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基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移行为影响的比较研究

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基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移行为影响的比较研究

作者：谭乔燕重庆大学

学位级别：硕士

目的通过比较分析不同硬度基底膜上肝细胞与肝癌细胞的迁移特征及其骨架构象和相关调节分子活性,探索肿瘤细胞迁移行为变化的成因,加深对肿瘤细胞迁移本质特征的认识。方法运用细胞形态学观察,图像分析软件等手段,分别对不同硬度基... 详细信息

目的通过比较分析不同硬度基底膜上肝细胞与肝癌细胞的迁移特征及其骨架构象和相关调节分子活性,探索肿瘤细胞迁移行为变化的成因,加深对肿瘤细胞迁移本质特征的认识。方法运用细胞形态学观察,图像分析软件等手段,分别对不同硬度基底上肝癌细胞,肝细胞迁移净距离、迁移速率、均方位移（Mean-squared Displacement, MSD）、随机运动频率（Random Motility Coefficient, D）、转向角和方向持续性（Directional Persistence, D/T）等参数进行定量分析;通过免疫荧光、酶谱等实验技术对不同硬度基底上细胞骨架变化及MMPs表达进行检测。结果不同硬度基底上HCCLM3和L02细胞的均方位移趋势一致,相对于极软（500Pa）和极硬（glass）基底,HCCLM3和L02细胞在较软基底（4000Pa）上具有较高的迁移速率和迁移净距离,且L02细胞对运动方向的维持能力较HCCLM3细胞高;加入40μg/mL MMPs抑制剂GM6001后,HCCLM3细胞的迁移速率、迁移净距离和对运动方向的维持能力一定程度的降低,L02细胞的迁移速率、迁移净距离和对运动方向的维持能力则显著降低;三维胶原基质中,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数分别显著多于L02细胞穿透基底膜的个数;加入40μg/mLMMPs抑制剂GM6001后,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数显著增加,而L02细胞穿透基底膜的个数显著减少。结论二维培养环境中,基底硬度对细胞迁移速率存在双向影响,L02细胞因有较高的方向持续能力而表现出高的迁移效率;三维胶原基质中,HCCLM3细胞释放出的阿米巴迁移行为是其具备更大侵袭能力的基础。

关键词：肝细胞肝细胞癌基底硬度迁移特征

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肿瘤细胞迁移模式及其转换调控的研究进展

生物医学工程学杂志 2011年第6期28卷 1251-1256页

作者：王红兵谭乔燕杨本艳姿邹小兵杨力重庆大学生物工程学院重庆400044 重庆大学化学化工学院重庆400044

肿瘤细胞在三维培养基质中主要以两种模式迁移,即间充质式迁移(mesenchymal migration)和阿米巴式迁移(amoeboid migration)。本文总结分析了肿瘤细胞在不同迁移模式中的运动特征和不同迁移模式形成的内在动因,以及一定条件下迁移模式... 详细信息

肿瘤细胞在三维培养基质中主要以两种模式迁移,即间充质式迁移(mesenchymal migration)和阿米巴式迁移(amoeboid migration)。本文总结分析了肿瘤细胞在不同迁移模式中的运动特征和不同迁移模式形成的内在动因,以及一定条件下迁移模式间相互转换的诱发因素。了解这些变化及不同迁移模式转换间的内在联系,将会加深对肿瘤细胞在不同条件下迁移特性及其过程机制的认识,进而为控制肿瘤细胞恶性转移找到更为有效的措施。

关键词：肿瘤细胞迁移模式转换调控信号通路

不同基底硬度对人肝癌细胞黏附、铺展和迁移的影响

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医用生物力学 2012年第3期27卷 305-311页

作者：杨本艳姿王红兵谭乔燕杨力重庆大学生物工程学院 "生物流变科学与技术"教育部重点实验室重庆400044 重庆大学生物工程学院国家"111计划"基地重庆400044

目的研究不同基底硬度对肝癌细胞黏附、铺展和迁移行为的影响及对细胞骨架装配方式和细胞表面黏附蛋白整合素β1表达的调控,探讨基底的力学特性在肝癌细胞恶性转移过程中的作用。方法通过调节丙聚酰胺和双丙烯酰胺的比率制备不同硬度的... 详细信息

