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人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体活性部位基因在毕赤酵母中的表达

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生物工程学报 2003年第2期19卷 163-167页

作者：徐红赖心田叶凯马辉文洪葵武汉大学药学院武汉430072 海南华康生物制品研究所海口570310 华南热带农业大学热带作物生物技术国家重点实验室海口571101

探讨了人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体 (TRAIL)生物活性部分在巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)中的分泌表达。由于TRAIL活性部位区第 149 15 0氨基酸含有一个Kex2位点 ,根据Pichiapastoris分泌表达的特点 ,对 149位氨基酸进行了改造 ,... 详细信息

探讨了人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体 (TRAIL)生物活性部分在巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)中的分泌表达。由于TRAIL活性部位区第 149 15 0氨基酸含有一个Kex2位点 ,根据Pichiapastoris分泌表达的特点 ,对 149位氨基酸进行了改造 ,使其编码的氨基酸由Arg突变为Lys。这样使TRAIL在分泌的过程中不被Kex2切割 ,保证了片段的完整。序列分析正确后 ,将编码TRAIL的可溶区的基因片段插入到酵母表达载体pPIC9K中 ,使之位于α 因子信号肽下游 ,且与之同框 ,构建分泌型表达载体pPIC9K TRAIL。采用原生质体法将重组质粒转化Pichiapastoris菌株GS115 ,获基因工程菌株Pichiapastoris(pPIC9K TRAIL)。将工程菌用甲醇诱导培养 3～ 4d ,对摇瓶发酵的培养上清进行SDS PAGE、Westernblot分析和体外生物活性检测 ,结果发现发酵液中分子量约为 19kD和 38kD的蛋白质能被TRAIL多克隆抗体特异性识别 ,且具有在体外诱导肿瘤细胞凋亡的活性。通过薄层扫描分析显示目的蛋白最高可占可溶性总蛋白的 36 %。上述实验结果表明 ,在Pichiapastoris中表达的TRAIL能以寡聚体的形式存在并且具有生物学活性。

关键词：表达寡核苷酸介导突变作用巴斯德毕赤酵母人类肿瘤坏死因子凋亡配体

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马尾藻冰淇淋的研制

食品工业科技 1998年第2期 49-50页

作者：周文化李枚秋赖心田王楷华南热带农业大学工学院

对马尾藻食品加工中的汁液提取和脱腥进行研究，在此基础上，对马尾藻冰淇淋的加工工艺进行了初步的研究。试验表明，用Ｎａ２ＣＯ３提取的马尾藻汁液经茉莉花茶脱腥后制成的成品风味较好。

关键词：马尾藻工艺汁液提取脱腥冰淇淋

食用植物油和地沟油中动物源性成分LAMP检测方法的建立

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现代食品科技 2015年第12期31卷 331-337页

作者：谭贵良刘垚李向丽赖心田张世伟中山市食品药品检验所广东中山528437 广东省中山市质量计量监督检测所广东中山528403 中山火炬职业技术学院广东中山528436 深圳市计量质量检测研究院广东深圳518109

建立了食用植物油和地沟油中动物源性成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。针对猪、牛、鸡、鸭的线粒体Cytb基因分别设计2条外引物(F3、B3)、2条内引物(FIP、BIP)和2条环引物(FLP、BLP),着重对内引物FIP/BIP、甜菜碱和Mg2+浓度等反应... 详细信息

