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累及消化系统的多原发癌20例临床分析

中国实用内科杂志 2009年第8期29卷 743-744页

作者：叶振刘文天王邦茂赵兴卉姜葵张洁方维丽天津医科大学总医院消化科天津300052 中国军事医学科学院微生物研究所

随着老龄人口的增多和诊断技术的进步,多原发癌已变得更加常见.早期发现第二原发癌进行根治性治疗而识别多原发癌的特征十分重要.消化系统是包括多个器官,其发生多器官多原发癌较为常见.本文对近4年来我科收治的20例至少有一个原发癌累... 详细信息

随着老龄人口的增多和诊断技术的进步,多原发癌已变得更加常见.早期发现第二原发癌进行根治性治疗而识别多原发癌的特征十分重要.消化系统是包括多个器官,其发生多器官多原发癌较为常见.本文对近4年来我科收治的20例至少有一个原发癌累及消化系器官的多原发癌进行分析,以提高其诊断和治疗水平.

关键词：多原发癌诊断治疗

EV71抑制Ⅰ型干扰素信号通路中ISGF3的核转位

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军事医学 2013年第10期37卷 734-736,744页

作者：刘颖赵兴卉张晓鹏于蕊吴诗坡张哲戴萌萌付玲侯利华军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染对Ⅰ型干扰素信号通路中核转位复合物干扰素刺激基因因子3(ISGF3)核转位的影响。方法 Western印迹检测VR1432感染VeroE6对干扰素诱导的STAT1和STAT2磷酸化的影响。将pEGFP-C1-STAT1重组... 详细信息

目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染对Ⅰ型干扰素信号通路中核转位复合物干扰素刺激基因因子3(ISGF3)核转位的影响。方法 Western印迹检测VR1432感染VeroE6对干扰素诱导的STAT1和STAT2磷酸化的影响。将pEGFP-C1-STAT1重组质粒转染Vero E6细胞,随后进行EV71感染以及IFN-α2b刺激,将细胞进行亚细胞分离检测ISGF3的核转位情况。结果 VR1432以感染复数(MOI)为1感染Vero E6细胞后未影响干扰素刺激的STAT1和STAT2的磷酸化;亚细胞分离后Western印迹检测磷酸化的STAT1,结果显示VR1432感染后,p-STAT1在细胞核内表达水平明显降低,说明EV71感染抑制了p-STAT1的核转位。结论 EV71感染抑制Ⅰ型干扰素信号通路中ISGF3(STAT1/STAT2/IRF9)的核转位,从而影响干扰素效应途径中抗病毒蛋白的表达。

关键词：肠道病毒71型 ISGF3 干扰素I型信号通路核转位

一种特异识别SV40启动子的人工转录因子的构建

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生物工程学报 2003年第5期19卷 608-612页

作者：赵兴卉朱旭东刘娟饶相君黄培堂北京生物工程研究所北京100071

转录因子是真核表达调控中非常重要的一类反式作用因子 ,通常由DNA结合域与效应域两部分组成 ,而锌指结构是DNA结合域的常见组成单元。人工转录因子就是基于转录因子的这种结构特点 ,人为地选择针对特定序列的DNA结合域与具有特定作用... 详细信息

转录因子是真核表达调控中非常重要的一类反式作用因子 ,通常由DNA结合域与效应域两部分组成 ,而锌指结构是DNA结合域的常见组成单元。人工转录因子就是基于转录因子的这种结构特点 ,人为地选择针对特定序列的DNA结合域与具有特定作用的效应域组合而成。利用噬菌体展示技术 ,筛选到与SV4 0启动子上 9bp序列特异结合的锌指结构 ,再连接KOX1的KRAB域构建了一种人工转录因子。转染实验表明它对SV4 0下游的报告基因的表达有很显著的抑制作用。

关键词： SV40启动子人工转录因子锌指真核表达调控

Sos恢复系统——一种新型的酵母双杂交系统

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生命的化学 2004年第1期24卷 69-70页

作者：赵兴卉朱旭东黄培堂北京生物工程研究所北京100071

Sos恢复系统是一种新型的不依赖转录激活机制的酵母双杂交系统 ,原理是通过蛋白质的相互作用将Sos富集在细胞膜上激活Ras信号通路 ,使得酵母温度敏感缺陷株可以在限制温度下生长。与传统的酵母双杂交系统相比 ,Sos恢复系统的主要优点在... 详细信息

