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贵州产铁皮石斛叶安全性评价及其多糖降脂作用研究

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贵州产铁皮石斛叶安全性评价及其多糖降脂作用研究

作者：谢宏晨四川大学

学位级别：硕士

铁皮石斛是我国传统名贵中药,具有独特的药用价值,被誉为“中华九大仙草之首”,始载于《神农本草经》,传统中医常将其用于滋阴清热、生津益胃、止咳润肺。铁皮石斛广泛分布于我国安徽、浙江、贵州、云南、广西等地,铁皮石斛叶的产量很高... 详细信息

铁皮石斛是我国传统名贵中药,具有独特的药用价值,被誉为“中华九大仙草之首”,始载于《神农本草经》,传统中医常将其用于滋阴清热、生津益胃、止咳润肺。铁皮石斛广泛分布于我国安徽、浙江、贵州、云南、广西等地,铁皮石斛叶的产量很高,但其仅在民间食用,缺乏食品使用标准,造成很大程度的资源浪费。铁皮石斛(茎部)多糖已被证实具有增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、抗衰老等多种药理功能,是铁皮石斛中重要的功能成分。据检索,有关铁皮石斛叶多糖的功能性研究很少,目前被证实的功能仅有抗氧化和调节免疫,但对其作用机理研究较少;且不同地区铁皮石斛的理化性质、多糖含量有差异。本研究以贵州产铁皮石斛叶为原材料,研究其营养成分并进行安全性评价,进一步采用水提醇沉法提取其多糖,分别从体内、外的角度探究其降脂功能及机制。本研究从以下几个方面展开。1.铁皮石斛叶的营养成分分析。方法:参考国家标准,对铁皮石斛叶粉末中的水分、粗脂肪、粗多糖、游离氨基酸、蛋白质、总糖、总酚、总黄酮及矿物质元素等多种成分进行检测。结果:水分含量为:10.14%,粗脂肪含量为:5.81%,粗多糖含量为:8.08%,蛋白质含量:10.5%,总糖含量:13.6%,总酚含量:0.42%,总黄酮含量:0.23%,游离氨基酸总含量:29.17 mg/g,矿物质元素中钾含量:268.59 mg/g,钙含量:50.44 mg/g,镁含量:19.62μg/g,铝含量:1.78 mg/g,人体必需微量元素锰含量:1.645.62μg/g,锶含量:368.77μg/g;铁含量351.27μg/g;锌含量:130.86μg/g,各指标符合国家食品标准。2.铁皮石斛叶的安全性评价。方法:参照食品安全国家标准GB15193.3分别进行急性经口毒性试验、细菌回复突变试验、哺乳动物红细胞微核试验、体外哺乳类细胞染色体畸变试验、致畸试验及90天经口毒性试验,对其安全性进行评价。结果:铁皮石斛叶对SD大鼠急性经口LD大于10 g/kg·bw,判属实际无毒级别。细菌回复突变试验、哺乳动物红细胞微核试验和体外哺乳类细胞染色体畸变试验三项遗传毒性试验结果均为阴性,未发现其具有遗传毒性。大鼠致畸试验表明:受铁皮石斛叶溶解度限制,在人体推荐摄入量50倍(3.75 g/kg·bw)的最高剂量下,铁皮石斛叶对母体无毒性作用,对胎鼠无致畸作用。大鼠90天喂养试验表明,在雄鼠8.37 g/kg·bw,雌鼠8.73 g/kg·bw的实际最高摄入剂量下(分别为人体推荐摄入量的112倍和116倍),铁皮石斛叶未引起大鼠的整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学等方面重要指标的异常变化,即雄鼠和雌鼠实际摄入铁皮石斛叶未观察到有害作用的最大剂量(NOAEL)分别为8.37 g/kg·bw和8.73 g/kg·bw。3.铁皮石斛叶多糖的提取及理化分析。方法:采用水提醇沉法提取铁皮石斛叶多糖,再用Sevage法脱除游离蛋白,得到铁皮石斛叶粗多糖。采用苯酚-硫酸法测定总糖含量,咔唑-硫酸法测定糖醛酸含量,考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,高效液相色谱(HPLC)与蒸发光散射检测器(ELSD)联用的方法测定分子质量;用PMP柱前衍生高效液相色谱法,测定铁皮石斛叶多糖的单糖组成。结果:铁皮石斛叶多糖含量为49.94%,糖醛酸含量为19.97%,蛋白质含量为0.32%。铁皮石斛叶多糖有两个主要组分,分子质量分别为54012 k Da和210 k Da;铁皮石斛叶单糖组成为甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖,其摩尔比为0.37﹕0.21﹕0.01﹕0.11﹕0.78。4.铁皮石斛叶多糖降脂功能及机制的探究。方法:建立斑马鱼高血脂模型,通过测量血脂光密度总和来反映降脂程度,验证铁皮石斛叶多糖的体内降脂作用。通过体外模拟肠道内环境,探究铁皮石斛叶多糖对胆固醇酯酶、胰脂酶的抑制作用,以及体外结合胆汁酸的能力和对胆汁酸胶束体的影响。结果:斑马鱼高血脂模型的降血脂试验结果表明,与模型对照组相比,辛伐他汀阳性对照组、1.0 mg/m L和2.0 mg/m L铁皮石斛叶多糖组的血脂下降率分别为36.15%、35.44%、44.49%(P<0.05);胆固醇酯酶和胰脂酶抑制试验表明,铁皮石斛叶多糖对胆固醇酯酶和胰脂酶的抑制作用均随着多糖浓度的增加而增强(P<0.05),剂量反应关系显著;体外结合胆汁酸试验表明,与空白对照相比,铁皮石斛叶多糖各剂量组有统计学意义(P<0.05),具有体外结合胆汁酸的能力;对胆汁酸胶束体的影响试验表明,随着铁皮石斛叶多糖浓度增加,胆汁酸胶束体粒径增大(P<0.05),Zeta电位降低(P<0.05),表明铁皮石斛叶多糖会降低胆汁酸胶束体稳定性。

