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作者：谢芳一广州中医药大学

学位级别：硕士

随着生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病(diabetes mellitus, DM)的发病率逐年上升,已成为继心血管疾病和肿瘤之后的第三大严重危害人类健康的疾病。在2011年11月14日,即第五个“联合国糖尿病日”上,我国发布的统计结果显示,目前我... 详细信息

随着生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病(diabetes mellitus, DM)的发病率逐年上升,已成为继心血管疾病和肿瘤之后的第三大严重危害人类健康的疾病。在2011年11月14日,即第五个“联合国糖尿病日”上,我国发布的统计结果显示,目前我国糖尿病的患病人数已经达到了9240万(其中2型糖尿病占90%以上),成为世界上糖尿病患者人数最多的国家。而且,糖尿病的患病人群有年轻化的趋势,与1994年相比,25-34岁人群糖尿病的患病率增加了8倍。我国20岁以上人群中男性和女性糖尿病的患病率分别高达10.6%和8.8%,糖尿病前期的患病率则高达15.5%。在我国,糖尿病患者的人数高达9200万,而“糖尿病后备军”(糖尿病前期人群)则高达1.48亿。面对这样一个病程长且易引起并发症的疾病,面对我国过亿的早期2型糖尿病患者,应该采取早预防、早治疗的方法对其进行控制。而这也正与中医治未病思想中的“未病先防、既病防变”相契合。因此,我们将治未病的思想作为本课题的指导思想,针对早期2型糖尿病患者常见的“喜食肥甘厚腻,暴饮暴食,形体肥胖,尤以腹型肥胖为著,平时体力虚弱、乏力、动则汗出、嗜睡困倦”等症状,对早期2型糖尿病进行的临床前的动物实验研究。一、研究目的本课题旨在探索建立早期2型糖尿病大鼠模型,并在此模型的基础上用拆方的方法对临床上有效的中药复方进行研究,分别以温阳复方、温阳药对、补肾阳复方、补肾阳药对、阴性复方(即缺温热类中药的复方)进行干预,以二甲双胍为阳性对照药,观察药物对大鼠体重、Lee’s指数、肥胖程度、血糖血脂各项指标、体温的影响,并在此基础上观察药物对肝脏组织GLUT2蛋白、肌肉组织GLUT4蛋白的表达水平,探讨我们所选择的中药复方对早期2型糖尿病大鼠模型的治疗效果,为药物的开发机临床应用奠定理论基础。二、研究方法 SD大鼠,SPF级,雄性,体重120-150g,随机抽取10只大鼠作为正常对照组,给予普通标准饲料喂养,其余大鼠给予高糖高脂饲料。喂养12周后,选取体重超过正常组20%的大鼠,抽取其中的10只体重较重的和10只体重较轻的大鼠,检测其空腹血糖、血清甘油三酯、总胆固醇、胰岛素水平等指标,确定模型成功后,将成模大鼠随机分为模型对照组,阳性药二甲双胍组,阴性复方组、补肾阳药对组、补肾阳复方组、温阳药对组、温阳复方组,连续给药8周。试验期间,每周记录大鼠的体重,给药第四周,检测大鼠的空腹血糖和体温,给药第六周,大鼠行口服糖耐量实验,给药第八周末,检测大鼠的空腹血糖和体温,然后下腔静脉取血,分离血清,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇、甘油三酯、高低密度脂蛋白胆固醇水平;酶标仪检测血清游离脂肪酸水平;ELISA法测定糖化血红蛋白、放免法检测血清空腹胰岛素水平,处死大鼠后,取肝脏、肾脏、脂肪组织,称重并记录其湿重,同时计算体脂比和肝脏系数、肾脏系数。采用Western blotting法检测肝脏组织中GLUT2蛋白的表达和肌肉组织中GLUT4蛋白的表达。三、研究结果 (一)早期2型糖尿病模型的探索运用高糖高脂饲料喂养大鼠12周,模拟肥甘厚腻饮食,能模拟出形体肥胖、体力虚弱、乏力、嗜睡困倦等临床症状。该模型能显著性升高大鼠血清甘油三酯、总胆固醇、胰岛素含量,就血糖而言,能有一定的升高,但与正常组比较,无显著性差异,这与早期2型糖尿病患者空腹血糖未达到诊断水平相一致。该早期2型糖尿病模型具有一定的可行性。 (二)对早期2型糖尿病大鼠模型糖脂代谢的影响温阳复方能减轻大鼠体重、降低体脂比、抑制血糖升高、降低糖化血红蛋白、肝糖原、胰岛素、血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白及游离脂肪酸,升高高密度脂蛋白,其效果与阳性药二甲双胍相近或优于二甲双胍。其他药物治疗组中,有清热化湿药物的,在降脂方面都有一定的效果,但降糖效果不明显。而补肾阳药在降糖降脂方面效果均不明显。 (三)对降糖作用信号通路的影响温阳复方能提高早期2型糖尿病大鼠刚脏组织中GLUT2和肌肉组织中GLUT4蛋白的表达,其效果优于阳性药二甲双胍。而其他药物治疗组效果不明显。四、结论本实验成功建立了早期2型糖尿病大鼠模型。温阳复方能有效减轻体重,纠正血糖、血脂紊乱,改善胰岛素抵抗,提高肝脏组织中GLUT2和肌肉组织中GLUT4蛋白的表达,而补肾阳复方的表现不佳。本实验结果可反馈并进一步指导临床用药。