目的研究不同基底硬度对肝癌细胞黏附、铺展和迁移行为的影响及对细胞骨架装配方式和细胞表面黏附蛋白整合素β1表达的调控,探讨基底的力学特性在肝癌细胞恶性转移过程中的作用。方法通过调节丙聚酰胺和双丙烯酰胺的比率制备不同硬度的聚丙烯酰胺基底,并在基底表面裱衬2.5μg/mL纤维连接蛋白为细胞提供黏附位点;用显微观察并记录不同硬度基底上细胞黏附、铺展和迁移的变化,并用Image J软件定量分析;分别运用免疫荧光和流式细胞仪的方法检测不同基底硬度对肝癌细胞骨架装配和细胞表面整合素β1表达的影响。结果硬基底利于肝癌细胞的黏附和铺展并缩短细胞的铺展时间。过软(1.1 kPa)或过硬(玻璃)的基底都不利于肝癌细胞的迁移,肝癌细胞在中间硬度的基底上(10.7 kPa)迁移速率最高。硬基底促进细胞骨架的装配和整合素β1表达。结论基底硬度通过调节细胞骨架装配和整合素的表达从而影响肝癌细胞的黏附、铺展和迁移。

关键词：基底硬度细胞黏附细胞铺展细胞迁移肝癌细胞力学特性

低强度脉冲超声对跟腱损伤小鼠疼痛步态的治疗作用及可能机制

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中华创伤杂志 2021年第11期37卷 1026-1033页

作者：廖博朱莹谭乔燕张若彬白定群重庆医科大学附属第一医院康复医学科 400010 陆军军医大学大坪医院骨质疏松与骨发育中心战伤组织修复与康复医学研究室全军军事训练伤防治与康复实验室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对跟腱损伤小鼠疼痛步态的影响及可能机制。方法选取雄性C57BL/6小鼠,采用手术法全层离断右侧跟腱,建立跟腱损伤小鼠模型,按照随机数字表法分为跟腱损伤组和跟腱损伤+LIPUS组,每组7只。术后14 d使用Catwal... 详细信息

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对跟腱损伤小鼠疼痛步态的影响及可能机制。方法选取雄性C57BL/6小鼠,采用手术法全层离断右侧跟腱,建立跟腱损伤小鼠模型,按照随机数字表法分为跟腱损伤组和跟腱损伤+LIPUS组,每组7只。术后14 d使用Catwalk步态系统分析足印面积、站立时间、步行周期、脚爪最大强度及步幅5个参数评价小鼠步态功能变化。采用HE染色法观察各组小鼠跟腱组织形态学改变。采用免疫荧光染色法检测各组小鼠跟腱组织内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平。同时在体外分离并培养小鼠跟腱细胞,使用100 ng/ml脂多糖(LPS)诱导细胞12 h建立体外细胞模型(LPS组);并对细胞行LIPUS处理(LPS+LIPUS组);同时设置对照组(未做任何处理)。采用免疫荧光染色检测细胞内核因子-κB(NF-κB)p65核转位情况,Western blot检测iNOS和磷酸化(p)-NF-κB p65蛋白的表达。结果术后14 d,跟腱损伤+LIPUS组患肢足印面积[(0.28±0.13)cm2]大于跟腱损伤组[(0.14±0.10)cm2](P0.05)。HE染色结果显示,跟腱损伤组跟腱组织增生明显,纤维结构排列疏松且无序,并伴有新生血管生成和炎细胞浸润;跟腱损伤+LIPUS组跟腱组织纤维结构排列较整齐,且新生血管和炎细胞浸润程度均有所减轻。术后14 d跟腱损伤+LIPUS组iNOS表达量[(2.84±0.94)%]低于跟腱损伤组[(5.70±0.81)%](P<0.05)。小鼠跟腱细胞免疫荧光结果表明,与对照组相比,LPS组细胞内NF-κB p65蛋白转位入核,经LIPUS处理后可抑制NF-κB p65蛋白的核转位。Western blot检测发现,对照组跟腱细胞不表达iNOS,p-NF-κB p65蛋白表达量为(0.63±0.16);与对照组相比,LPS组细胞iNOS(0.99±0.22)和p-NF-κB p65(1.02±0.19)蛋白表达水平显著升高(P<0.05),LPS+LIPUS组iNOS(0.62±0.10)和p-NF-κB p65(0.65±0.21)蛋白表达水平较LPS组显著降低(P<0.05)。结论LIPUS治疗可改善跟腱损伤小鼠步态功能并抑制体内和体外iNOS的表达,该作用可能与LIPUS抑制NF-κB信号通路有关。