关键词：铁皮石斛叶铁皮石斛叶多糖营养成分安全性评价降脂作用

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千斤拔混合粉对大鼠骨结构功能的改善作用

环境与职业医学 2021年第3期38卷 294-302页

作者：郭橹橹谢宏晨刘力进唐萌萌黄毅娜四川大学华西公共卫生学院四川成都610041 四川大学华西第四医院四川成都610041

[背景]千斤拔作为常用中药含有丰富的异黄酮类化合物,有抗骨质疏松的潜力。然而目前对于含千斤拔成分的骨质疏松保健食品的研发甚少。[目的]研究一款含千斤拔的新型保健食品改善骨质疏松的效果及机制探讨。[方法]根据《食品安全国家标... 详细信息

[背景]千斤拔作为常用中药含有丰富的异黄酮类化合物,有抗骨质疏松的潜力。然而目前对于含千斤拔成分的骨质疏松保健食品的研发甚少。[目的]研究一款含千斤拔的新型保健食品改善骨质疏松的效果及机制探讨。[方法]根据《食品安全国家标准急性经口毒性试验》的限量法进行千斤拔混合配方粉急性经口毒性试验;采用去势成年雌鼠建立骨质疏松模型,SPF级成年雌性未孕SD大鼠32只,按体重分层后随机均分为假手术组和模型组(细分为模型对照组、模型+千斤拔混合粉组和模型+面粉混合粉组)。模型对照组给予水,其余两模型组每日按10 mL·kg^(-1)(按体重计)经口灌胃给予相应剂量的配方受试物13周。实验结束时测大鼠股骨密度、股骨干重和骨钙含量,并对股骨进行病理学检查,测骨皮质厚度。体外培养乳鼠颅骨成骨细胞,探究千斤拔提取物对其增殖分化的影响:超声波辅助提取千斤拔,以AB-8型大孔树脂进行纯化,分别得到不同梯度甲醇洗脱组分;在最佳洗脱梯度条件下,以浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g·L^(-1)千斤拔提取液培养24、48、72 h,另设0.4 g·L^(-1)淫羊藿苷阳性对照组和0.1%DMSO溶剂对照组。用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)和碱性磷酸酶(ALP)测试盒(酶标仪法)分别测定成骨细胞的增殖率和ALP活性。[结果]急性经口毒性试验表明千斤拔混合配方粉属实际无毒级别。干预13周后,与模型对照组相比,千斤拔混合粉组和面粉混合粉组的骨密度、骨皮质厚度值均升高,差异有统计学意义(P<0.05),且千斤拔混合粉组的骨皮质厚度[(376.01±51.52)μm]较面粉混合粉组[(302.87±64.83)μm]升高(P<0.05)。病理组织结果显示:与模型对照组相比,千斤拔混合粉组骨小梁数目明显增多,分离度变小,骨小梁结构变紧密,且千斤拔混合粉组上述结果也明显优于面粉混合粉组。根据不同甲醇洗脱梯度下的成骨细胞ALP活性和总黄酮含量,选择60%作为千斤拔提取物最佳甲醇洗脱梯度。在此梯度下,CCK-8和ALP活性测定试验结果显示:与溶剂对照相比,对成骨细胞分别作用24 h、48 h、72 h后,不同浓度千斤拔提取物尽管对细胞有抑制增殖作用,但均具有增高ALP活性的作用(P<0.05)。[结论]含千斤拔的保健品配方具有一定的改善骨功能的作用,其机制可能与促进成骨细胞的分化有关。