关键词：早期2型糖尿病大鼠模型温阳药中药复方糖脂代谢蛋白免疫印迹法

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雪峰虫草不同提取部位对诱导NB4和U937细胞凋亡的影响

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中成药 2021年第8期43卷 2169-2173页

作者：蔡媛杜青谢芳一张水寒湖南省中医药研究院中药研究所湖南长沙410006

目的探讨雪峰虫草不同提取部位对诱导NB4和U937细胞凋亡的影响机制。方法将对数期2种细胞随机分为正常组、DMSO组、水提取物组、乙酸乙酯提取物组和醇提取物组,采用流式细胞仪检测雪峰虫草不同提取物诱导NB4、U937细胞凋亡作用,采用West... 详细信息

目的探讨雪峰虫草不同提取部位对诱导NB4和U937细胞凋亡的影响机制。方法将对数期2种细胞随机分为正常组、DMSO组、水提取物组、乙酸乙酯提取物组和醇提取物组,采用流式细胞仪检测雪峰虫草不同提取物诱导NB4、U937细胞凋亡作用,采用Western blot法检测NB4、U937细胞内Bcl⁃2、Cyt C、Bax、caspase⁃9蛋白表达。结果正常组与DMSO组无统计学差异(P>0.05),与DMSO组比较,水提取物组、乙酸乙酯提取物组和醇提取物组NB4、U937细胞凋亡增加(P<0.05,P<0.01);相较水提取物组和醇提取物组,乙酸乙酯提取物组诱导细胞凋亡作用更为明显(P<0.05,P<0.01);NB4、U937细胞内Cyt C、Bax和caspase⁃9蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),Bcl⁃2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论雪峰虫草不同提取物皆能诱导NB4、U937细胞凋亡,且乙酸乙酯提取物效果最佳,其作用机制可能与线粒体凋亡途径中细胞内Bax/Bcl⁃2蛋白表达比例失调,胞质中Cyt C分泌增多,caspase⁃9蛋白表达增加有关。

关键词：雪峰虫草 NB4 U937 细胞凋亡

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葛根芩连汤辨证加减治疗在2型糖尿病患者血糖控制中的效果观察

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婚育与健康 2023年第14期 112-114页

作者：谢芳一长沙市第四医院药学部

目的：观察2型糖尿病患者血糖控制治疗中予以葛根芩连汤辨证加减的临床效果。方法：在本院收治的2型糖尿病患者中抽取病例，时间为2022年1月—2022年12月，40例依照掷硬币法分组，20例设定成对照组，标准为得到硬币正面者，治疗予以二... 详细信息

目的：观察2型糖尿病患者血糖控制治疗中予以葛根芩连汤辨证加减的临床效果。方法：在本院收治的2型糖尿病患者中抽取病例，时间为2022年1月—2022年12月，40例依照掷硬币法分组，20例设定成对照组，标准为得到硬币正面者，治疗予以二甲双胍，20例设定成试验组，标准为得到硬币反面者，治疗予以二甲双胍+葛根芩连汤辨证加减，两组进行临床疗效、血糖水平、胰岛功能、中医证候积分、不良反应发生率的评比。结果：试验组、对照组在临床治疗总有效率的对比上，显示出的差异有统计学意义存在（P0.05）；治疗后，试验组均低于对照组（P<0.05）；治疗后两组HOMA-IS高于治疗前，HOMA-IR低于治疗前，且试验组的变化更优于对照组（P<0.05）；治疗后对比两组患者的口渴多饮、小便频数、多食善饥、疲乏无力等中医证候积分，更低的为试验组，其与对照组存在的差异有统计学意义（P<0.05）；不良反应发生率相比，试验组低，同对照组间得到统计学差异（P<0.05）。结论：葛根芩连汤辨证加减治疗不仅有利于控制2型糖尿病患者的血糖水平，改善胰岛素抵抗和临床症状，且有利于提高临床治疗效果，安全可行，值得临床借鉴和积极推广。

