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咖啡叶枯病病原鉴定、生物学特性及化学药剂筛选研究

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植物病理学报 2023年

作者：范艳妮贺春萍吴伟怀梁艳琼易克贤陆英海南大学植物保护学院中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室/农业农村部热带农业绿色低碳重点实验室/海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室/海南省热带作物病虫害生物防治工程技术研究中心

咖啡叶枯病成为制约咖啡产量的重要病害之一。通过采集咖啡叶枯病典型病叶，病原分离、科赫氏法则验证、形态学观察及ITS、EF1-α、β-tublin多基因序列分析明确其病原菌为Diaporthetulliensis(塔利间座壳菌)。生物学特性表明菌株生长... 详细信息

咖啡叶枯病成为制约咖啡产量的重要病害之一。通过采集咖啡叶枯病典型病叶，病原分离、科赫氏法则验证、形态学观察及ITS、EF1-α、β-tublin多基因序列分析明确其病原菌为Diaporthetulliensis(塔利间座壳菌)。生物学特性表明菌株生长最适温度范围为25～30℃，致死温度为55℃，最适pH值为6，黑暗条件对菌丝生长更为有利，最佳碳源为麦芽糖，最佳氮源为硝酸钾。室内毒力测定结果表明97.2%咪鲜胺和50%咪鲜胺锰盐的抑菌作用最强，EC50值分别为0.0680、0.0696mg·L-1;95%苯醚甲环唑、80%多菌灵、97.3%戊唑醇、50%嘧菌酯抑菌作用次之，EC50值分别为0.1923、0.2360、0.7630和0.8731 mg·L-1。后续田间防治试验可优先考虑咪鲜胺及咪鲜胺锰盐作为主要防治药剂。本试验结果可为咖啡叶枯病防治提供数据依据。

关键词：咖啡叶枯病塔利间座壳菌多基因序列分析生物学特性室内毒力测定

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中西医结合治疗慢性盆腔炎临床研究

中国保健营养 2013年第8期 2119-2120页

作者：贺春萍河北省高阳县医院妇产科

目的探讨中西医结合治疗慢性盆腔炎的临床疗效。方法将笔者所在医院收治的76例慢性盆腔炎患者随机分为两组,对照组采用静脉滴注甲硝唑联合左氧氟沙星进行治疗,观察组在对照组基础上加用妇康消炎栓,两组均以7天为一个疗程,两个疗程后观... 详细信息

目的探讨中西医结合治疗慢性盆腔炎的临床疗效。方法将笔者所在医院收治的76例慢性盆腔炎患者随机分为两组,对照组采用静脉滴注甲硝唑联合左氧氟沙星进行治疗,观察组在对照组基础上加用妇康消炎栓,两组均以7天为一个疗程,两个疗程后观察效果。结果治疗两个疗程后,对照组有效率为50.00%,观察组有效率为84.21%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论经研究中西医结合治疗慢性盆腔炎比单纯西医治疗起效快,有效率高,副作用少,值得临床推广应用。

关键词：慢性盆腔炎甲硝唑左氧氟沙星妇康消炎栓

稻瘟菌T—DNA插入的突变表型分析和插入位点定位

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稻瘟菌T—DNA插入的突变表型分析和插入位点定位

作者：贺春萍华南热带农业大学

学位级别：硕士

稻瘟菌（Magnaporthe grisea,无性世代为Pyricularia oryzae）引起的稻瘟病是水稻最严重的真菌病害之一,每年给水稻生产带来重大的经济损失。稻瘟菌与水稻的互作符合基因对基因关系,现已被作为模式系统用于研究病原微生物-植物寄主的互... 详细信息

