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抗肉毒神经毒素A(BoNT/A)单克隆抗体的制备与鉴定(英文)

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第1期20卷 83-85页

作者：王景林康琳贾宏丽军事医学科学院微生物流行病研究所全军微生物检测研究中心北京100071

目的 :制备抗肉毒毒素A(BoNT/A)的单克隆抗体 (mAb)。方法 :用纯化的重组BoNT/A Hc片段免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤Sp2 /0融合 ,经间接ELISA筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系 ,及Western免疫印迹分析等方法对mAb进行特异性鉴定。结... 详细信息

目的 :制备抗肉毒毒素A(BoNT/A)的单克隆抗体 (mAb)。方法 :用纯化的重组BoNT/A Hc片段免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤Sp2 /0融合 ,经间接ELISA筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系 ,及Western免疫印迹分析等方法对mAb进行特异性鉴定。结果 :获得 3株杂交瘤细胞株 :命名为4A8、2F7和 4F2 ,IgG亚类鉴定均为IgG1,腹水mAb的效价在 1× 10 -4～ 1× 10 -6之间。其中 ,4A8和 4F2能稳定分泌抗BoNT AmAb,并可特异性地识别重组BoNT/A和天然BoNT/A ,特别是 4A8可保护小鼠抵抗 10LD50 BoNT/A的攻击。结论 :成功地制备 3株特异性抗BoNT/AmAb ,并有 1株属于中和性mAb 。

关键词：肉毒神经毒素A 肉毒杆菌毒素单克隆抗体

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财经应用写作

财经应用写作

护理实践教学开放式管理系统软件平台的构建与应用

2004年

作者：贾宏丽

本书介绍了应用写作基础知识和12种财经应用文书写作的基础知识，主要包括：行政公文、计划、总结、调查报告、市场调查与预测报告、可行性、招标书与投标书、经济论文、毕业论文、学年论文、国家公务员考试知识简介。

ISBN: (纸本)7561046936

关键词：经济应用文写作高等学校教材

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中国实用护理杂志 2009年第20期25卷 89-91页

作者：郭瑛贾宏丽复旦大学护理学院

2005年我院获得上海市教委批准立项,高职高专公共实训基地"护理实践教学中心"项目建设。为了使实训基地成为护理实践教学的开放式服务平台,提出了建立新型数字化护理实践教学中心的理念。经过2年多的项目建设,已初步建成由护

关键词：护理实践教学开放式管理系统软件平台资源管理系统项目建设实训基地教学中心数字化平台视频点播系统教学支持系统直播系统硬件系统构成软件建设全面管理高职高专服务平台登陆系统上海市列相关

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一种X波段调制器的设计研究

一种X波段调制器的设计研究

作者：贾宏丽西安电子科技大学

学位级别：硕士

星载调制器是通信卫星的关键部件。微波直接调制QPSK是目前通信卫星、有线电视及其它微波通信中经常选用的一种调制方法,电路实现比较简单,具有传输速率快、频谱利用高、抗干扰能力强等优点。目前微波直接调制器仿真模型,是对Lange电桥... 详细信息

星载调制器是通信卫星的关键部件。微波直接调制QPSK是目前通信卫星、有线电视及其它微波通信中经常选用的一种调制方法,电路实现比较简单,具有传输速率快、频谱利用高、抗干扰能力强等优点。目前微波直接调制器仿真模型,是对Lange电桥、Willkisin(威尔金森合成器)和微波滤波器分步进行特性仿真,这种分步仿真模型不能完全模拟调制电路的微波传输特性,直接影响调制器的性能指标,进而影响微波直接调制器的优化设计。因此需要研究整体仿真技术,仿真研究各种环境参数对调制器性能的影响。本文针对以上问题,首先介绍了星载调制器国内外的研究现状及存在的问题,介绍了X波段调制器原理,给出了调制器的原理框图;然后从物理实现上介绍了微波直接调制器的主要功能单元模块,对微波直接调制器进行了建模仿真,优化设计、实验验证和具体性能指标的测试。采用ADS仿真软件中的三维仿真结构对调制器整体模块进行建模与仿真,在电路仿真过程中不断的优化模型中影响性能指标的参数,进行迭代仿真,达到调制器的主要技术指标要求。同时研究了I/O不平衡性、群时延、电压驻波比、带内波动、误差矢量(EVM)和载波泄漏等因素对卫星通信中高速X波段调制器性能的影响。通过结合三维电路仿真和现有的二维电路仿真,得到了更逼近实际电路特征的仿真模型,提高了微波直接调制器设计精度。根据电路仿真结果进行了调制器设计与实现。实物测试结果表明:产品性能指标测试与电路仿真结果基本一致,主要指标接近电路仿真结果,调制器的主要指标幅度不平衡测试结果由原来的1dB提高到0.5dB,相位不平衡度由4°提高到3°度以内,能够适应-35℃到+70℃的温度范围。测试与仿真结果验证了设计方案的合理性与准确性。

