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作者：费倩怡吉林大学

学位级别：硕士

随着社会的发展进步，人们的生活节奏逐步加快，越来越多的环境因素、社会心理因素使恶性肿瘤的发病率逐年上升，口腔颌面部恶性肿瘤也不例外。目前颌面部恶性肿瘤术后所造成的组织缺损往往采用皮肤移植的方法加以整复，术后相继进行化... 详细信息

随着社会的发展进步，人们的生活节奏逐步加快，越来越多的环境因素、社会心理因素使恶性肿瘤的发病率逐年上升，口腔颌面部恶性肿瘤也不例外。目前颌面部恶性肿瘤术后所造成的组织缺损往往采用皮肤移植的方法加以整复，术后相继进行化学药物治疗或放射治疗，这样不仅引起皮肤组织的严重损害，同时使皮瓣或皮片愈合过程延迟甚至导致皮瓣坏死，这就是一种典型的“放创复合伤”，是目前较难治愈的难愈性创伤之一。因此如何促进放创复合伤难愈性创面愈合是创伤医学修复领域亟待解决的问题。人胎盘间充质干细胞（hunman placenta-derived mesenchymal stem cells,HPMSCs）是来源于胎盘实质组织的一类具有自我更新能力的间充质细胞，它作为一种新的干细胞来源近年来逐渐受到人们的关注。我实验室朱振威等[1]已经成功从人胎盘组织中提取出状态较好的HPMSCs，并成功诱导其向成骨和成脂细胞转化，并发现它能高效表达目的基因，是细胞基因治疗的良好载体。刘志辉等[2]研究表明HPMSCs不仅可以作为理想的种子细胞应用于缺血性皮瓣动物模型，而且可以作为VEGF的载体细胞发挥VEGF的长效作用。大量研究表明，HPMSCs在创伤修复领域具有重要的应用价值，但是将其应用于放创复合伤，促进其愈合目前国内外文献未见相关报道。Leptin亦称为瘦素、消脂素，是一种白色脂肪组织(White adpose tissue，WAT)特异性分泌的蛋白活性因子，它能够促进上皮再生及新生血管的形成，在创伤愈合的过程中发挥了重要作用。但由于其半衰期只有（9.4±3.0）min，因此单纯局部应用Leptin很难发挥其长效作用。为了使Leptin能够发挥其长效促愈作用，我们考虑将Leptin转染入间充质干细胞，使其通过间充质干细胞获得持续表达，从而达到其长效促愈作用。本研究的目的是在朱振威等[1]实验基础上将其成功转染的转Leptin HPMSCs通过局部注射移植到Wistar大鼠背部放创复合伤模型，观察转Leptin HPMSCs对放创复合伤难愈性创面的促愈作用。方法：采用雄性Wistar大鼠，在大鼠背部做3×5cm大小的随意皮瓣，原位缝合建立动物模型，术后第1天采用电子线对大鼠进行局部照射，总剂量5Gy。对30只大鼠随机分成三组，放射后24小时分别局部皮下注射转染Leptin的胎盘间充质干细胞、转染空载体的胎盘间充质干细胞以及生理盐水。本实验通过大体观察、组织病理学观察、免疫组织化学染色观察等多种手段，评估Leptin及HPMSCs对放创复合伤的促愈作用。结果： 1、给药后14天内，各组大鼠均未出现免疫排斥反应。给药后第7天，放疗后皮瓣成活率：转Leptin HPMSCs组＞转空载体HPMSCs组＞空白对照组。 2、给药后第14天，组织病理学检查HE染色，发现Ⅰ组肉芽组织最为丰富，可见大量的新生毛细血管及成纤维细胞，血管周围炎细胞浸润较少，胶原排列不整齐。Ⅱ组肉芽组织较为丰富，可见较多的新生毛细血管及成纤维细胞，血管周围炎细胞浸润较多，胶原排列不整齐。Ⅲ组新生肉芽组织较少，新生血管较少，细胞成分少见，可见大量炎细胞浸润，可见纤维结缔组织发生玻璃样变。 3、给药后第14天，vWF因子多克隆抗体及Leptin多克隆抗体免疫组织化学染色。结果显示血管内皮细胞内vWF因子阳性表达，胞浆染色棕黄色，镜下观察各组新生血管的密度：转Leptin HPMSCs组＞转空载体HPMSCs组＞空白对照组;Leptin阳性表达主要位于上皮角质细胞，其次为血管内皮细胞，胞浆染色棕黄色，镜下观察各组Leptin免疫组化阳性表达：转Leptin HPMSCs组＞转空载体HPMSCs组＞空白对照组。结论： 1、人胎盘间充质干细胞免疫原性极低，不同物种应用不会引起免疫排斥反应;2、在局部微环境作用下HPMSCs可以分化为血管内皮细胞，促进新生血管的形成，可以促进放创复合伤的愈合，提高皮瓣的成活率。 3、HPMSCs可以作为Leptin基因治疗的载体细胞，它持续分泌的Leptin发挥稳定长效促愈作用;4、HPMSCs与Leptin协同作用促进放创复合伤皮瓣的愈合，HPMSCs携带目的基因或单独应用均可显著提高放创复合伤皮瓣的成活率，但转LeptinHPMSCs组作用力更强。

关键词：放创复合伤胎盘间充质干细胞 Leptin 促愈作用

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人胎盘来源间充质干细胞和大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特征比较