关键词：千斤拔去势大鼠骨质疏松成骨细胞碱性磷酸酶

聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架植入大鼠膀胱后的组织相容性

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中国组织工程研究 2020年第4期24卷 583-588页

作者：唐萌萌陈和春谢宏晨张瑜谭晓霜孙艺璇黄毅娜四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院四川省成都市610041 中国科学院成都有机化学有限公司四川省成都市610041

背景:随着组织工程学、材料学、生物力学等学科的发展,研制新型可生物降解输尿管支架管成为目前研究的重点。前期研究制备了聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架。目的:探索聚(L-丙交酯-ε-己内酯)输尿管支架植入SD大... 详细信息

背景:随着组织工程学、材料学、生物力学等学科的发展,研制新型可生物降解输尿管支架管成为目前研究的重点。前期研究制备了聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架。目的:探索聚(L-丙交酯-ε-己内酯)输尿管支架植入SD大鼠膀胱内的组织相容性。方法:取雄性SD大鼠(四川省中医药科学院实验动物中心提供)60只,随机分为4组,每组15只:假手术组在膀胱外侧开一小口后直接缝合,未植入任何材料;其余3组在膀胱外侧开一小口后分别植入聚氨酯输尿管支架(对照组)、聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/8%交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架(实验1组)、聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/5%交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架(实验2组),随后缝合切口。术后4,8,16周,大体观察膀胱局部解剖情况,苏木精-伊红染色观察各组埋植材料的组织相容性。实验经四川大学华西公共卫生学院分析测试中心实验动物伦理学委员会批准。结果与结论:(1)大体观察:术后4,8,16周时,对照组、实验1组均出现不同程度的慢性炎症刺激反应,实验2组仅术后4周时出现慢性炎症刺激反应,对照组、实验1组术后4,16周的材料结石生成率高于假手术组(P0.05);实验2组仅术后4周的材料结石生成率高于假手术组,其余时间点比较差异无显著性意义(P>0.05);(2)病理观察:术后各时间点,对照组、实验1组、实验2组均出现不同程度外膜异物、炎症反应及黏膜弥漫增生,3组间术后不同时间点的黏膜弥漫增生率比较差异无显著性意义(P>0.05),但均高于假手术组(P<0.05);(3)结果表明:聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架的结石生成情况和膀胱组织学反应与商品聚氨酯输尿管支架管相当,尤以加入5%交联聚乙烯吡咯烷酮配比的组织相容性较优。

关键词：生物材料组织相容性 L-丙交酯 ε-己内酯交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架管膀胱病理