关键词：调制器仿真验证

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无柔性轴承谐波齿轮传动强制波发生器的研究

无柔性轴承谐波齿轮传动强制波发生器的研究

作者：贾宏丽北京工商大学

学位级别：硕士

谐波齿轮传动波发生器有多种形式,其中具有柔性轴承的强制波发生器应用最为广泛。柔性轴承是谐波齿轮传动装置中强制波发生器的部件之一,其功能主要是传递波发生器变形形状,并减少柔轮的磨损。然而,由于制造工艺和谐波齿轮传动原理的限... 详细信息

谐波齿轮传动波发生器有多种形式,其中具有柔性轴承的强制波发生器应用最为广泛。柔性轴承是谐波齿轮传动装置中强制波发生器的部件之一,其功能主要是传递波发生器变形形状,并减少柔轮的磨损。然而,由于制造工艺和谐波齿轮传动原理的限制,柔性轴承目前的最小外径为15mm左右,当尺寸进一步缩小时,轴承游隙量级与谐波齿轮传动径向变形量的量级相同,导致柔性轴承在微型谐波齿轮传动装置中的应用受限。另外,在短使用寿命谐波齿轮极限传动的应用场合,以及要求提供更大的电缆或电机通过直径的中空式谐波齿轮传动应用场合,和小型机械手关节等质量和尺寸受限、紧凑性等要求高的场合,采用无柔性轴承强制波发生器谐波齿轮传动是一种重要的技术手段。因此本文使用CFD数值方法,对无柔性轴承谐波齿轮传动中的凸轮波发生器与柔轮间的润滑特性进行仿真分析,研究凸轮波发生器轮廓设计参数与表面纹理设计参数对润滑剂流体动压、流体流动状态、结构承载力与摩擦力的影响,以提高结构的润滑性能,为无柔性轴承谐波齿轮传动的结构设计与润滑性能分析提供依据。研究表明凸轮波发生器的轮廓设计和表面纹理设计对无柔性轴承谐波齿轮传动的承载性能与摩擦性能影响显著,可以通过优化凸轮波发生器轮廓设计参数来优化结构的润滑特性,使结构在流体动压润滑状态下以小摩擦系数运行,从而减小柔轮磨损,提高结构润滑性能,通过优化微凹坑纹理设计参数来增强微纹理的局部流体动压效应,优化润滑剂流动状态,提高结构承载力。

关键词：谐波齿轮传动柔性轴承椭圆轴承 CFD

重组BoNT/ALC、BoNT/BHc2、BoNT/EHc2片段的表达纯化及BoNT/EHc2的免疫保护作用

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重组BoNT/ALC、BoNT/BHc2、BoNT/EHc2片段的表达纯化及BoNT/EHc2...

作者：贾宏丽中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

肉毒毒素(BoNT)有A～G7个血清型，其中，BoNT／A、BoNT／B、BoNT／E三型毒素主要引起人类的肉毒中毒。BoNT在结构上分为两部分：轻链(LC，50 kD)为活性结构域，具有锌依赖性金属内肽酶活性;重链(HC，100 kD)为结合和转位结构域。其中，H... 详细信息

肉毒毒素(BoNT)有A～G7个血清型，其中，BoNT／A、BoNT／B、BoNT／E三型毒素主要引起人类的肉毒中毒。BoNT在结构上分为两部分：轻链(LC，50 kD)为活性结构域，具有锌依赖性金属内肽酶活性;重链(HC，100 kD)为结合和转位结构域。其中，HC的C末端(H，50 kD)负责与靶细胞膜上相应受体结合，又可分为两部分：H1和H2。目前BoNT是重要的毒素战剂和高度危险的生物恐怖剂之一，因此，开展重组BoNT抗原片段的研究，对研制诊断抗体和预防疫苗具有重要意义。为了表达重组BoNT／A LC、BoNT／BH2、BoNT／EH2，培养肉毒梭菌A、B、E将其无毒化处理作为模板，以PCR方法分别扩增出BoNT／A LC、BoNT／BH2、BoNT／EH2片段，将目的片段连接至pGEM-T载体进行测序鉴定。序列分析结果表明，3个基因片段与所报道的相应基因序列的一致性均在99％以上。然后以BamH Ⅰ+Xho Ⅰ或BamH Ⅰ+Nhe Ⅰ对pGEM-T-LC、pGEM-T-BH2、pGEM-T-EH2与原核表达载体pET21a或pET28a进行双酶切并连接，获得分别含3个基因片段的重组质粒pET21a-LC、pET28a-BH2和pET28a-EH2。经过鉴定后转化***21(DE3)pLysS感受态细胞，用IPTG进行诱导表达后，发现BoNT／A LC、BoNT／BH2和BoNT／EH2重组蛋白都以包涵体形式存在，表达量分别达到全菌蛋白的23％、18％和37％。利用重组蛋白带有6×His标签的特性，用螯合镍离子次氨基三乙酸(Ni-NTA)的亲合层析柱对重组蛋白进行一步纯化，rBoNT／A LC和rBoNT／EH2的纯度在95％以上;但rBoNT／BH2在经过Ni-NTA柱纯化过程中发生降解，产生小片段。经Western印迹和间接ELISA分析，3种重组蛋白均可被相应的抗天然BoNT马血清或兔血清所识别，显示其具有良好的抗原性。在所获得的3种重组蛋白中，选择rBoNT／EH2进行了小鼠的免疫保护评价。用纯化的重组蛋白免疫小鼠，待效价升高到一定程度后用激活的E型肉毒梭菌培养上清进行攻毒。结果显示，免疫后的小鼠可以抵抗2 MLD的BoNT／E攻击;用5 MLD的BoNT／E注射小鼠，有50％的小鼠存活;注射10 MLD和20 MLD的BoNT／E，小鼠无一存活。经统计学分析，各组小鼠的存活率差异具有显著性意义。抗rBoNT／EH2鼠血清的中和实验也表现了相似的结果。

