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弓形虫慢性感染动物模型的研究

弓形虫慢性感染动物模型的研究

作者：赖植发第一军医大学

学位级别：硕士

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生的机会性致病原虫，能引起人兽共患的弓形虫病(Toxoplasmosis)，弓形虫宿主非常广泛，但不同的动物对弓形虫的易感性、感染后的症状及转归均有不同。选择适宜的动物建立模型，关系着研究... 详细信息

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生的机会性致病原虫，能引起人兽共患的弓形虫病(Toxoplasmosis)，弓形虫宿主非常广泛，但不同的动物对弓形虫的易感性、感染后的症状及转归均有不同。选择适宜的动物建立模型，关系着研究工作的成败。弓形虫自然感染多表现为隐性感染，因此建立慢性感染状态的动物模型对人类弓形虫病的防治研究具有更大的实用价值。而且，缺乏良好的慢性感染动物模型，已成为目前弓形虫病诊断及疫苗评价等研究的重要制约因素之一，亟待解决。因此，探索建立弓形虫慢性感染动物模型，意义重大。弓形虫RH株是强毒株，小鼠对其极为敏感。小鼠腹腔或皮下接种感染后，未加治疗，可引起急性的致死性感染。因此，小鼠常作为弓形虫急性感染的动物模型。国内有人研究了大鼠在妊娠时感染不同虫株对其子代的影响，实验表明，与弱毒株Fukaya株相比，妊娠早中期感染强毒株RH株弓形虫，子鼠受到的不利影响更大。据报道，RH株速殖子经口感染小鼠，尽管消化道的酸、碱、酶等对游离的速殖子有一定的破坏杀灭作用，但一定数量的速殖子仍可通过消化道途径感染侵入肠道组织，且有些小鼠可不发生急性的致死性弓形虫感染。由于小鼠具有饲养方便、繁殖快、易于实验操作、经济等特点，因此，建立弓形虫RH强毒株慢性感染小鼠模型具有重要的实际意义。大鼠与人类感染弓形虫的情况比较接近，感染后也多表现为隐性(亚临床)感染。因而，大鼠模型能更好地模拟人类感染弓形虫后的状况，对研究人类弓形虫感染的免疫学作用、母婴传播，以及进行疫苗和诊断试剂的研发，意义重大。国内外有许多研究者运用大鼠进行弓形虫病的研究，但多选用一些弱毒株

关键词：动物模型弓形虫小鼠大鼠慢性感染一氧化氮

副溶血性弧菌临床分离株血清型、毒力基因和PFGE分子分型特征分析

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卫生研究 2013年第4期42卷 619-624页

作者：张勇赖植发周海涛李波陈润莉曾华书侯红斌深圳市福田区疾病预防控制中心深圳518040

目的分析从2007-2012年腹泻病例标本中分离的168株副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分子分型特征。方法采用血清学凝集实验,检测菌株的血清型别;采用实时荧光PCR方法,检测耐热性溶血毒素基因(tdh)和耐热性溶血毒素相关... 详细信息

目的分析从2007-2012年腹泻病例标本中分离的168株副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分子分型特征。方法采用血清学凝集实验,检测菌株的血清型别;采用实时荧光PCR方法,检测耐热性溶血毒素基因(tdh)和耐热性溶血毒素相关溶血毒素基因(trh);采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE),分析56株O3∶K6型副溶血性弧菌的基因分型特征。结果 (1)168株菌可分为14种血清型,主要血清型为O3∶K6(114,67.9%)、O4∶K8(25,14.9%)、O3∶K29(6,3.6%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株血清型构成不同,但优势血清型均为03∶K6。(2)168株菌可分为4种毒力基因类型,分别为tdh+trh-(161,95.8%)、tdh+trh+(3,1.8%)、tdh-trh+(1,0.6%)、tdh-trh-(3,1.8%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株毒力基因类型构成不同,但优势毒力基因类型均为tdh+trh-。(3)56株O3∶K6型副溶血性弧菌共有15种PFGE带型(P1～P15),相似度>86%,有10个带型分别有多株菌处于同一聚类(P1～P4、P6、P7、P9、P10、P12、P15)。结论副溶血性弧菌临床分离株以tdh+trh-的O3∶K6为主;O3∶K6型副溶血性弧菌临床分离株的PFGE条带型相似性度高,菌株间亲缘关系较近。