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小茴香增加大鼠骨密度作用及机制的研究

食品科技 2021年第1期46卷 39-45页

作者：谢宏晨郭橹橹刘力进唐萌萌高鸿黄毅娜四川大学华西公共卫生学院四川大学华西第四医院四川成都610041 四川大学轻纺与食品学院四川成都610041

目的:探究小茴香对去势雌性大鼠骨密度功能的影响,通过大鼠颅骨成骨细胞(ROB)初探其机制。方法:采用SD大鼠进行含小茴香的保健食品配方的急性经口毒性试验,以去势雌性SD大鼠建立骨质疏松动物模型进行增加骨密度的功能性验证。用新生SD... 详细信息

目的:探究小茴香对去势雌性大鼠骨密度功能的影响,通过大鼠颅骨成骨细胞(ROB)初探其机制。方法:采用SD大鼠进行含小茴香的保健食品配方的急性经口毒性试验,以去势雌性SD大鼠建立骨质疏松动物模型进行增加骨密度的功能性验证。用新生SD乳鼠颅骨为细胞来源培养ROB,CCK–8法观察小茴香40%甲醇提取物对ROB增殖的影响,并观察小茴香40%甲醇提取物对ROB中碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:体内试验中,小茴香配方食品对SD大鼠急性经口LD50大于10 g/kg·bw,为实际无毒级别;与模型对照组比较,小茴香配方食品可显著增加去势模型大鼠骨密度、骨皮质厚度(P<0.05),改善骨小梁结构。在体外试验中,与阴性对照比较,小茴香甲醇40%提取物对ROB的增殖作用显著,最高增殖率为84.96%(P<0.05),同时显著增加ROB的ALP活性(P<0.05)。结论:小茴香配方食品急性经口毒性为实际无毒级别,小茴香40%甲醇提取物具有增加骨密度功能的作用,对ROB具有细胞增殖分化作用。

关键词：小茴香骨密度去势大鼠成骨细胞增殖分化

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贵州铁皮石斛叶多糖鉴定及降脂功能研究

食品科技 2023年第1期48卷 167-174页

作者：杨东梅谢宏晨李安宁白津榕肖月黄毅娜四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院) 四川成都610041 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系重庆400038

目的:对贵州铁皮石斛叶中的多糖进行提取鉴定,并初步探究铁皮石斛叶多糖的降脂功能,为贵州铁皮石斛叶的开发利用提供实验依据。方法:以干燥粉碎后的铁皮石斛叶粉为原料,采用水提醇沉法提取多糖。利用高效液相色谱法鉴定铁皮石斛叶多糖... 详细信息

目的:对贵州铁皮石斛叶中的多糖进行提取鉴定,并初步探究铁皮石斛叶多糖的降脂功能,为贵州铁皮石斛叶的开发利用提供实验依据。方法:以干燥粉碎后的铁皮石斛叶粉为原料,采用水提醇沉法提取多糖。利用高效液相色谱法鉴定铁皮石斛叶多糖的分子质量及单糖组成,并通过体内外实验初步探究其降血脂功能。结果:高效液相色谱分析表明:铁皮石斛叶多糖有2个主要组分,分子质量分别为54012 ku和210 ku,且其多糖由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成,摩尔比为0.26:0.16:0.01:0.06:0.51;体内斑马幼鱼降脂实验结果表明:与模型对照组相比,1.0、1.5、2.0 mg/mL剂量的铁皮石斛叶多糖能显著降低斑马幼鱼体内血脂含量(P<0.05);体外胆固醇酯酶和胰脂酶抑制实验表明:铁皮石斛叶多糖能显著降低胆固醇酯酶和胰脂酶活性,且抑制率呈浓度依赖关系(P<0.05)。结论:铁皮石斛叶中多糖含量丰富,有较好的降低血脂的效果。

关键词：铁皮石斛叶植物多糖斑马鱼降脂功能

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丁酸钠对低氧寒冷暴露大鼠的保护效应研究

陆军军医大学学报 2024年第8期46卷 901-911页

作者：郭晓玉谭小玲崔琪谢宏晨黄榆杰孟祥琼蒋雯俊丁宇荆海霞青海大学农牧学院动物医学系西宁810016 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系寒区医学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系极端环境医学教育部重点实验室重庆400038

