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锌指蛋白Kaiso的甲基化特异性结合功能分析

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中华预防医学杂志 2007年第S1期41卷 43-46页

作者：张宝珍谷连坤邓大君北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所 100036

目的研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域.方法构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白,凝胶迁移实验分析其与甲基化cpG探针的特异性结合能力.结果缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-KaisoZF能够... 详细信息

目的研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域.方法构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白,凝胶迁移实验分析其与甲基化cpG探针的特异性结合能力.结果缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-KaisoZF能够特异性结合甲基化的E-cadherin启动子区CpG岛探针;单纯的Kaiso三锌指或二锌指则无结合甲基化探针的能力.结论人Kaiso蛋白锌指区能够特异性结合甲基化CpG,这种结合需要锌指结构侧翼序列的辅助.

关键词：锌指甲基化遗传载体

在化学致大鼠胃癌过程中多种癌基因表达的变化

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中华消化杂志 1996年第S1期16卷 51-54页

作者：邓大君谷连坤朱少侠陈强周静北京市肿瘤防治研究所暨北京医科大学临床肿瘤学院 100034

为探讨癌基因在胃癌发生过程中的作用,采用免疫组化技术,对N-亚硝酰胺诱发的大鼠胃腺癌、腺瘤、异型增生、慢性萎缩性胃炎和正常粘膜中c-ras、c-erbB-2和myc基因蛋白表达水平进行了比较。结果显示,这几种蛋白可存在于上述不同病变粘膜中... 详细信息

为探讨癌基因在胃癌发生过程中的作用,采用免疫组化技术,对N-亚硝酰胺诱发的大鼠胃腺癌、腺瘤、异型增生、慢性萎缩性胃炎和正常粘膜中c-ras、c-erbB-2和myc基因蛋白表达水平进行了比较。结果显示,这几种蛋白可存在于上述不同病变粘膜中,c-ras p21在腺癌中的检出率最高(7/23,30.4％),其检出水平与病变的严重程度呈正相关(P<0.05);c-erbB-2 p185和myc p62的检出率均以慢性萎缩性胃炎最高(51.5％和84.6％);同时存在3种基因产物的组织以腺癌比例最高(17.4％)。另外还发现,这些基因在胃窦侧粘膜中的表达高于嵴侧(P<0.05)。本研究结果提示c-ras可能作用于癌变全过程,myc和erbB-2可能在癌变早期发挥作用。

关键词：化学致癌胃肿瘤基因表达

利用RNA转录组数据库挖掘肿瘤细胞EZH2基因候选转录因子

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第6期36卷 665-673页

作者：刘文苏田巍周静谷连坤邓大君北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所病因学研究室恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142

转录因子的筛选是基因转录调控研究的重要环节。通常人们通过候选转录因子基序(motif)结构域的DNA结合序列是否存在于靶基因启动子而进行筛选。基因表达相关性是发现基因间相互作用的一种有效手段。利用已有的多种人类基因组转录组公共... 详细信息

转录因子的筛选是基因转录调控研究的重要环节。通常人们通过候选转录因子基序(motif)结构域的DNA结合序列是否存在于靶基因启动子而进行筛选。基因表达相关性是发现基因间相互作用的一种有效手段。利用已有的多种人类基因组转录组公共数据库,通过对已知转录因子与靶基因共转录关系分析,本研究发现,肿瘤细胞系大百科全书(CCLE)基因共转录相关系数可作为筛选候选转录(抑制和激活)因子的新方法。对所挖掘出的7个与EZH2基因转录高度相关的候选转录因子(TCF7L2、PML、TBP、PHF8、RBBP5、MYBL2、NRF1)进行实验验证,发现PHF8和NRF1过表达(或敲降)确实促进(或抑制)EZH2基因转录;染色质免疫共沉淀实验和荧光素酶报告基因结果亦证实,PHF8和NRF1能够结合EZH2基因启动子DNA,提示PHF8和NRF1可能是EZH2基因的转录因子。