关键词：副溶血性弧菌毒力基因脉冲场凝胶电泳

埃及伊蚊浓核病毒(AaeDV)对致倦库蚊的致病性研究

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病毒学报 2017年第2期33卷 176-179页

作者：王衍海赖植发顾金保中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 深圳福田区疾病预防控制中心深圳518040 南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广东普通高校新发传染病防治重点实验室广州510515

致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)是西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒等重要的媒介。蚊浓核病毒(Mosquito densovirus,MDV)是特异性感染蚊类的病毒,对蚊虫具有明显的致病性。为研究MDV对致倦库蚊的致病效应,我们使... 详细信息

致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)是西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒等重要的媒介。蚊浓核病毒(Mosquito densovirus,MDV)是特异性感染蚊类的病毒,对蚊虫具有明显的致病性。为研究MDV对致倦库蚊的致病效应,我们使用不同浓度埃及伊蚊浓核病毒(Aedes aegypti densovirus,AaeDV)感染致倦库蚊不同发育阶段的幼虫、蛹与成蚊,测定其感染率与死亡率,结果证实AaeDV对致倦库蚊1~2龄幼虫、3~4龄幼虫、蛹和雌雄成蚊的感染率分别为93.33%±2.49%、66%±3.74%、2.67%±0.94%、23.33%±3.40%和24.00%±1.63%,感染率与其发育阶段有关而与性别无关。AaeDV对幼虫的杀伤效果具有剂量依赖性,且与发育阶段有关,在1×1011拷贝/mL浓度下,新孵化龄幼虫和3~4龄幼虫的死亡率高达95.33%±0.74%和61.67%±2.07%。因此AaeDV对致倦库蚊具有生物防制的潜在价值。

关键词：致倦库蚊埃及伊蚊浓核病毒生物杀虫剂

接受高效抗逆转录病毒疗法的HIV感染者内脏利什曼病的复发频率

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国外医学（寄生虫病分册） 2005年第3期32卷 144-144,F003页

作者：赖植发

深圳市福田区白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗性调查

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中华卫生杀虫药械 2023年第1期29卷 18-20页

作者：陈建忠石向辉范苏云曾宇苑赖植发深圳市福田区疾病预防控制中心广东深圳518040

目的了解深圳市福田区白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗性,为防治工作提供参考。方法采用幼虫浸渍法和成蚊生测桶接触法分别测定幼虫和成蚊抗药性。结果2016年和2019年福田区白纹伊蚊成蚊对0.03%溴氰菊酯、4%DDT、0.1%噁虫威的生测死亡率分别为... 详细信息

目的了解深圳市福田区白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗性,为防治工作提供参考。方法采用幼虫浸渍法和成蚊生测桶接触法分别测定幼虫和成蚊抗药性。结果2016年和2019年福田区白纹伊蚊成蚊对0.03%溴氰菊酯、4%DDT、0.1%噁虫威的生测死亡率分别为66.1%和44.7%,47.3%和32.0%以及66.8%和71.0%,表现为抗性;对0.8%马拉硫磷生测死亡率分别为99.9%和100.0%,呈敏感性。2016年和2019年福田区白纹伊蚊幼虫对溴氰菊酯、DDT和噁虫威的抗性倍数分别为30和95,9.93和12.74,7.37和11.20倍,抗性呈升高趋势;对马拉硫磷抗性倍数为1.56和1.63倍,均呈敏感性。结论深圳市福田区白纹伊蚊对常用杀虫剂存在不同程度的抗性,且呈上升趋势。

关键词：白纹伊蚊杀虫剂抗性生测

EVaGreen实时荧光PCR法检测人类双埃可病毒

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中国卫生检验杂志 2013年第6期23卷 1462-1464页

作者：曾华书周海涛候红斌陈润莉张勇赖植发广东省深圳市福田区疾病预防控制中心检验科广东深圳518040

目的:构建实时荧光PCR法以测定人类双埃可病毒RNA。方法:通过相关资料自行设计合成人类双埃可病毒引物,将病毒RNA进行反转录之后,进行基于EVaGreen染料的实时荧光定量(Real-time)PCR扩增,通过高分辨率溶解曲线、核酸电泳及产物测序验证... 详细信息