建立了食用植物油和地沟油中动物源性成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。针对猪、牛、鸡、鸭的线粒体Cytb基因分别设计2条外引物(F3、B3)、2条内引物(FIP、BIP)和2条环引物(FLP、BLP),着重对内引物FIP/BIP、甜菜碱和Mg2+浓度等反应参数进行了优化,扩增产物采用恒温实时荧光法检测。对方法的特异性和灵敏度进行了评价。实验结果表明,在0.2μmol/L外引物(F3和B3)、1.6μmol/L内引物(FIP和BIP)、0.8μmol/L环引物(FLP和BLP)、1 mol/L甜菜碱、6 mmol/L Mg SO4、1.6 mmol/L d NTP、反应温度63℃等参数的优化条件下,上述四种物源性成分的扩增效果最佳,该方法可以检测出动物油脂质量比例为1%及地沟油质量比例为5%的混合油脂中的动物源性成分。本方法对猪、牛、鸡、鸭源性成份的检测具有很高的特异性和灵敏度,可以用于油脂中动物源性成分的检测,为油脂的鉴伪和地沟油的鉴别提供技术支持。

关键词：食用植物油地沟油环介导等温扩增动物源性成分 Cytb基因鉴别

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荧光微球免疫层析技术定量检测河鲀毒素

食品科学 2017年第20期38卷 312-317页

作者：张世伟王士峰姚添琪杨国武赖心田深圳市计量质量检测研究院广东深圳518102

建立河鲀毒素的荧光微球免疫层析检测方法。基于抗体亲和位点保护标记方法制备抗河鲀毒素抗体偶联荧光微球,方法简单稳定,所有结合分离步骤均在亲和柱中完成,避免了亲和位点被破坏而且荧光信号更强,将检测灵敏度提高至原来的8倍左右。... 详细信息

建立河鲀毒素的荧光微球免疫层析检测方法。基于抗体亲和位点保护标记方法制备抗河鲀毒素抗体偶联荧光微球,方法简单稳定,所有结合分离步骤均在亲和柱中完成,避免了亲和位点被破坏而且荧光信号更强,将检测灵敏度提高至原来的8倍左右。所建立的河鲀毒素检测方法IC50为18.4 ng/m L,线性范围为2~200 ng/m L(y=-0.15ln x+0.95,R2=0.98)。检测河鲀样本的最低检出限为10μg/kg,平均相对标准偏差小于25%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需15 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前速测提供了一定技术手段。

关键词：河鲀毒素亲和位点保护荧光微球免疫层析

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两株对虾育苗用益生芽孢杆菌的筛选和鉴定

水生生物学报 2007年第4期31卷 453-459页

作者：温崇庆赖心田何红薛明周世宁广东海洋大学水产学院湛江524088 中山大学生命科学学院广州510275 广东海洋大学农学院湛江524088

从土壤和虾池中分离到22株具有不同特征的芽孢杆菌,分别将各菌株对数期约5×108个细胞添加到500mL预先加有凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)无节Ⅲ期幼体的水体中,各菌株在初始水体中含量均约为106个细胞/mL,根据各菌株对无节Ⅲ期到蚤... 详细信息

从土壤和虾池中分离到22株具有不同特征的芽孢杆菌,分别将各菌株对数期约5×108个细胞添加到500mL预先加有凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)无节Ⅲ期幼体的水体中,各菌株在初始水体中含量均约为106个细胞/mL,根据各菌株对无节Ⅲ期到蚤状Ⅱ期幼体变态成活率的影响,从中初步筛选出10株对幼体变态成活有极显著(p<0.01)效果的芽孢杆菌。进一步又从初筛到的10个菌株中复筛到2株对幼体变态成活最为明显的芽孢杆菌,菌株zou4和zou8。两菌株与复筛的其他8株芽孢杆菌相比,均显著(p<0.05)促进幼体变态存活率。根据形态和生理生化特征,菌株zou4和zou8分别初步鉴定为坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)和蜡状芽孢杆菌(***)。为进一步确定zou4和zou8的分类地位,测定了两菌株的16S rRNA基因序列,分析了相关细菌16S rDNA序列的同源性,构建了系统发育树。结果表明菌株zou4和zou8分别与坚强芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的同源性最高,相似值均为99%以上。系统发育树上zou4和zou8也分别与坚强芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌聚为一类。综合上述结果,芽孢杆菌zou4和zou8菌株分别被鉴定为坚强芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌。