关键词：转录组基因共表达转录因子 EZH2 PHF8 NRF1

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鱼露灌胃后猪胃内N-亚硝基甲基脲的合成

中华预防医学杂志 1999年第6期33卷 363-365页

作者：辛慧君邓大君王儒明谷连坤北京市肿瘤研究所北京医科大学临床肿瘤学院病因研究室 100034

目的　研究胃癌高发区福建省长乐县居民经常食用的鱼露在实验猪胃内合成强致癌性亚硝酰胺类物质Ｎ亚硝基甲基脲（ＮＭＵ）的情况。方法　对小型实验香猪胃造瘘，经瘘管灌注鱼露和ＮａＮＯ２，３０分钟后抽取胃液，经纯化浓缩，用高... 详细信息

目的　研究胃癌高发区福建省长乐县居民经常食用的鱼露在实验猪胃内合成强致癌性亚硝酰胺类物质Ｎ亚硝基甲基脲（ＮＭＵ）的情况。方法　对小型实验香猪胃造瘘，经瘘管灌注鱼露和ＮａＮＯ２，３０分钟后抽取胃液，经纯化浓缩，用高效液相色谱光水解热裂解器热能分析仪联机装置，检测胃液样品中的ＮＭＵ。结果　在ｐＨ值１～２条件下，检测到猪胃内合成的ＮＭＵ；ＮＭＵ合成量与添加的亚硝酸盐量有剂量依赖关系：当ＮａＮＯ２灌胃３．４８和０．８７ｍｍｏｌ时，胃液中ＮＭＵ浓度分别为２５．４和７－９７ μｍｏｌ／Ｌ；而当ＮａＮＯ２为０．２２ｍｍｏｌ时，没有检测到ＮＭＵ。结论　在一定的胃内酸性条件及亚硝酸盐存在的情况下，接受鱼露灌胃的实验猪胃内有ＮＭＵ的合成。因此推测胃内亚硝酸盐水平较高且经常食用鱼露者，胃内极可能有ＮＭＵ等亚硝酰胺的内源性合成。

关键词：甲基亚硝脲胃肿瘤实验研究

色素框同源蛋白7基因在人体多种癌组织中表达下调

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中华预防医学杂志 2011年第7期45卷 597-600页

作者：管振坡谷连坤邢宝才季加孚顾晋邓大君北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室 100142

目的研究色素框同源蛋白7（cbx7）基因在结肠癌、胃癌和肝癌组织中的表达变化，探讨这种表达变化与肿瘤发生和发展的相关性。方法收集22例结肠癌患者、20例胃癌患者、30例肝癌患者的肿瘤组织及其切缘组织标本、临床病理资料和随访资料... 详细信息

目的研究色素框同源蛋白7（cbx7）基因在结肠癌、胃癌和肝癌组织中的表达变化，探讨这种表达变化与肿瘤发生和发展的相关性。方法收集22例结肠癌患者、20例胃癌患者、30例肝癌患者的肿瘤组织及其切缘组织标本、临床病理资料和随访资料。提取各标本RNA，用荧光定量PCR检测cbx7mRNA含量，分析肿瘤组织中cbx7mRNA表达水平与患者临床特征相关性及与患者术后生存时间的关系。结果结肠癌、胃癌和肝癌组织中cbx7mRNA的相对拷贝数分别为0．010±0．015、0．197±0．195、0．008±0．008；对应各癌组织的切缘正常组织中cbx7mRNA的相对拷贝数分别为0．053±0．042、1．891±1．254、0．030±0．021。与切缘正常组织相比，3种癌组织中的cbx7mRNA含量均明显下调（结肠癌：t=-7．351，P〈0．01；胃癌：t=-5．417，P〈0．01；肝癌：t=-6．680，P〈0．01）。结肠癌患者中，年龄〉55岁组cbx7mRNA相对拷贝数为0．007±0．015，≤55岁组为0．017±0．012，两组间差异有统计学意义（t=-2．586，P=0．022）；有脉管癌栓组cbx7mRNA的相对拷贝数为0．022±0．021，无癌栓组为0．006±0．011，两组间差异有统计学意义（t=-3．175，P=0．010）。通过受试者特征曲线[ROC曲线，曲线下面积为0．769（P=0．033）]确定结肠癌患者cbx7mRNA相对拷贝数的Cut—off值为0．002，小于0．002者确定为表达降低；cbx7低表达的结肠癌患者术后生存时间短，5年生存率仅为30．8％（4／13），而cbx7高表达患者5年生存率达77．8％（7／9），差异有统计学意义（X^2=4．329，P=0．037）。在胃癌和肝癌患者中未见此现象。结论在结肠癌、胃癌、肝癌组织中cbx7的表达明显下降；cbx7mRNA的表达含量变化影响结肠癌患者预后。