Sos恢复系统是一种新型的不依赖转录激活机制的酵母双杂交系统 ,原理是通过蛋白质的相互作用将Sos富集在细胞膜上激活Ras信号通路 ,使得酵母温度敏感缺陷株可以在限制温度下生长。与传统的酵母双杂交系统相比 ,Sos恢复系统的主要优点在于被研究的蛋白质的相互作用发生在胞质而不是核中 ;而且 ,它更适合研究转录因子以及在胞质中行使生理功能的蛋白质。Sos恢复系统克服了传统的酵母双杂交系统的一些限制 ,大大拓展了酵母双杂交技术的应用范围。

关键词：酵母双杂交 Sos恢复系统 Ras信号通路膜定位信号

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中国仓鼠卵巢细胞及其表达载体的改造

生物技术通讯 2007年第5期18卷 852-855页

作者：郭俊伟赵兴卉陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214)

哺乳动物细胞因其表达的外源蛋白最接近天然构象,已成为生产重组蛋白药物的理想系统。其中,中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是目前最为常用的表达系统,但这种系统也存在很多缺点,如大规模培养中表达量低、生产成本高、细胞无限度增殖及细胞凋亡... 详细信息

哺乳动物细胞因其表达的外源蛋白最接近天然构象,已成为生产重组蛋白药物的理想系统。其中,中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是目前最为常用的表达系统,但这种系统也存在很多缺点,如大规模培养中表达量低、生产成本高、细胞无限度增殖及细胞凋亡等。目前,通过优化培养基配方和培养条件很难从根本上解决上述问题,必须从整个表达系统着手进行改造,其中CHO细胞本身和表达载体的改造最为关键。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞细胞凋亡无血清培养基细胞周期启动子位置效应

TAT蛋白质转导结构域与SV40启动子特异的三锌指结构融合蛋白的表达与纯化

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生物技术通讯 2005年第1期16卷 22-24页

作者：赵兴卉朱旭东吴国清黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071

利用蛋白质转导结构域(PTDs)可以将与之融合表达的蛋白质直接送入细胞中。将通过筛选噬菌体展示锌指文库得到的特异作用于SV40启动子上9bp序列的三锌指结构的序列插入含有TAT蛋白的蛋白质转导结构域的表达载体pET-TAT-NLS中,构建融合蛋... 详细信息

利用蛋白质转导结构域(PTDs)可以将与之融合表达的蛋白质直接送入细胞中。将通过筛选噬菌体展示锌指文库得到的特异作用于SV40启动子上9bp序列的三锌指结构的序列插入含有TAT蛋白的蛋白质转导结构域的表达载体pET-TAT-NLS中,构建融合蛋白的表达载体pET-TAT-NLS-clone3。融合蛋白在***21(DE3)中得到了可溶性表达,含量约占总蛋白的18%;并通过镍亲和凝胶层析柱得到了较好的纯化融合蛋白。

关键词： TAT 蛋白质转导结构域 SV40启动子三锌指结构融合蛋白可溶性表达纯化

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大肠杆菌RNaseⅢ基因的克隆与表达

生物技术通讯 2008年第4期19卷 532-534页

作者：解岩郭俊伟赵兴卉陈薇北京微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214)北京100071

目的:克隆并在原核表达系统中表达RNaseⅢ基因。方法:提取大肠杆菌JM109株的基因组DNA,以之为模板扩增得到RNaseⅢ基因全序列,将该编码序列克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组RNaseⅢ表达。结果与结论... 详细信息

目的:克隆并在原核表达系统中表达RNaseⅢ基因。方法:提取大肠杆菌JM109株的基因组DNA,以之为模板扩增得到RNaseⅢ基因全序列,将该编码序列克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组RNaseⅢ表达。结果与结论:在大肠杆菌中克隆到了RNaseⅢ的全基因,经测序证明与数据库中报道的序列一致;表达的重组RNaseⅢ主要以包涵体形式存在。