关键词：跟腱一氧化氮合酶低强度脉冲超声

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基底硬度对肝细胞和肝癌细胞融合生长的影响

医用生物力学 2013年第1期28卷 91-96页

作者：张荣王红兵杨本艳姿谭乔燕杨力重庆大学生物工程学院重庆400044

目的通过比较融合生长肝细胞(L02)与肝癌细胞(HCCLM3)对不同硬度基底(0.5、4 kPa和玻璃)的响应,探查两类细胞融合生长差异的成因。方法运用实时显微摄影技术、免疫荧光染色、流式细胞技术及Western Blot-ting等试验方法分别检测融合生长... 详细信息

目的通过比较融合生长肝细胞(L02)与肝癌细胞(HCCLM3)对不同硬度基底(0.5、4 kPa和玻璃)的响应,探查两类细胞融合生长差异的成因。方法运用实时显微摄影技术、免疫荧光染色、流式细胞技术及Western Blot-ting等试验方法分别检测融合生长L02和HCCLM3细胞在不同硬度基底上的形态特征、骨架构象、E-cad和Integrinβ1表达分布,以及Src激酶活性水平的变化。结果 (1)融合生长L02细胞呈圆形或立方形,HCCLM3细胞呈多角形,铺展和极化更为明显;随基底硬度增加,L02细胞圆度随时间变化幅度较小,HCCLM3细胞变化幅度较大。(2)融合生长的L02细胞皮质下呈现环形骨架,E-cad定位于细胞-细胞接触处,HCCLM3中皮质骨架环不完整,胞内骨架沿基底呈放射状分布,E-cad呈弥散分布于细胞质中。(3)随基底硬度增加,L02和HCCLM3细胞中E-cad表达显著降低(P<0.01),而p-Src和Integrinβ1的表达量则显著增加(P<0.01),HCCLM3较L02细胞变化明显。结论皮质下环形骨架装配与E-cad在细胞-细胞定位呈正相关,基底硬度对肝癌细胞钙黏素与整合素黏附系统平衡调节的影响较对肝细胞的影响明显。

关键词：肝细胞肝癌细胞基底硬度 E—cad分布 Src激酶活性

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基底硬度对肝细胞与肝癌细胞迁移行为的影响

医用生物力学 2011年第6期26卷 566-573页

作者：谭乔燕王红兵杨本艳姿邹小兵杨力重庆大学生物工程学院重庆400044 重庆大学化学化工学院重庆400044

目的通过比较不同硬度基底对肝细胞和肝癌细胞迁移特征的影响,研究肿瘤细胞迁移行为变化的成因。方法运用免疫荧光染色、形态学分析法和Transwell侵袭实验,观察不同硬度基底上HCCLM3和L02细胞的形态特征及对细胞运动能力进行检测和定量... 详细信息

目的通过比较不同硬度基底对肝细胞和肝癌细胞迁移特征的影响,研究肿瘤细胞迁移行为变化的成因。方法运用免疫荧光染色、形态学分析法和Transwell侵袭实验,观察不同硬度基底上HCCLM3和L02细胞的形态特征及对细胞运动能力进行检测和定量分析。结果 (1)相对于极软(0.5 kPa)和极硬(玻璃)基底,HCCLM3和L02细胞在较软基底(4 kPa)上具有较高的迁移速率和迁移净距离,且L02细胞表现出高的迁移效率。(2)HC-CLM3和L02细胞在不同硬度基底上均方位移趋势一致,较软基底上L02细胞具有较高的方向持续能力。(3)0.5和1 mg/mL三维胶原基质中,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数分别显著多于L02细胞穿透基底膜的个数;加入40μg/mL水解酶抑制剂GM6001后,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数显著增加,而L02细胞穿透基底膜的个数显著减少。结论 (1)二维较软基底上,L02细胞因有较高的方向持续能力而表现出高的迁移效率。(2)三维胶原基质中,HCCLM3细胞以不同迁移模式适应周围环境,从而表现出更大的侵袭能力。

关键词：肝细胞肝癌细胞基底硬度细胞迁移位移

FGFR3对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化影响的初步研究

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FGFR3对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化影响的初步研究

中华医学会第五次中青年骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议

作者：金旻谭乔燕陈林第三军医大学大坪医院骨代谢与修复中心

目的明确FGFR3对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、BMSCs向软骨细胞分化的作用。方法利用(R3CKO×CreER)小鼠,培养上述小鼠的BMSCs,Tamoxifen诱导敲除FGFR3并进行软骨分化诱导,采用细胞计数、定量PCR等手段检测细胞的增殖、分化情况。结果...