稻瘟菌（Magnaporthe grisea,无性世代为Pyricularia oryzae）引起的稻瘟病是水稻最严重的真菌病害之一,每年给水稻生产带来重大的经济损失。稻瘟菌与水稻的互作符合基因对基因关系,现已被作为模式系统用于研究病原微生物-植物寄主的互作机理。稻瘟菌致病分子机制的研究不仅为病害的防治奠定理论基础,也为其它植物病原真菌的研究提供借鉴。本研究利用农杆菌介导的遗传转化体系构建稻瘟菌的T-DNA插入突变体库,使突变体数增加到6855个,每转化1.0x10~6个分生孢子可得到约300个T-DNA插入突变体。抽取最早构建的1600个突变体分别接种在感瘟病水稻品种日本晴和抗瘟病品种C101（对照）上,以测定其致病力的变化,同时对其形态学进行观察分析。结果得到173个菌落形态、分生孢子产生能力或附着胞发育等不正常的突变体。这173个突变体中,有23个对日本晴的致病力从原来的正常下降到完全不能致病,26个致病力明显减弱。从173个突变体中随机选取28个,进一步开展形态发育观察,结果发现15个颜色异常,7个菌落生长缓慢,2个分生孢子形态异常,2个附着胞形态异常,3个不能形成附着胞。用标准菌株1528和P131检测这28个突变体有性世代的形成能力,结果发现,Y34-0211、Y34-1469和Y34-0635三个突变体完全丧失产生有性世代的能力,其余参试突变体的有性世代形成能力保持不变。对这28个突变体的基因组进行了PCR扩增,结果从所有参试基因组中都能扩增到潮霉素磷酸转移酶基因（hph）序列,表明突变体的基因组中确实已经携带hph基因序列。用T-DNA左边界系列设计3个嵌套引物和AD9作为随机引物,以28个突变体基因组DNA作为模板,进行TAIL-PCR扩增。结果从6个突变体的基因组上扩增到T-DNA插入位点左侧的DNA片段。对这些左侧序列测序并与稻瘟菌基因组进行比对,获得如下T-DNA插入位点附近的序列资料: T-DNA在Y34-0635和Y34-0528-2基因组上的插入位点相同。该位点位于Ⅲ号染色体重叠群2.973上的53458bp处,其下游约1.0kb处有一个推测的蛋白编码基因MG05254.4。T-DNA的插入可能使上游调控序列不能发挥正常的作用而导致MG05254.4基因无法正常表达,其表型效应是对日本晴的致病力显著减弱（Y34-0635突变体）或完全丧失（Y34-0528-2突变体）。 T-DNA在Y34-0121和Y34-0588基因组上的插入位点都是在稻瘟菌Ⅱ号染色体重叠群2.387上的54377bp处,该插入位点刚好是在末知蛋白MG02065.4和MG02064.4编码基因之间。其表型效应只是分生孢子产孢量略有变化（Y34-0121和Y34-0588突变体）和附着胞形成能力显著降低（Y34-0121突变体）。因此推测T-DNA

关键词：稻瘟病菌 T-DNA插入突变侧翼序列功能基因组学

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中西医结合治疗慢性盆腔炎临床研究

中国保健营养（下半月） 2013年第8期23卷 2119-2120页

作者：贺春萍河北省高阳县医院妇产科

关键词：慢性盆腔炎甲硝唑左氧氟沙星妇康消炎栓

生防枯草芽孢杆菌Czk1固体发酵工艺条件优化

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热带作物学报 2023年

作者：贺春萍翟纯鑫吴贺梁艳琼谭施北吴伟怀易克贤南京农业大学植物保护学院中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室/农业农村部热带农业绿色低碳重点实验室/海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室云南农业大学农学与生物技术学院

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Czk1是一株具广谱拮抗、促生和诱导植株产生抗病的根际益生菌。为了全面资源化利用农业废弃物中的有机养分和促进对植物土传病害的生物防治，本研究以Czk1为研究对象，以鸡粪为底肥，分别利用玉米秸秆... 详细信息

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Czk1是一株具广谱拮抗、促生和诱导植株产生抗病的根际益生菌。为了全面资源化利用农业废弃物中的有机养分和促进对植物土传病害的生物防治，本研究以Czk1为研究对象，以鸡粪为底肥，分别利用玉米秸秆、菌糠、椰糠堆肥为原料，采用液固两相发酵工艺，以稀释平板菌落计数法测定活菌总数和芽孢数，经过单因素和正交实验方法，明确Czk1固体发酵物料的配方、工艺参数和培养条件。结果表明，对Czk1固体发酵的最优条件是：最佳原料为菌糠鸡粪堆肥，Czk1接种重量为10%，黄豆粉添加量为10%，含水量为40%，发酵温度为37 ℃，翻抛1次/72 h，在此条件下，Czk1菌株中的芽孢活菌数量总量可以达到8.63×108CFU·g-1，芽孢数为8.37×108CFU·g-1。其次，发酵效果较佳的原料为秸秆鸡粪堆肥，Czk1接种量10%，添加5%黄豆粉，40%含水量，发酵温度37 ℃，翻抛1次/72 h，此条件下，Czk1接种菌株中的活菌数量总量可达到6.53×108CFU·g-1，芽孢数为5.97×108CFU·g-1；另外，在此配方条件下再添加30%菌糠，Czk1菌株的活菌数量总量及芽孢数分别可达到8.70×108CFU·g-1和6.90×108CFU·g-1。因此，选择合适的发酵生产条件可将农业废弃物制备出高质量的生物有机肥，枯草芽孢杆菌Czk1具有良好的开发利用价值。

关键词：枯草芽孢杆菌固体发酵工艺优化生物有机肥芽孢产量

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莲雾主要病害及其防治技术

世界热带农业信息 2019年第11期 10-11页

作者：贺春萍郑肖兰李锐不详

相对于其他热带水果,莲雾的病害种类相对较少,常见的仅有炭疽病、果实软腐病、疫病、黑腐病、藻斑病、煤烟病6种。

关键词：热带水果病害种类煤烟病黑腐病软腐病莲雾藻斑病炭疽病

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温郁金根腐病病原菌生物学特性及杀菌剂筛选

西北农业学报 2017年第1期26卷 137-143页

作者：陈旭玉钟锦玲贺春萍黄娴甘炳春中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所海南分所(海南省南药资源保护与开发重点实验室)海南万宁571533 中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所北京100193 岭南师范学院广东湛江524048 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所(农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室) 海口571101 海南碧凯医药研究所海口570216