关键词：肿瘤基因表达聚合酶链反应

富硒蒜对幽门螺杆菌诱发的沙鼠腺胃慢性胃炎的疗效

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中华预防医学杂志 2007年第S1期41卷 104-107页

作者：谷连坤周萍周静王儒明杨文婕邓大君北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所 100036 北京中医院中医研究所中国疾病预防控制中心营养与食品安全所

目的研究富硒蒜对幽门螺杆菌诱发的沙鼠腺胃慢性胃炎的疗效.方法采用幽门螺杆菌TN2菌株,对雄性长爪沙鼠灌胃5次(1次/4 d),诱发雄性长爪沙鼠慢性胃炎模型,灌胃结束后6个月,将沙鼠按整笼分组法分为6组,包括4个剂量富硒蒜组(4.70、1.5、0.4... 详细信息

目的研究富硒蒜对幽门螺杆菌诱发的沙鼠腺胃慢性胃炎的疗效.方法采用幽门螺杆菌TN2菌株,对雄性长爪沙鼠灌胃5次(1次/4 d),诱发雄性长爪沙鼠慢性胃炎模型,灌胃结束后6个月,将沙鼠按整笼分组法分为6组,包括4个剂量富硒蒜组(4.70、1.5、0.47、0.15g·kg^(-1)·d^(-1))、1个抗生素三联化疗阳性对照组和1个空白对照组,连续灌胃给药4周,停药4周后处死.进行一般症状观察和病理学组织检查.结果富硒蒜灌胃等各组动物的一般情况良好,未见异常;幽门螺杆菌灌胃可诱发沙鼠慢性(萎缩性)胃炎(tAG)、轻度上皮异型增生(DYS)和胃上皮内瘤(GIN)病变.空白对照组(n=13)动物77%发生CAG,38.5%伴上皮异型增生或胃上皮内瘤(DYS/GIN);化疗阳性对照组(n=15)动物40%发生CAG(治愈率48%,X^(2)=3.88,P<0.049),26.7%伴DYS/GIN(治愈率31%);富硒蒜各组(n=21~27)动物腺胃CAG的发生率(38.7%~16.7%)和DYS/GIN发生率(14.3%~11.1%)明显下降,治愈率明显上升(CAG为50%~78%;DYS/GIN为62.9%~71.2%),存在剂效关系,差异有统计学意义(X^(2)=9.34~4.86;P=0.002~0.028).结论富硒蒜能够有效治疗幽门螺杆菌诱发的沙鼠CAG,同时阻断DYS/GIN的发生.

关键词：硒大蒜螺杆菌,幽门沙鼠亚科胃炎

A激酶锚定蛋白12基因甲基化与原发性肝癌复发的关系研究

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中华预防医学杂志 2017年第9期51卷 848-852页

作者：刘兆君刘伟崔成华谷连坤邢宝才邓大君北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室病因学研究室100142 北京大学肿瘤医院肝胆胰外一科 100142

目的探讨A激酶锚定蛋白12（AKAP12）甲基化与原发性肝癌复发的关系.方法于2003—2009年,以在北京大学肿瘤医院肝胆外科接受手术治疗的原发性肝癌患者作为研究对象,对其进行≥3年的随访.纳入标准：肝细胞癌患者,经鉴定切缘组织无肿瘤... 详细信息

