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一个可指示核仁定位和柯浩体定位信号Marker的构建

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中国细胞生物学学报 2013年第7期35卷 1002-1007页

作者：郑璐平毛倩卓林辰谢荔岩吴祖建谢联辉福建农林大学福建省植物病毒学重点实验室福州350002 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福州350002

通过RT-PCR获得本氏烟纤维蛋白Fibrillarin2的cDNA,并将其重组到表达载体pEarley101(黄色荧光蛋白,YFP)和pEarley102(青色荧光蛋白,CFP)上。在本氏烟叶片表皮细胞中瞬时表达融合蛋白,激光共聚焦显微镜下观察,发现蛋白定位在细胞核仁和... 详细信息

通过RT-PCR获得本氏烟纤维蛋白Fibrillarin2的cDNA,并将其重组到表达载体pEarley101(黄色荧光蛋白,YFP)和pEarley102(青色荧光蛋白,CFP)上。在本氏烟叶片表皮细胞中瞬时表达融合蛋白,激光共聚焦显微镜下观察,发现蛋白定位在细胞核仁和柯浩体上,可以作为这两种细胞器的指示Marker,并通过Western blot检测融合蛋白的表达。该Marker对明确蛋白特别是病毒编码的蛋白在细胞核中的定位以及功能推测具有重要意义。

关键词：细胞定位纤维蛋白核仁柯浩体

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水稻草矮病特异蛋白抗血清的制备及应用

植物病理学报 1999年第2期29卷 126-131页

作者：林丽明吴祖建谢荔岩林奇英谢联辉福建农业大学植物病毒研究所福州350002

采用不同ｐＨ值沉淀法及超速离心获得提纯的水稻草矮病特异蛋白。提纯的Ｓ－蛋白具有典型的蛋白紫外吸收曲线，提纯产量为２８ｍｇ／１００ｇ病叶。从ＳＤＳ－ＰＡＧＥ精提纯的Ｓ－蛋白免疫兔子上获得抗血清，经微量沉淀反应、... 详细信息

采用不同ｐＨ值沉淀法及超速离心获得提纯的水稻草矮病特异蛋白。提纯的Ｓ－蛋白具有典型的蛋白紫外吸收曲线，提纯产量为２８ｍｇ／１００ｇ病叶。从ＳＤＳ－ＰＡＧＥ精提纯的Ｓ－蛋白免疫兔子上获得抗血清，经微量沉淀反应、琼脂双扩散测定，其效价分别为１∶１０２４和１∶２５６。获得的Ｓ－蛋白抗血清与提纯的Ｓ－蛋白及感病植株，在琼脂双扩散反应中，均有明显的沉淀线出现，对照健株及提纯的水稻草矮病毒则无反应。利用制备的Ｓ－蛋白抗血清经Ａ－蛋白酶联免疫吸附法检测，结果表明：Ｓ－蛋白抗血清与提纯Ｓ－蛋白及感病植株有专化性反应，且不同品种、不同部位、接种后不同发病时间的水稻病株中Ｓ－蛋白的积累量有差异，这就为ＲＧＳＶ的检测提供了一种快速。

关键词：水稻草矮病特异蛋白抗血清制备

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水稻草矮病毒侵染的水稻根系差异蛋白鉴定

中国水稻科学 2016年第4期30卷 356-362页

作者：丁新伦谢荔岩张洁吴祖建福建农林大学植物病毒研究所/福建省植物病毒重点实验室福州350002

为鉴定与水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)侵染引起的水稻根系发育不良的相关蛋白,解析根系发育不良症状的形成机理以及水稻草矮病毒与水稻互作的分子机制,采用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)结合基质辅助激光解析串联飞行... 详细信息

为鉴定与水稻草矮病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)侵染引起的水稻根系发育不良的相关蛋白,解析根系发育不良症状的形成机理以及水稻草矮病毒与水稻互作的分子机制,采用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)结合基质辅助激光解析串联飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)对RGSV侵染水稻后根系的差异表达蛋白进行分离和鉴定,并对鉴定的差异表达蛋白进行GO聚类分析和KEGG生物通路注释。结果表明,差异倍数大于2的蛋白质点有56个,其中,表达丰度升高的点有34个,表达丰度下降的点有22个;质谱成功鉴定出27个蛋白质点,分属于25种蛋白质。GO聚类分析表明差异表达蛋白涉及14个生物学过程,在生物功能上分属10类。细胞组件分析显示差异表达蛋白定位于不同的细胞部位。KEGG通路分析显示差异蛋白参与了12个生物通路。

关键词：水稻草矮病毒水稻根系差异表达蛋白双向荧光差异凝胶电泳基质辅助激光解析串联飞行时间质谱技术

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水稻草矮病毒在水稻原生质体中的表达

微生物学报 2004年第4期44卷 530-532页

作者：林丽明吴祖建金凤媚谢荔岩谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福州350002

通过建立水稻原生质体培养体系 ,经多聚鸟氨酸 (PLO)介导将提纯的水稻草矮病毒 (Ricegrassystuntvirus,RGSV)接种到水稻原生质体内 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)及蛋白免疫印迹法 (Westernblot) ,研究RGSV在水稻原生质体内的生长周期及... 详细信息