关键词：益生菌芽孢杆菌筛选鉴定凡纳滨对虾幼体

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溶壁微球菌对溶菌酶活性检测的影响

食品科技 2013年第3期38卷 296-301页

作者：林霖张宇兰全学严琼英陈晶赖心田杨国武深圳市计量质量检测研究院深圳518131

溶菌酶在基础研究领域、医药保健和食品工业中有着广泛的应用。采用以溶壁微球菌(Micrococcus Lysodeikticus)为底物的比色法为溶菌酶活性检测主要方法,且为食品添加剂专家联合委员会推荐方法。由于国内检测标准的缺乏,各个厂家均采用... 详细信息

溶菌酶在基础研究领域、医药保健和食品工业中有着广泛的应用。采用以溶壁微球菌(Micrococcus Lysodeikticus)为底物的比色法为溶菌酶活性检测主要方法,且为食品添加剂专家联合委员会推荐方法。由于国内检测标准的缺乏,各个厂家均采用自己的一套检测方法,酶活性单位定义各不相同,使用时其效果也各不相同。其中由于不同生长阶段细菌细胞壁状态不同,因此方法中底物状态对检测结果影响最大。通过采用不同增菌时间、不同浓度的溶壁微球菌作为底物进行检测,摸索出一套稳定的用于制备溶菌酶活性检测底物(溶壁微球菌悬液)的方法。若采用此套标准化程序可实现规范各厂家溶菌酶活性检测方法,并为溶菌酶活性检测方法国家标准制定提供参考。

关键词：溶壁微球菌溶菌酶活性检测食品

甲醇毕赤氏酵母在基因工程药物研发中的重要作用

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甲醇毕赤氏酵母在基因工程药物研发中的重要作用

人胰岛素样生长因子Ⅰ在毕赤氏酵母中的表达研究

中国科协2001年学术年会

作者：周鹏赖心田洪葵中国热带农科院生物技术国家重点实验室

甲醇毕赤氏酵母***,酵母系统是一种可代替酿酒酵母的新型表达系统,它不仅具有原核生物生长快、操作简便和类似各哺乳类细胞的翻译后加工和修饰的功能等特点,而且具有高效分泌表达、高密度培养等大肠杆菌原核

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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药物生物技术 2002年第3期9卷 133-136页

作者：赖心田周鹏洪葵热带作物生物技术国家重点实验室华南热带农业大学海口校区海口城西571101

利用PCR定点突变技术对人胰岛素样生长因子（huIGF-I）基因进行改造,克隆到pGEMT载体测序。并构建酵母表达载体pGaAIGF-I,转化毕赤氏酵母GS115。摇瓶发酵4d后,检测表达水平占可溶性总蛋白的15％以上,且表现出较好细胞增殖活性。

关键词：人胰岛素样生长因子毕赤氏酵母 PCR定点突变技术

羽绒中亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌荧光PCR检测方法研究

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纺织导报 2017年第1期 96-98页

作者：何永盛林霖赖心田王坤吴佳辉陈国培深圳市计量质量检测研究院

现有标准对羽绒服装产品中亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的检测存在检测周期长、结果缺乏确证手段等不足之处,需要建立更为快速准确的检测方法进行补充和完善。本研究建立了可用于亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌鉴定的实时荧光PCR检测方法,并对... 详细信息

现有标准对羽绒服装产品中亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌的检测存在检测周期长、结果缺乏确证手段等不足之处,需要建立更为快速准确的检测方法进行补充和完善。本研究建立了可用于亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌鉴定的实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性和检出限进行了分析验证,结果显示建立的方法具有良好的特异性,检出限为20 CFU/m L。在50批次样品检测中,本研究建立的方法与国标检测方法具有较好的一致性,可以应用于羽绒服装样品的日常检测。

关键词：羽绒亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌实时荧光PCR