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吉林大学学报（医学版） 2013年第3期39卷 467-471,F0002页

作者：费倩怡刘春丽朱振威刘志辉刘书会王占义金巨楼王敬龙吉林大学口腔医院口腔颌面外科吉林长春130021 吉林大学口腔医院口腔修复科吉林长春130021 吉林省长春市口腔医院颌面外科吉林长春130011 吉林大学口腔医学院

目的:从人足月的胎盘羊膜中和Wistar大鼠股骨及胫骨骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs),研究人胎盘来源MSCs(HPMSCs)和大鼠骨髓来源MSCs(BMSCs)的分离培养方法和生物学特征、表面标志及其多分化潜能。方法:将人足月胎盘组织通过胶原酶... 详细信息

目的:从人足月的胎盘羊膜中和Wistar大鼠股骨及胫骨骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs),研究人胎盘来源MSCs(HPMSCs)和大鼠骨髓来源MSCs(BMSCs)的分离培养方法和生物学特征、表面标志及其多分化潜能。方法:将人足月胎盘组织通过胶原酶Ⅱ消化培养获取HPMSCs,采用全骨髓贴壁法从4周龄Wistar大鼠双侧股骨及胫骨中分离、纯化大鼠BMSCs,运用活细胞计数法检测其增殖能力,采用流式细胞术检测2种细胞表面标志物的表达阳性率;用地塞米松、维生素C和β磷酸甘油诱导其向成骨细胞分化,用茜素红染色鉴定;用胰岛素、地塞米松、IBMX和吲哚美辛诱导其向脂肪细胞分化,以油红O染色鉴定。结果:HPMSCs为梭形贴壁细胞,增殖能力较强,CD44和CD34表达阳性率分别为94.45%和1.67%;BMSCs为圆形、梭形和多角形,增殖能力强,CD44和CD34表达阳性率分别为93.11%和2.68%。2种细胞经过成脂诱导液和成骨诱导液诱导后,茜素红和油红O染色结果均为阳性,表明2种细胞均可向脂肪细胞和成骨细胞分化。结论:HPMSCs与大鼠BMSCs的生物学特征相似,同样具有多分化潜能,HPMSCs具有更强的增殖能力。

关键词：人胎盘来源间充质干细胞骨髓间充质干细胞表面标志多分化潜能

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转染leptin的胎盘间充质干细胞对放射损伤复合创伤愈合的促进作用

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吉林大学学报（医学版） 2016年第6期42卷 1066-1070,I0011页

作者：费倩怡刘书会朱振威邹永巍郑明刘春丽刘志辉吉林大学口腔医院口腔颌面外科吉林长春130021 吉林省长春市口腔医院吉林长春130022 吉林大学口腔医院口腔修复科吉林长春130021

目的:探讨瘦素(leptin)和人胎盘间充质干细胞(HPMSCs)对大鼠背部放射损伤复合创伤(放创复合伤)皮瓣愈合的促进作用,阐明其在放创复合伤愈合过程中的协同作用。方法:将30只雄性Wistar大鼠随机分为转染leptin的HPMSCs组(n=10)、转染空载体... 详细信息

目的:探讨瘦素(leptin)和人胎盘间充质干细胞(HPMSCs)对大鼠背部放射损伤复合创伤(放创复合伤)皮瓣愈合的促进作用,阐明其在放创复合伤愈合过程中的协同作用。方法:将30只雄性Wistar大鼠随机分为转染leptin的HPMSCs组(n=10)、转染空载体的HPMSCs组(n=10)和空白对照组(n=10)。建立放创复合伤大鼠模型,放疗后24h各组大鼠局部皮下注射转染leptin的HPMSCs、转染空载体的HPMSCs以及生理盐水,观察各组大鼠皮瓣颜色、皮纹、质地、温度、毛发生长、渗出、坏死范围及针刺出血情况;检测各组大鼠皮瓣成活率;HE染色观察各组大鼠皮瓣组织形态表现;免疫组织化学法检测大鼠皮瓣中leptin和血管性血友病因子(vWF)的表达情况。结果:给药后第7天,各组大鼠皮瓣成活与坏死界限基本清楚,坏死区域皮瓣质地坚硬,成活区域皮瓣颜色红润,皮纹模糊,质地中等,转染leptin的HPMSCs组和转染空载体的HPMSCs组大鼠皮瓣坏死面积均小于空白对照组。给药后第7天,转染leptin的HPMSCs组大鼠皮瓣成活率高于转染空载体的HPMSCs组和空白对照组(P<0.05),转染空载体的HPMSCs组大鼠皮瓣成活率高于空白对照组(P<0.05)。给药后第14天,HE染色检测,转染leptin的HPMSCs组大鼠皮瓣肉芽组织最为丰富,新生毛细血管和成纤维细胞最多。给药后第14天,免疫组织化学染色,转染leptin的HPMSCs组和转染空载体HPMSCs组大鼠皮瓣真皮下方可见大量的黄染颗粒(阳性表达),转染leptin的HPMSCs组胞浆中阳性表达的leptin细胞最多。结论:在局部微环境作用下,HPMSCs可以分化为血管内皮细胞,促进新生血管的形成,HPMSCs与leptin可协同促进放创复合伤皮瓣的愈合,HPMSCs携带目的基因或单独应用均可明显提高放创复合伤皮瓣的成活率,但转染leptin的HPMSCs作用力更强。

关键词：放创复合伤人胎盘间充质干细胞瘦素伤口愈合

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