通过建立水稻原生质体培养体系 ,经多聚鸟氨酸 (PLO)介导将提纯的水稻草矮病毒 (Ricegrassystuntvirus,RGSV)接种到水稻原生质体内 ,利用酶联免疫吸附法 (ELISA)及蛋白免疫印迹法 (Westernblot) ,研究RGSV在水稻原生质体内的生长周期及其编码蛋白的表达情况。结果表明 :RGSV在接种后 2 4h左右开始在原生质体内复制 ,36h左右达到最大值。NS6在 1 5h左右开始表达 ,在

关键词：水稻草矮病毒水稻原生质体表达纤细病毒属基因组

水稻草状矮化病毒侵染寄主水稻差异表达蛋白的鉴定和分析

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中国农业科学 2014年第9期47卷 1725-1734页

作者：丁新伦谢荔岩吴祖建福建农林大学植物病毒研究所福建省植物病毒重点实验室

【目的】对水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)侵染寄主水稻后其叶片的差异表达蛋白进行筛选、鉴定和生物信息学分析,为进一步研究RGSV和寄主水稻互作的分子机制提供线索。【方法】采用双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimension... 详细信息

【目的】对水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)侵染寄主水稻后其叶片的差异表达蛋白进行筛选、鉴定和生物信息学分析,为进一步研究RGSV和寄主水稻互作的分子机制提供线索。【方法】采用双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2D-DIGE)和Image Master 2D platinum 7.0分析软件寻找差异表达蛋白,MALDI-TOF-MS(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometry)鉴定差异蛋白,利用BioTools软件搜索NCBI数据库,寻找匹配的相关蛋白质和功能查询。采用GOminer软件对差异蛋白进行GO(Gene ontology)聚类分析,KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)数据库分析差异蛋白所参与的生物通路。【结果】建立了RGSV侵染与未侵染水稻的叶片双向荧光差异凝胶电泳图谱,RGSV病株与健株相比,差异倍数大于1.5的差异蛋白质点有173个,其中表达丰度升高的点有72个,表达丰度下降的点有101个,质谱鉴定了44个差异蛋白质点,25个获得成功鉴定,分属于24种蛋白质,包括RGSV的2种蛋白20.6K非结构蛋白和P5蛋白,水稻中的蛋白推定的核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基、景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶前体、推定的酪氨酸磷酸酶、HAD超家族水解酶-亚族IA蛋白变体3蛋白、水稻核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基结合2-羧基阿拉伯糖醇-1,5-二磷酸复合体、类似C1结构域蛋白以及其他一些功能未知蛋白和假定蛋白。对已鉴定蛋白的生物信息分析显示,差异蛋白涉及氮素固定、氮循环代谢过程、含氮化合物代谢过程、单一生物体代谢过程、代谢过程和生物过程等6个生物学过程,在生物功能上分属7类,包括分子功能、酸胺连接酶活性、酰胺连接酶活性、催化活性、谷氨酸氨连接酶、连接酶活性和形成C-N键的连接酶活性,在细胞组件上,差异蛋白分布于不同的细胞位置,涉及细胞组分、细胞器、细胞、膜结合细胞器、囊(泡)、细胞部分、膜结合囊(泡)、胞内、胞内部分、胞内细胞器、细胞质、胞内膜结合细胞器、细胞质部分、质体、细胞质囊(泡)和细胞质膜结合囊(泡)。KEGG通路分析显示,差异蛋白参与了代谢途径、光合生物固碳反应、碳代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢、氨基酸生物合成、丙酮酸盐代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、谷胱甘肽代谢和氮代谢途径等10个KEGG代谢通路。【结论】RGSV侵染诱导了水稻差异蛋白质表达,获得了一些与RGSV侵染水稻相关的蛋白质分子,差异蛋白涉及到多个功能类别。其中与氮有关的生物学过程和光合作用过程变化较为明显。

关键词：水稻草状矮化病毒差异表达蛋白 2D-DIGE MALDI-TOF-MS

水稻条纹病毒NS2和NS3基因共干扰转基因水稻的培育及抗病性分析

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病毒学报 2014年第6期30卷 661-667页

作者：郑璐平林辰谢荔岩吴祖建谢联辉福建省植物病毒学重点实验室福州350002 福建农林大学生物化学与分子生物学教育部重点实验室福州350002 鲅鱼圈出入境检验检疫局营口115007

NS2和NS3是水稻条纹病毒编码的两个转录后基因沉默抑制子,沉默抑制子往往与病毒致病性相关。本研究利用重叠PCR方法将NS2和NS3基因的部分cDNA片段重组后连接到RNAi载体,并借助PstⅠ将其重组到植物表达载体PXQ上;通过农杆菌介导法侵染水... 详细信息