关键词： 2型糖尿病葛根芩连汤辨证加减血糖控制

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虎蝎化积膏联合顺铂诱导肝癌H22细胞凋亡作用及其机制

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北京中医药大学学报 2019年第5期42卷 409-415页

作者：杜青蔡媛沈冰冰李心亮谢芳一张水寒湖南省中医药研究院

目的探讨虎蝎化积膏联合顺铂诱导肝癌H22细胞凋亡作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组和虎蝎化积膏组,连续给药3 d后,腹主动脉取血,制备虎蝎化积膏含药血清。将对数期H22细胞随机分为5组:正常组、空白血清对照组、顺铂组、20... 详细信息

目的探讨虎蝎化积膏联合顺铂诱导肝癌H22细胞凋亡作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为空白对照组和虎蝎化积膏组,连续给药3 d后,腹主动脉取血,制备虎蝎化积膏含药血清。将对数期H22细胞随机分为5组:正常组、空白血清对照组、顺铂组、20%虎蝎化积膏含药血清组、20%虎蝎化积膏含药血清+顺铂组,采用CCK-8法检测虎蝎化积膏含药血清对H22细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色法观察各组H22细胞凋亡形态变化;高内涵细胞成像分析技术检测H22细胞内B细胞淋巴瘤2基因(Bcl-2)、凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2关联蛋白X(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶9(caspase-9)蛋白表达变化。结果与空白血清对照组比较,虎蝎化积膏含药血清组H22细胞增殖呈剂量-时间依赖关系的抑制作用,20%虎蝎化积膏含药血清的作用效果最佳。与空白血清对照组和单一用药组比较,20%虎蝎化积膏含药血清+顺铂组H22细胞呈现不同程度的核染色质聚集、核固缩,呈现出更典型的细胞凋亡特征;H22细胞内Cyt C、Bax和caspase-9平均荧光强度值明显增加(P<0.01、P<0.05),蛋白表达明显增多;Bcl-2平均荧光强度值明显降低(P<0.01、P<0.05),蛋白表达显著减少。结论 20%虎蝎化积膏含药血清联合顺铂可明显抑制肝癌细胞H22增殖,诱导其凋亡,作用机制可能与细胞内Bax和Bcl-2蛋白表达比例失调,胞质中Cyt C分泌增多,促使caspase-9蛋白表达增加有关。

关键词：虎蝎化积膏肝癌荷瘤株H22 细胞凋亡 B细胞淋巴瘤2基因凋亡相关蛋白细胞色素C B细胞淋巴瘤2关联蛋白X 天冬氨酸蛋白水解酶9

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温阳药对糖尿病前期大鼠降糖作用的研究

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中药新药与临床药理 2014年第2期25卷 139-143页

作者：赵亚谢芳一陈长青梁楚燕侯少贞吴凤玲赖小平广州中医药大学广东广州510006 湖南省中医药研究院湖南长沙410000

目的研究温阳药对糖尿病前期大鼠的降糖作用机制。方法制备高糖高脂饮食诱导糖尿病前期肥胖大鼠模型,动物随机分为8组:正常对照组、模型组、阳性对照药(二甲双胍)组、阴性复方组(无温阳及补肾药对)、补肾阳药对组、补肾阳复方组、温阳... 详细信息

目的研究温阳药对糖尿病前期大鼠的降糖作用机制。方法制备高糖高脂饮食诱导糖尿病前期肥胖大鼠模型,动物随机分为8组:正常对照组、模型组、阳性对照药(二甲双胍)组、阴性复方组(无温阳及补肾药对)、补肾阳药对组、补肾阳复方组、温阳药对组、温阳复方组。模型复制后开始给药,每天1次,连续8周。实验结束后采用Western bolt法检测肝脏葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、肌肉葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达水平。结果与模型组比较,温阳复方组能减轻大鼠体质量、降低肥胖指数(Lee’s Index)、抑制血糖升高(P<0.01,P<0.05),还能明显上调大鼠肝脏GLUT2及骨骼肌GLUT4的表达水平(P<0.01)。结论温阳药的降糖作用可能与改善GLUT2及GLUT4的表达抑制有关。