旨在对温郁金根腐病病原菌进行生物学特性研究及杀菌剂筛选。采用平板培养法测定和平板对峙法进行病原菌生物学特性研究和药剂筛选。结果发现温郁金根腐病病原菌最适培养基是查氏琼脂培养基,最适温度为28℃,碳源和pH对其生长影响不大,... 详细信息

旨在对温郁金根腐病病原菌进行生物学特性研究及杀菌剂筛选。采用平板培养法测定和平板对峙法进行病原菌生物学特性研究和药剂筛选。结果发现温郁金根腐病病原菌最适培养基是查氏琼脂培养基,最适温度为28℃,碳源和pH对其生长影响不大,最适氮源为牛肉浸膏。杀菌剂筛选结果表明,430g/L戊唑醇SC和w=50%的咪鲜胺锰盐WP的抑制效果较强,其EC50分别为0.002和0.024g/L,其次为w=50%多菌灵WP和w=10%苯醚甲环唑WG,EC50分别为2.225和2.646g/L。430g/L戊唑醇SC、w=50%咪鲜胺锰盐WP、w=50%多菌灵WP和w=10%苯醚甲环唑WG均可有效抑制温郁金根腐病菌的生长,可进一步用于田间试验。

关键词：温郁金根腐病病原菌生物学特性杀菌剂筛选

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粗叶榕茎枯病病原菌的分离与鉴定

植物病理学报 2023年

作者：贺春萍胡月吴贺梁艳琼李锐林金晶陆英吴伟怀易克贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室/海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室云南农业大学农学与生物技术学院中国热带农业科学院三亚研究院华中农业大学植物科学技术学院

粗叶榕(Ficus hirta Vahl)，又名五指毛桃、五爪龙、五指牛奶、亚桠木(海南)、南芪、土黄芪等[1]，主要产于云南、贵州、海南、广西、广东、福建等地，富含蛋白质、多糖及黄酮类等物质，以根部入药，具有益气、健脾、润肺、祛湿等功效[2...

粗叶榕(Ficus hirta Vahl)，又名五指毛桃、五爪龙、五指牛奶、亚桠木(海南)、南芪、土黄芪等[1]，主要产于云南、贵州、海南、广西、广东、福建等地，富含蛋白质、多糖及黄酮类等物质，以根部入药，具有益气、健脾、润肺、祛湿等功效[2]，是华南地区著名的药食同源植物和药材，享有“广东人参”的美誉，深受人们喜爱。

关键词：

中粒种咖啡新发砖红镰刀叶枯病病原菌鉴定及其病原生物学分析

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热带作物学报 2022年第11期43卷 2345-2355页

作者：王倩吴伟怀贺春萍梁艳琼陆英易克贤海南大学植物保护学院/热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室海南海口570228 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业农村部热带作物有害生物综合治理重点实验室海南海口571101

针对引起海南省白沙农场中粒种咖啡成株叶片呈砖红色枯萎症状的一种未知病害的病原菌进行分离,分离得到菌株21BS02-1和21BS02-2。将分离菌株接种到叶片并观察症状,发现菌株21BS02-1的发病症状与田间症状一致,通过再分离获得的菌株发病... 详细信息

针对引起海南省白沙农场中粒种咖啡成株叶片呈砖红色枯萎症状的一种未知病害的病原菌进行分离,分离得到菌株21BS02-1和21BS02-2。将分离菌株接种到叶片并观察症状,发现菌株21BS02-1的发病症状与田间症状一致,通过再分离获得的菌株发病症状也与初始病原菌症状一致,由此确定菌株21BS02-1即为致病菌。菌株21BS02-1的菌落主要呈白色,毡状,菌丝致密,菌落中央呈玫瑰色;其菌丝体细长,部分菌丝为有隔菌丝;大型分生孢子两端稍弯曲,形状似镰刀,其大小为(56.26~175.76)μm×(12.93~19.78)μm,有3~7个分隔;小型分生孢子较少,呈椭圆形,0~1个分隔;根据形态特征初步鉴定该病原菌为镰刀菌(Fusarium sp.)。进一步对菌株21BS02-1的ITS、β-tubulin、TEF基因序列进行克隆测序,经Blast搜索表明,其ITS、β-tubulin、TEF序列与Fusarium lateritium的同源性分别达到99.56%(MN686293)、100%(KJ00154)、99.68%(KF918550)。3个单基因聚类树均一致,表明菌株21BS02-1属于砖红镰刀菌(F. lateritium)。生物学特性测定表明,致病菌21BS02-1最适合的培养基为OMA和CMA培养基;碳源为蔗糖时的利用率最高;牛肉浸膏为致病菌最适生长的氮源;12 h光暗交替条件下菌丝生长最快;pH在7~9范围内最适合该致病菌生长。本研究是砖红镰刀菌(F. lateritium)侵染中粒种咖啡较为详细的报道。

关键词：咖啡叶枯病病原鉴定砖红镰刀菌