NS2和NS3是水稻条纹病毒编码的两个转录后基因沉默抑制子,沉默抑制子往往与病毒致病性相关。本研究利用重叠PCR方法将NS2和NS3基因的部分cDNA片段重组后连接到RNAi载体,并借助PstⅠ将其重组到植物表达载体PXQ上;通过农杆菌介导法侵染水稻日本晴种子的愈伤组织,经新霉素（G418）抗性筛选获得31株转基因植株。对T0代转基因植株进行PCR及Southern blot分析结果显示,目的基因已成功转入水稻基因组中,并且不同转化植株含有目的基因的拷贝数不同;抗病性实验表明,与野生型植株相比,T0代转基因水稻能推迟RSV发病时间10~20d,导致病毒积累量下降30%~50%,且其下降量与发病时间延迟有相关性。

关键词：水稻条纹病毒 NS2 NS3 转基因水稻抗病性

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农杆菌介导的水稻草矮病毒NS6基因的转化

福建农林大学学报（自然科学版） 2003年第3期32卷 288-291页

作者：林丽明张春嵋谢荔岩吴祖建谢联辉福建农林大学植物病毒研究所福建福州350002

水稻草矮病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)RNA6片段毒义链编码的非结构蛋白NS6,与病害症状密切相关,被称为病害特异蛋白.因此,应用农杆菌介导法,选取对RGSV表现不同抗性的台农67、中花6号、中花12号、中花15号、台中1号、合系28和06381... 详细信息

水稻草矮病毒(Ricegrassystuntvirus,RGSV)RNA6片段毒义链编码的非结构蛋白NS6,与病害症状密切相关,被称为病害特异蛋白.因此,应用农杆菌介导法,选取对RGSV表现不同抗性的台农67、中花6号、中花12号、中花15号、台中1号、合系28和063817个水稻品种,以其未成熟胚或成熟胚预培养4d后,诱导生长旺盛的愈伤组织为外植体,将NS6基因导入其中,对影响水稻再生及农杆菌转化的主要因素进行了比较研究,并获得了转NS6基因工程植株.结果表明,以未成熟胚为受体,获得的抗性愈伤组织转化率明显高于成熟胚;水稻不同品种对农杆菌转化反应不同;添加一定浓度乙酰丁香酮和葡萄糖,可提高抗性愈伤组织形成率;选用G418进行抗性筛选能获得转NS6基因再生植株,用卡那霉素筛选产生的愈伤组织则未能获得再生植株.

关键词：农杆菌介导水稻草矮病毒 NS6基因基因转化病害特异蛋白抗性致病性

杨梅叶提取物抗烟草花叶病毒活性及其化学成分初步研究

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福建农林大学学报（自然科学版） 2004年第4期33卷 441-443页

作者：沈建国谢荔岩翟梅枝林奇英谢联辉福建农林大学植物病毒研究所生物农药与化学生物学教育部重点实验室福建福州350002

以烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)为供试病毒,对杨梅叶提取物抗病毒活性进行测定.结果表明,杨梅叶提取物具有较强的体外钝化和抗病毒侵染作用;通过系统预试和含量测定,初步确定杨梅叶提取物中主要含有黄酮和鞣质2类成分,两者含... 详细信息

以烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)为供试病毒,对杨梅叶提取物抗病毒活性进行测定.结果表明,杨梅叶提取物具有较强的体外钝化和抗病毒侵染作用;通过系统预试和含量测定,初步确定杨梅叶提取物中主要含有黄酮和鞣质2类成分,两者含量分别在水和体积分数为70%的乙醇提取物中较高.

关键词：杨梅烟草花叶病毒叶提取物 TMV 侵染活性乙醇提取物初步研究化学成分体外

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拮抗菌SB1的鉴定及其抗菌物质的分析

微生物学通报 2010年第7期37卷 986-991页

作者：连玲丽谢荔岩郑璐平林奇英福建农林大学植物病毒研究所福建福州350002 福建农林大学生命科学学院福建福州350002 生物农药与化学生物学教育部重点实验室福建福州350002

对番茄根系菌株SB1的抗菌活性进行测定,结果表明该菌株对多种植物病原真菌、细菌具有明显的抑制作用,表现出广谱抗菌活性。通过菌体形态、生理生化反应及16SrDNA序列分析,鉴定菌株SB1为枯草芽孢杆菌内生亚种。以青枯雷尔氏菌为指示菌,... 详细信息

对番茄根系菌株SB1的抗菌活性进行测定,结果表明该菌株对多种植物病原真菌、细菌具有明显的抑制作用,表现出广谱抗菌活性。通过菌体形态、生理生化反应及16SrDNA序列分析,鉴定菌株SB1为枯草芽孢杆菌内生亚种。以青枯雷尔氏菌为指示菌,测定了菌株SB1抗菌物质的理化性质及组成。结果表明,其抗菌物质表现出良好的热稳定性、水溶性和醇溶性,且对紫外线照射和蛋白酶K处理不敏感。高效液相色谱分析结果进一步显示菌株SB1的抗菌物质中含有抗菌肽Surfactin。

关键词：拮抗菌枯草芽孢杆菌抗菌物质青枯雷尔氏菌