关键词：温阳药糖尿病前期肥胖葡萄糖转运蛋白2 葡萄糖转运蛋白4 大鼠

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生酸枣仁及其炮制品镇静催眠作用及对失眠大鼠脑电图的影响

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中药药理与临床 2015年第6期31卷 94-97页

作者：翟旭峰肖小春娄勇军李柯谢芳一郑兵无限极(中国)有限公司广州510665 湖南省中医药研究院长沙410013

目的:观察生酸枣仁及其炮制品炒酸枣仁对小鼠的镇静催眠作用及对失眠大鼠脑电图、下丘脑一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性的影响。方法:通过观察生酸枣仁及炒酸枣对戊巴比妥钠催眠小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间的影响,研究其对小鼠的镇静催... 详细信息

目的:观察生酸枣仁及其炮制品炒酸枣仁对小鼠的镇静催眠作用及对失眠大鼠脑电图、下丘脑一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性的影响。方法:通过观察生酸枣仁及炒酸枣对戊巴比妥钠催眠小鼠睡眠潜伏期及睡眠时间的影响,研究其对小鼠的镇静催眠作用。通过观察生酸枣仁及炒酸枣对失眠大鼠脑电图的影响,研究其对失眠大鼠的治疗作用;通过测定下丘脑一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性,探讨其可能的作用机理。结果:5.46g/kg生酸枣仁及2.73g/kg炒酸枣仁具有缩短戊巴比妥钠小鼠睡眠潜伏期及延长戊巴比妥钠睡眠时间的作用,其作用随服用剂量的增加而增强。同剂量炒酸枣仁的作用有优于生酸枣仁的趋势,说明生酸枣仁通过炒制后,其镇静、催眠作用增强。与模型组比较,7.80g/kg生酸枣仁及1.95g/kg炒酸枣仁能使大鼠脑电图觉醒期显著缩短,慢波睡眠期显著延长;大鼠下丘脑一氧化氮(NO)含量显著提高,一氧化氮合酶(NOS)活性显著增强;其作用随服用剂量的增加而增强。同剂量炒酸枣仁的作用有优于生酸枣仁的趋势,说明生酸枣仁通过炒制后,其作用有所增强。结论:生酸枣仁及炒酸枣仁能缩短小鼠戊巴比妥钠睡眠潜伏期及延长戊巴比妥钠睡眠时间,具有镇静催眠作用。生酸枣仁及炒酸枣仁能缩短失眠大鼠觉醒期时间,延长大鼠慢波睡眠期时间,具有治疗失眠大鼠的作用。其作用机理可能与增加下丘脑一氧化氮(NO)含量及提高一氧化氮合酶(NOS)活性有关。

关键词：酸枣仁镇静催眠脑电图一氧化氮一氧化氮合酶

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理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜屏障IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的影响

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中国实验动物学报 2023年第2期31卷 217-224页

作者：杜青李心亮曾宏亮徐琳本谢芳一湖南省中医药研究院长沙410006 长沙市第四医院长沙410006

目的探讨理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的调控作用。方法采用番泻叶水煎液1.2 g/mL联合疲劳游泳建立脾虚型腹泻大鼠模型。模型大鼠随机分为模型组、蒙脱石散组(0.9 g/kg)和理中丸低、高剂量组(0.81和3.... 详细信息

目的探讨理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的调控作用。方法采用番泻叶水煎液1.2 g/mL联合疲劳游泳建立脾虚型腹泻大鼠模型。模型大鼠随机分为模型组、蒙脱石散组(0.9 g/kg)和理中丸低、高剂量组(0.81和3.24 g/kg),每组8只;另选8只正常大鼠作为空白组。连续给药14 d,造模结束后可见大鼠体重减轻,精神倦怠、眯眼聚堆、少动,大便质地偏软或者便溏,肛周污秽,提示模型复制成功。采用比色法检测血清淀粉酶和D-木糖水平,阿利新蓝和过碘酸雪夫(AB-PAS)染色检测结肠黏膜形态结构,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测黏蛋白2(MUC2)和水通道蛋白3/4(AQP3、AQP4)的表达,免疫荧光法检测结肠组织claudin-2蛋白表达,实时荧光定量-PCR(RT-PCR)法检测白介素-22(IL-22)和肠黏膜上皮跨膜蛋白2(claudin-2)基因相对表达量(2-ΔΔCt值)。结果与空白组比较,模型组大鼠稀便率、稀便级和腹泻指数显著增加,结肠组织黏膜层上皮细胞出现不同程度的萎缩,黏膜表面结构疏松水肿,杯状细胞减少,血清淀粉酶和D-木糖含量减少,结肠组织中MUC2、AQP3和AQP4蛋白表达量相对降低,IL-22 mRNA表达量相对减少和claudin-2 mRNA表达量相对增加,claudin-2蛋白荧光强度明显增强(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,理中丸高剂量组大鼠稀便率、稀便级和腹泻指数均明显减少,结肠黏膜病理损伤明显减轻,血清淀粉酶和D-木糖含量增加,结肠组织中MUC2、AQP3和AQP4蛋白表达量相对升高,IL-22 mRNA表达量相对增加,claudin-2 mRNA和claudin-2蛋白表达量相对减少,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论理中丸明显调节脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜屏障结构功能,其机制可能与增加结肠AQP3/4表达,调控IL-22-MUC2/claudin-2信号通路有关。

