库。方法利用MALDI-TOF-MS对21株标准沙门菌进行质谱数据采集,建立标准菌株数据库。相关菌株质谱数据通过菌株在相同培养环境不同培养时间下所得质谱数据进行优化。通过血清型鉴定方法筛选出200株野生沙门菌,并利用自建数据库和现有数据库对200株野生沙门菌进行MALDI-TOF-MS检测,对自建数据库进行评价。结果 Bruker原有数据库、自建数据库及合并数据库对200株野生沙门菌鉴定,阳性率分别为87.5%、97.0%、97.5%。21株标准沙门菌株数据库按亲缘关系远近可分为3大类。主成分分析发现不同菌种之间质谱数据有一定的差异,个别菌种在不同培养条件下培养,质谱数据变化不明显。结论本研究建立的标准菌库对野生沙门菌的鉴定准确性高,适用于实际检测。研究结果丰富了已有的数据库,同时也为其他细菌菌库的建立提供了很好的借鉴。

关键词：沙门菌基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定菌库建立

假单胞菌AD39菌株三嗪水解酶基因trzN的克隆、表达和酶鉴定

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南开大学学报（自然科学版） 2012年第6期45卷 1-6页

作者：赵雅芳赵化冰孙素菊蔡宝立中国人民武装警察部队后勤学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室天津300162 河北医科大学公共卫生学院河北石家庄050017 南开大学生命科学学院天津300071

来自***39菌株的三嗪水解酶TrzN,能催化除草剂阿特拉津的水解脱氯反应,将阿特拉津转化成羟基阿特拉津.AD39菌株的TrzN以组氨酸标签蛋白的形式在大肠杆菌中表达,重组蛋白用镍柱亲和层析法纯化.纯化的TrzN蛋白能以阿特拉津、阿特拉通、杀... 详细信息

来自***39菌株的三嗪水解酶TrzN,能催化除草剂阿特拉津的水解脱氯反应,将阿特拉津转化成羟基阿特拉津.AD39菌株的TrzN以组氨酸标签蛋白的形式在大肠杆菌中表达,重组蛋白用镍柱亲和层析法纯化.纯化的TrzN蛋白能以阿特拉津、阿特拉通、杀草净、扑草净、莠灭净和西玛津等6种三嗪类除草剂为催化底物,其中对莠灭净的催化活力最高.酶学实验表明,催化反应的最适pH为8.0,Co2+、Fe2+、Ca2+、Mg2+和Mn2+等金属离子对TrzN有激活作用,Zn2+、Cu2+和Ni2+等金属离子对TrzN的酶活力有抑制作用.酶动力学实验显示,TrzN蛋白的Km为41.47μmol.L-1,Vmax为2.48μ***-1mg-1.

关键词：假单胞菌AD39 trzN表达三嗪水解酶酶学性质酶动力学

恶臭假单胞菌ND6菌株中与萘降解相关的新型水杨醛脱氢酶NahV

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科学通报 2007年第11期52卷 1257-1262页

作者：赵化冰李永君陈威蔡宝立南开大学微生物学系南开大学环境科学与工程学院天津300071

在大肠杆菌中表达了Pseudomonas putida ND6菌株中与萘降解有关的水杨醛脱氢酶同工酶NahV,并对其酶学性质进行了研究.结果表明,NahV与ND6菌株中经典的水杨醛脱氢酶NahF的氨基酸序列同源性较低,是一种新的水杨醛脱氢酶.对NahV和NahF的酶... 详细信息

在大肠杆菌中表达了Pseudomonas putida ND6菌株中与萘降解有关的水杨醛脱氢酶同工酶NahV,并对其酶学性质进行了研究.结果表明,NahV与ND6菌株中经典的水杨醛脱氢酶NahF的氨基酸序列同源性较低,是一种新的水杨醛脱氢酶.对NahV和NahF的酶动力学研究结果表明,NahF具有更高的催化效率,而NahV对水杨醛和NAD+的亲和力更强.ND6菌株的NahV和NahF都有较宽的底物范围,可以催化水杨醛、5-氯水杨醛、甲醛、间硝基苯甲醛、邻硝基苯甲醛、邻甲氧基苯甲醛、戊二醛、辛醛和乙二醛的脱氢反应,但对不同底物的催化效率不同.Fe2+,Cu2+和Zn2+对NahV有激活作用,而NahF只能被Fe2+激活.NahF具有更好的热稳定性,在50℃保温30min仍有72.8%的酶活力,而NahV则丧失了88.8%的酶活力.DNA斑点杂交结果表明,类nahF基因在本研究检测的两种来源的萘降解细菌中都存在,而类nahV基因只存在于一种来源的萘降解细菌中.

关键词： Pseudomonas putida ND6萘降解质粒 pND6-1 水杨醛脱氢酶 NahV DNA杂交

用实时定量PCR方法测定萘降解质粒pND6-1的拷贝数

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南开大学学报（自然科学版） 2010年第5期43卷 109-112页

作者：李珊珊李霞赵化冰蔡宝立南开大学微生物学系和生物活性材料教育部重点实验室天津300071 辽宁大学环境学院辽宁沈阳110036 中国人民武装警察部队医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室天津300162

Pseudomonas putida ND6是一个高效降解萘的菌株,含有101 858 bp的萘降解质粒pND6-1.用实时定量PCR方法测定了Pseudomonas putida ND6菌株中pND6-1的拷贝数为2.这是第一个测定分子大小超过100 kb的细菌大质粒拷贝数的报道.

关键词： Pseudomonas putida ND6 pND6-1 实时定量PCR 质粒拷贝数

萘和苯酚降解菌中儿茶酚2,3-双加氧酶基因的类似性分析及杂种酶构建

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南开大学学报（自然科学版） 2008年第4期41卷 36-41页

作者：赵化冰杨健任何山李永君蔡宝立南开大学微生物学系

从7个萘降解菌株和5个苯酚降解菌株中经PCR扩增得到12个儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)基因,大小均为924bp.根据DNA序列的类似性,可将这12个C23O基因聚类为3组,此结果与分离菌株的样本来源基本一致.这12个基因均编码307个氨基酸残基的儿茶酚2... 详细信息

从7个萘降解菌株和5个苯酚降解菌株中经PCR扩增得到12个儿茶酚2,3-双加氧酶(C23O)基因,大小均为924bp.根据DNA序列的类似性,可将这12个C23O基因聚类为3组,此结果与分离菌株的样本来源基本一致.这12个基因均编码307个氨基酸残基的儿茶酚2,3-双加氧酶,序列中都含有9个严格保守的氨基酸残基(Gly30、His153、Leu172、His199、His214、His246、Tyr255、Pro259、Glu265),均属于外切双加氧酶的I.2.A亚家族.通过盒式PCR,用各种萘和苯酚降解菌的C23O基因中心区替换恶臭假单胞菌ND6菌株pND6-1质粒中nahH基因的中心区,得到5个杂种C23O基因,这些基因在*** BL21(DE3)系统中表达以后,均能检测到C23O活性,其中中心区来自假单胞菌ND24菌株C23O基因的杂种酶C23O-ND24,其比活力高于对照恶臭假单胞菌ND6菌株的野生型C23O.

关键词：萘降解菌苯酚降解菌儿茶酚2,3-双加氧酶基因类似性分析杂种酶