目的:构建实时荧光PCR法以测定人类双埃可病毒RNA。方法:通过相关资料自行设计合成人类双埃可病毒引物,将病毒RNA进行反转录之后,进行基于EVaGreen染料的实时荧光定量(Real-time)PCR扩增,通过高分辨率溶解曲线、核酸电泳及产物测序验证PCR结果。结果:对该病毒保守区约260BP片段扩增成功,测序证实为人双埃可病毒序列,建立了该病毒EVaGreen实时荧光PCR检测方法。结论:为人类双埃可病毒的检测提供了一种快速简便的方法。

关键词：实时荧光聚合酶链反应人双埃可病毒高分辨率熔解曲线

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钩端螺旋体病检测技术的研究进展

热带医学杂志 2007年第12期7卷 1230-1232页

作者：赖植发陈守义深圳市福田区疾病预防控制中心深圳518040 广州市疾病预防控制中心广州510080

钩端螺旋体病临床症状复杂、多样,早期容易误诊,实验室诊断在该病的防治工作中极为重要。目前应用的实验诊断方法较多,有病原学检测、血清学检测、分子生物学检测等,本文对目前应用的检测技术作一综述。

关键词：钩端螺旋体酶联免疫吸附试验 PCR

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氯酚红光度法测定饮用水中残余二氧化氯

现代预防医学 1999年第3期26卷 325-327页

作者：李崇福张克荣赖植发华西医科大学公共卫生学院!成都 610041

本文报告了一种间接测定饮用水中残余二氧化氨含量的方法：在酸性条件下二氧化氨氧化氯酚红，游离氯不氧化氯酚红，剩余在氯酚红在碱性介质中呈现紫红色，该有色物在574．8nm下有最大吸收，二氧化氯含量在（0～0．8）mg／L内吸光义与含... 详细信息

本文报告了一种间接测定饮用水中残余二氧化氨含量的方法：在酸性条件下二氧化氨氧化氯酚红，游离氯不氧化氯酚红，剩余在氯酚红在碱性介质中呈现紫红色，该有色物在574．8nm下有最大吸收，二氧化氯含量在（0～0．8）mg／L内吸光义与含量呈线性。游离性余筑和氯化物不干扰测定。本法检出限为0．09mg／L，对0．1mg／L标准的RSD（n＝8）为6．2％，人工合成样品含量0．6mg／L的RSD（n＝8）为3．2％，加标回收率为95．6％～120．4％。本法简便快速，准确精密，适宜于饮用水中残余二氧化氨的测定。

关键词：饮用水分光光度法二氧化氯

白纹伊蚊感染登革病毒后病毒特异性piRNAs分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2014年第4期28卷 277-279页

作者：赖植发王衍海顾金保陈晓光深圳市福田区疾病预防控制中心 518040 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所南方医科大学公共卫生与热带医学学院

目的筛选并分析白纹伊蚊感染登革病毒后病毒特异性vsRNAs与vpiRNAs.方法白纹伊蚊羽化后2～4d雌性成蚊显微注射DENV-2病毒NGC株,对照组注射生理盐水.8d后提取样品总RNA,分离小RNA,通过illumina Hiseq 2000测序仪进行测序分析.以SOAP2... 详细信息

目的筛选并分析白纹伊蚊感染登革病毒后病毒特异性vsRNAs与vpiRNAs.方法白纹伊蚊羽化后2～4d雌性成蚊显微注射DENV-2病毒NGC株,对照组注射生理盐水.8d后提取样品总RNA,分离小RNA,通过illumina Hiseq 2000测序仪进行测序分析.以SOAP2软件与DENV-2基因组和互补序列进行比对.对病毒特异性的vsRNAs与vpiRNAs的长度、碱基与链偏好性、基因组分布进行分析.结果对于感染蚊虫,我们共计获得3835个特异的DENV-2来源的vsRNAs,其中395个特异性的vpiRNAs.94.99％ vpiRNAs主要来源于病毒的正链基因组.vpiRNAs在DENV-2基因组上的分布也具有偏向性,最高峰位于病毒非结构蛋白NS5编码区域的3＆#39;末端.第10位碱基具有较强的腺嘌呤偏好性,但第1位碱基不具有尿嘧啶偏好性;也无典型“乒乓”扩增循环的特征.结论白纹伊蚊感染登革病毒后,体内出现病毒特异性vsRNAs与vpiRNAs,对其鉴定与分析将为在白纹伊蚊抗病毒免疫研究提供理论基础.

关键词：登革热病毒伊蚊属