关键词：理中丸脾虚型腹泻黏膜屏障水通道蛋白3/4 白介素-22 claudin-2

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消渴病(2型糖尿病)的分期及证候研究进展

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中医药学报 2011年第2期39卷 101-104页

作者：谢芳一陈长青侯少贞广州中医药大学广东广州510006

本文通过分析近10年有关消渴病(2型糖尿病)证候、病机和病理的文献资料,总结归纳了消渴病早、中、晚期各自的证候特点。认为治疗消渴病不能固守阴虚为本、燥热为标的病机,而应遵从分期、辨证论治。

关键词：消渴病/糖尿病分期证候病机

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蓝莓复合果汁饮料对兔干眼症模型影响的实验研究

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湖南中医杂志 2013年第12期29卷 135-137页

作者：葛亚中罗珍李柯谢芳一杨家慧郑兵无限极(中国)有限公司广东广州510665 湖南省中医药研究院中药研究所湖南长沙410013

目的:观察蓝莓复合果汁饮料对实验性兔干眼症模型的缓解效果。方法:新西兰兔30只(60只眼),随机分为空白对照组,模型对照组,蓝莓低、中、高剂量组和阳性对照组,每组5只(10只眼)。除空白对照组外,其余组动物双眼滴0.25%氯霉素滴眼液(每次... 详细信息

目的:观察蓝莓复合果汁饮料对实验性兔干眼症模型的缓解效果。方法:新西兰兔30只(60只眼),随机分为空白对照组,模型对照组,蓝莓低、中、高剂量组和阳性对照组,每组5只(10只眼)。除空白对照组外,其余组动物双眼滴0.25%氯霉素滴眼液(每次每眼3滴,每天2次)并适应性喂养3d后切除泪腺制作干眼症模型。手术后第8天起,各组予相应药物进行治疗,连续4周。治疗的同时各组每周进行1次Schirmer I试验、泪膜破裂时间记录及角膜结膜虎红染色情况观察,比较各组结果。结果:各给药组动物Schirmer I试验滤纸湿长度和泪膜破裂时间分别在用药3周及4周后与模型对照组比较显著增加(P<0.05,P<0.01);蓝莓高剂量组在用药2周后、其他给药组在用药3周后虎红染色点数与模型组比较显著减少(P<0.05,P<0.01)。结论:蓝莓复合果汁饮料对实验性干眼症有改善作用。

关键词：干眼症蓝莓复合果汁饮料兔实验研究

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复方丹参片治疗2型糖尿病大鼠的实验研究

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中药新药与临床药理 2011年第5期22卷 536-538页

作者：陈长青侯少贞蒋东旭吴凤玲谢芳一赖小平东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院广东东莞523808 广州中医药大学中药学院广州510006

目的考察复方丹参片对2型糖尿病大鼠的疗效。方法采用高糖高脂喂饲加注射小剂量链尿作菌素(STZ)的方法建立大鼠2型糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组,达美康组和复方丹参片组,并设正常对照组。给药4周后测定各组大鼠血糖、胰岛素、... 详细信息

目的考察复方丹参片对2型糖尿病大鼠的疗效。方法采用高糖高脂喂饲加注射小剂量链尿作菌素(STZ)的方法建立大鼠2型糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组,达美康组和复方丹参片组,并设正常对照组。给药4周后测定各组大鼠血糖、胰岛素、糖耐量、胰岛素耐量。结果与给药前比较,复方丹参片治疗后2型糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平均下降,胰岛素敏感指数提高,糖耐量改善,对外源性胰岛素的敏感性增强(P一定的治疗作用。

关键词：复方丹参片 2型糖尿病大鼠

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