关键词：肉毒毒素,重链与轻链,克隆与表达,亲和纯化,免疫保护

甲状腺功能亢进和减低实验大鼠心钠素和肾素-血管紧张素-醛固酮系统的观察

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上海医学 1993年第6期16卷 334-337页

作者：曾纪骅陈思怡贾宏丽季志英上海医科大学儿科研究所

本文检测甲亢甲减实验大鼠血浆、心房心钠素(ANP),血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量,并与正常大鼠进行比较。发现(1)甲亢大鼠血浆 ANP 显著升高,心房 ANP 显著低下,甲减大鼠两者呈相反变化:(2)血浆 ANP 和血清 T_4呈正相关,(3)... 详细信息

本文检测甲亢甲减实验大鼠血浆、心房心钠素(ANP),血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮含量,并与正常大鼠进行比较。发现(1)甲亢大鼠血浆 ANP 显著升高,心房 ANP 显著低下,甲减大鼠两者呈相反变化:(2)血浆 ANP 和血清 T_4呈正相关,(3)甲亢和甲减大鼠肾素活性和血管紧张素Ⅱ分别呈明显升高和降低;醛固酮水平则无明显变化。上述结果提示甲亢时心房释放 ANP 增加,甲减时释放减少;异常甲状腺功能状态下,血浆 ANP 与肾素-血管紧张素-醛固酮系统相互作用对维持体液平衡有一定意义。

关键词：心钠素肾素血管紧张素甲亢

重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)蛋白的表达、纯化与鉴定

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军事医学科学院院刊 2005年第1期29卷 30-33页

作者：贾宏丽王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

　目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a 轻... 详细信息

　目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a 轻链,转化***21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达,用Western印迹鉴定重组BoNT/A轻链。结果:经PCR获得的BoNT/A轻链序列与GenBank中的BoNT/A轻链基因序列的一致性达 99. 9%以上。表达工程菌BL21 /pET21a ALC于 37℃经 0. 7mmol/LIPTG诱导 6h,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的 23%。经过镍离子螯合次氨基三乙酸 (Ni NTA)亲和层析一步纯化,重组BoNT/A轻链的纯度可达 97%以上。Western印迹结果表明,重组BoNT/A轻链与抗天然BoNT/A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应。结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/A轻链片段,其抗原性良好。

关键词：肉毒神经毒素A(BoNT/A) 轻链克隆表达 Ni—NTA亲和层析

肺灌注显像对小儿先天性心脏病伴肺动脉高压术后随访的临床评价

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中华核医学杂志 1994年第2期14卷 95-97页

作者：郑景浩张善通曾纪骅贾宏丽季志英陈思怡上海第二医科大学新华医院小儿心胸外科上海医科大学儿科医院

小儿先天性心脏病４８例，其中伴肺动脉高压（ＰＨ）３２例，应用９９ｍＴｃ标记大分子聚合白蛋白（ＭＡＡ）行肺灌注显像，以右侧和左侧卧位时右肺与左肺放射性计数的比值ｒｔ／ｌｔ来随访术后肺动脉压力．结果表明ｒｔ／ｌｔ值能定性... 详细信息

小儿先天性心脏病４８例，其中伴肺动脉高压（ＰＨ）３２例，应用９９ｍＴｃ标记大分子聚合白蛋白（ＭＡＡ）行肺灌注显像，以右侧和左侧卧位时右肺与左肺放射性计数的比值ｒｔ／ｌｔ来随访术后肺动脉压力．结果表明ｒｔ／ｌｔ值能定性、定量地评价肺动脉压力，动物实验示该法重复性好，并提示术后恢复的一些影响因素，对选择手术时机及术后随访疗效颇有临床实用价值．

关键词：先天性心脏病肺性高血压