目的明确FGFR3对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、BMSCs向软骨细胞分化的作用。方法利用(R3CKO×CreER)小鼠,培养上述小鼠的BMSCs,Tamoxifen诱导敲除FGFR3并进行软骨分化诱导,采用细胞计数、定量PCR等手段检测细胞的增殖、分化情况。结果分离培养(R3CKO×CreER)小鼠BMSCs,倒置显微镜下观察发现接种48h内基本上

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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骨靶向治疗研究进展

中国骨质疏松杂志 2018年第12期24卷 1657-1661页

作者：谭乔燕谢杨丽李灿罗凤涛陈林陆军军医大学大坪医院康复理疗科/骨代谢与修复中心/全军战创伤中心创伤实验室/创伤烧伤复合伤国家重点实验室重庆400042

骨骼不仅是生物体重要的力学支持器官,也是机体的钙磷库,对维持体内钙磷的稳定发挥重要作用。骨组织里包含三种不同类型的细胞,即成骨细胞、破骨细胞和骨细胞,骨重建是维持成年期骨代谢和力学功能的重要机制,需要成骨细胞诱导的骨形成... 详细信息

骨骼不仅是生物体重要的力学支持器官,也是机体的钙磷库,对维持体内钙磷的稳定发挥重要作用。骨组织里包含三种不同类型的细胞,即成骨细胞、破骨细胞和骨细胞,骨重建是维持成年期骨代谢和力学功能的重要机制,需要成骨细胞诱导的骨形成作用和破骨细胞诱导的骨吸收间的动态平衡来实现。任何一方数量或功能的变化必然破坏骨代谢的动态平衡,影响骨代谢,严重时可引起骨质疏松、佩吉特病、转移性骨肿瘤等疾病。骨骼相关疾病已经成为严重威胁我国居民健康的慢性病之一,是影响国家经济、社会发展的重大公共卫生问题。常规的给药方式难于将药物理想递送,"骨靶向"概念的提出,为骨骼相关疾病的治疗提供了新思路与新方法。靶向递送不仅提高药物利用率,还能减轻药物毒副作用。根据靶向目标不同将骨骼靶向药物递送系统分为两种,一种是靶向整个骨组织的药物或载体,如四环素类、双膦酸盐类、仿生蛋白类及放射性药物类;另一种是靶向骨组织里的细胞,如靶向成骨细胞、破骨细胞、骨细胞及干细胞。本文将对此方面的研究进展进行综述。

关键词：骨骼疾病靶向骨靶向细胞进展

Wnt信号参与小鼠颅骨缺损后骨形成过程的初步研究

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 785-788页

作者：徐伟谢杨丽翁土军金旻罗凤涛黄俊兰谭乔燕杜晓兰陈林第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室骨代谢修复中心创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所康复科重庆400042

目的利用改良的小鼠颅骨缺损模型,活体动态观察颅骨缺损后骨形成过程,并对Wnt信号相关基因进行检测,为颅骨再生修复机制及促进修复措施研究提供新的数据。方法用直径2 mm的金刚石钻头于小鼠右侧颅顶骨建立颅骨缺损模型,术后2周和4周通过... 详细信息

目的利用改良的小鼠颅骨缺损模型,活体动态观察颅骨缺损后骨形成过程,并对Wnt信号相关基因进行检测,为颅骨再生修复机制及促进修复措施研究提供新的数据。方法用直径2 mm的金刚石钻头于小鼠右侧颅顶骨建立颅骨缺损模型,术后2周和4周通过Micro-CT及组织病理切片来观察缺损部位新生骨生长情况,测量其面积大小,定量分析缺损部位的骨形成能力。同时提取缺损后不同时间点缺损周围骨组织RNA,定量PCR检测成骨分化相关基因Cbfa1、OP和OC,以及Wnt通路基因Wnt3a、β-catenin及下游转录因子cyclin D1、Tcf1的表达。结果术后2周Micro-CT扫描示缺损愈合百分比为(20.1±6.0)%;术后4周缺损进一步愈合,缺损愈合百分比为(30.1±5.0)%。定量PCR结果显示Cbfa1和OP在缺损后2周表达较高,而OC则在缺损后4周达到高峰。Wnt3a、β-catenin、cyclin D1和Tcf1的mRNA表达水平在缺损后2周和4周均较缺损前明显升高。结论成功改良制作了小鼠颅骨缺损模型,并通过活体Micro-CT和组织病理染色对颅骨缺损后的修复过程进行了动态观察,进一步发现Wnt信号通路的激活可能参与颅骨缺损后骨形成过程。

关键词：颅骨缺损骨形成 Wnt信号