关键词： RNaseⅢ 基因克隆原核表达

NF-κB与基质金属蛋白酶在骨髓单个核细胞心肌移植后的变化

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第6期13卷 1113-1117页

作者：任崇雷高长青赵兴卉李力兵郭俊伟叶卫华刘志勇解放军总医院心血管外科全军心脏外科研究所北京市100853 解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京市100853

背景:骨髓干细胞能够修复受损心肌,改善不利的心室重构及恶化的心功能,但细胞移植后对梗死心室重构影响的分子机制仍不清楚。目的:观察骨髓单个核细胞心肌移植后,心肌组织NF-κB、基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的变化。设计、时间及地... 详细信息

背景:骨髓干细胞能够修复受损心肌,改善不利的心室重构及恶化的心功能,但细胞移植后对梗死心室重构影响的分子机制仍不清楚。目的:观察骨髓单个核细胞心肌移植后,心肌组织NF-κB、基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-07/2007-05在解放军总医院心血管外科实验动物中心和解放军军事医学科学院病原微生物生物安全国家重点实验室完成。材料:成年健康雄性杂种犬24只,随机分为急性心肌梗死对照组、急性心肌梗死移植组、陈旧心肌梗死对照组、陈旧心肌梗死移植组,6只/组。方法:急性心肌梗死对照组、急性心肌梗死移植组在冠状动脉左前降支主干结扎1h,观察缺血梗死区仍然呈暗红色,确认急性心肌梗死模型建立成功。陈旧心肌梗死对照组、陈旧心肌梗死移植组在移植前行超声心动图检查,证实左室前壁和心尖部可见节段性室壁运动异常,确认陈旧心肌梗死模型建立成功。Ficoll分离法获得犬自体骨髓单个核细胞悬液,急性心肌梗死移植组在造模后1h于梗死区及梗死边缘区分多点注射细胞悬液,每点注射0.5mL,(1～2)×107个细胞/mL;陈旧心肌梗死移植组于造模后4周开胸确认梗死区,同法行细胞移植。主要观察指标:RT-PCR法检测心肌组织基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA的表达,Western免疫印迹法检测心肌组织NF-κB的表达。结果:移植后6周与相应对照组比较,急性心肌梗死移植组、陈旧心肌梗死移植组的梗死区、梗死周围区基质金属蛋白酶2,9mRNA及NF-κB表达均显著降低(P<0.01),基质金属蛋白酶抑制因子1,2mRNA表达均显著升高(P<0.01)。结论:犬自体骨髓单个核细胞心肌移植可能通过抑制NF-κB活化,导致基质金属蛋白酶mRNA表达减少及其抑制因子mRNA表达增加,从而抑制梗死后心室重构过程。

关键词：骨髓单个核细胞心室重构心肌梗死核转录因子基质金属蛋白酶

通过共表达转铁蛋白和细胞周期蛋白D1改造CHO细胞株

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生物技术通讯 2012年第5期23卷 676-679页

作者：付玲赵兴卉郭俊伟于婷宋小红侯利华陈薇军事医学科学院生物工程研究所病原微生物生物安全国家重点实验室(2004DAV00214)

目的:对现有的CHO-DG44细胞株进行改造,得到在无血清培养基中更具生长优势的CHO宿主细胞株。方法:分别克隆转铁蛋白和细胞周期蛋白D1基因,构建共表达2种基因的pIRES质粒,转染CHO-DG44细胞株,筛选G418抗性克隆。结果与结论:得到3株G418... 详细信息

目的:对现有的CHO-DG44细胞株进行改造,得到在无血清培养基中更具生长优势的CHO宿主细胞株。方法:分别克隆转铁蛋白和细胞周期蛋白D1基因,构建共表达2种基因的pIRES质粒,转染CHO-DG44细胞株,筛选G418抗性克隆。结果与结论:得到3株G418阳性克隆株,其中转铁蛋白和细胞周期蛋白D1表达水平最高的S6与CHO-DG44相比,在无血清培养基中生长更快、密度更高。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞代谢工程转铁蛋白细胞周期蛋白D1