目的探讨A激酶锚定蛋白12（AKAP12）甲基化与原发性肝癌复发的关系.方法于2003—2009年,以在北京大学肿瘤医院肝胆外科接受手术治疗的原发性肝癌患者作为研究对象,对其进行≥3年的随访.纳入标准：肝细胞癌患者,经鉴定切缘组织无肿瘤细胞存在;手术时无淋巴结转移及远处转移;有完整的临床资料,共142例.截至2014年5月随访结束,共有75例研究对象复发,其中71例死亡,无失访.从冰冻手术标本中获取研究对象的肿瘤组织及切缘组织,采用酚-氯仿法提取DNA并修饰后进行PCR扩增,对PCR产物进行克隆并测序分析,应用变性高效液相色谱检测研究对象肿瘤组织和肿瘤旁切缘正常组织AKAP12基因的甲基化状态.采用Log-rank检验对研究对象生存时间进行单因素分析;采用多因素Cox比例风险模型分析研究对象生存时间差异的影响因素.结果 142例研究对象中,男性125例（88.0％）,年龄为34～76岁,中位年龄是52.5岁.肿瘤组织中AKAP12甲基化阳性率（54.9％,78/142）高于切缘组织中AKAP12甲基化阳性率（10.2％,6/59）.与AKAP12甲基化阴性者相比,AKAP12甲基化阳性者原发性肝癌复发风险较低HR=0.62,95％CI：0.39～0.99;与肿瘤直径≤5 cm者相比,肿瘤直径〉5 cm者原发性肝癌复发风险较高HR=1.53,95％CI：1.00～2.50;与无门脉侵犯者相比,有门脉侵犯者原发性肝癌复发风险较高HR=4.53,95％CI：2.69～7.64.与无门脉侵犯者相比,有门脉侵犯者死亡风险较高HR=2.98,95％CI：1.73～4.98.结论 AKAP12甲基化与原发性肝癌的复发及无疾病生存时间相关.

关键词：肝肿瘤 DNA甲基化复发 AKAPl2

甲基化特异性锌指蛋白Kaiso及其锌指区功能分析

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甲基化特异性锌指蛋白Kaiso及其锌指区功能分析

INDUCTION OF GASTRIC INTRAEPITHELIAL NEOPLASIA OF GLANDULAR STOMACH OF MONGOLIAN GERBILS BY ELICOBACTER PYLORI

全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议

作者：张宝珍谷连坤邓大君北京大学临床肿瘤学院暨北京市肿瘤防治研究所北京大学临床肿瘤学院暨北京市肿瘤防治研究所北京大学临床肿瘤学院暨北京市肿瘤防治研究所

目的:研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域。方法:构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得GST融合蛋白,凝胶迁移实验（EMSA）分析其与甲基化CpG探针的特异性结合能力。结果:缺失蛋白结合段POZ结构域... 详细信息

目的:研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域。方法:构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得GST融合蛋白,凝胶迁移实验（EMSA）分析其与甲基化CpG探针的特异性结合能力。结果:缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-Kaiso ⊿POZ能够特异性结合甲基化的E-cadherin启动子区CpG岛探针;单纯的 Kaiso三锌指或二锌指则无结合甲基化探针的能力。结论:人Kaiso蛋白锌指区能够特异性结合甲基化CpG,这种结合需要锌指结构侧翼序列的辅助。

关键词： Kaiso 锌指蛋白甲基化 CpG

来源： cnki会议评论

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Chinese Journal of Cancer Research 2005年第3期17卷 190-192页

作者：周萍谷连坤周静王儒明赵子厚邓大君 Peking University School of Oncology Beijing Institute for Cancer Research Beijing Cancer Hospital Beijing Academy of Traditional Chinese Medicine

Objective： To setup an animal model of gastric carcinogenesis by Helicobacter pylori （Hp） for basic, prevention and therapeutic research of Hp-related diseases. Methods： 22 young male Mongolian gerbils were administrated with suspension of Hp strain TN2 by intragastric garage for 5 consecutive times （4×10^8 CFU/time, 1 time/4 days）. 10 male gerbils were used as negative control. Two infected gerbils were killed at 10, 20, and 30 weeks, respectively, after inoculation to monitor the development of gastric lesions. Other animals were killed at 40 experimental weeks. Pathological changes of glandular stomach were examined histologically. Results： Gastric intraepithelial neoplasias （GIN） and low-grade dysplasias were observed only in the pyloric antrum of Hp-treated gerbils （3 and 2 ones, respectively）, but not in control group （5/13 vs. 0/10, P〈0.04）. High incidence of chronic active gastritis and chronic atrophic gastritis were observed in Hp-treated animals （10/13, 76.9%）. Low incidence of chronic atrophic gastritis was also detected in negative control gerbils （3/10, 30%; P〈0.04）. Conclusion： Hp inoculation could induce chronic inflammation and malignant lesions of the glandular stomach of Mongolian gerbils conveniently.

关键词： Helicobacter pylori Mongolian gerbil Gastric carcinogenesis Intraepithelial neoplasia