目的探究丁酸钠对低氧寒冷暴露下大鼠的保护作用及其机制。方法7~8周、体质量240~260 g雄性SD大鼠随机分为:常氧常温生理盐水对照(normoxia normothermia saline control,NNC,n=10)组、常氧常温丁酸钠(normoxia normothermia sodium but... 详细信息

目的探究丁酸钠对低氧寒冷暴露下大鼠的保护作用及其机制。方法7~8周、体质量240~260 g雄性SD大鼠随机分为:常氧常温生理盐水对照(normoxia normothermia saline control,NNC,n=10)组、常氧常温丁酸钠(normoxia normothermia sodium butyrate,NNB,n=10)组、低氧寒冷生理盐水对照(hypoxia cold saline control,HCC,n=19)组和低氧寒冷丁酸钠(hypoxia cold sodium butyrate,HCB,n=19)组。NNB、HCB组的灌胃剂量为200 mg/kg,NNC、HCC组的灌胃剂量为5 mL/kg。①连续灌胃7 d后,HCC、HCB组大鼠置于低压低氧舱内模拟海拔5000 m、温度8℃暴露7 d,取腹主动脉血进行血气、血常规和血清生化指标检测,ELISA测定血清炎症因子和内分泌激素。NNC、NNB组大鼠在舱外同时喂养,7 d后进行指标检测,评价丁酸对机体的保护效应(n=10)。②监测HCC、HCB组大鼠核心体温,评价丁酸对低氧寒冷暴露大鼠的体热平衡(n=3)。③检测低氧寒冷暴露前后HCC、HCB大鼠的低氧(平原低氧箱,11%O_(2))运动耐力,评价耐缺氧能力(n=6)。结果与NNC组比较,HCC组大鼠动脉血氧饱和度(arterial oxygen saturation,SaO_(2))、动脉血氧分压(arterial oxygen partial pressure,PaO_(2))、IL-4、内分泌激素雌二醇(estradiol,E_(2))、皮质醇(cortisol,F)、核心体温以及低氧暴露下的运动时长显著降低(P<0.05);而红细胞数目(red blood cell,RBC)、血红蛋白浓度(haemoglobin,HGB)、红细胞压积(hematocrit,HCT)、血清心肌钙蛋白(cardiac troponin,CRDAC-T)、尿酸(uric acid,UA)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆固醇(total cholesterol,TCH)和低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、IL-6以及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与HCC组比较,HCB组大鼠动脉SaO_(2)、PaO_(2)、IL-4、E_(2)、F、促肾上皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)显著升高(P<0.05),低氧暴露下的运动时长显著增加(P<0.05);而RBC、HGB、HCT、CRDAC-T、UA、ALT、TCH、LDL、IL-6、GM-CSF、游离甲状腺素(free thyroxine,FT 4)以及核心体温显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论丁酸钠对低氧寒冷暴露条件下的大鼠具有保护作用,有利于低氧寒冷的共习服。

关键词：丁酸钠习服低氧寒冷耐缺氧

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复合枣粉改善大鼠缺铁性贫血的效果评价

食品科技 2019年第4期44卷 94-98页

作者：柏丁丁廖筱萌刘力进唐萌萌谢宏晨李安黄毅娜四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院) 成都610041

目的:探究复合枣粉对大鼠缺铁性贫血的改善效果。方法:用低铁饲料喂饲动物形成实验性缺铁性贫血模型,按血红蛋白(Hb)及体质量将缺铁动物随机分为低铁对照组、复合枣粉低、中、高剂量组(83、167、333 mg/kg BW)和阳性对照组(硫酸亚铁2 mg... 详细信息

目的:探究复合枣粉对大鼠缺铁性贫血的改善效果。方法:用低铁饲料喂饲动物形成实验性缺铁性贫血模型,按血红蛋白(Hb)及体质量将缺铁动物随机分为低铁对照组、复合枣粉低、中、高剂量组(83、167、333 mg/kg BW)和阳性对照组(硫酸亚铁2 mg/kg BW),连续灌胃30d。在实验开始和31d测定大鼠的体质量(BW)、Hb、红细胞压积(HCT)和红细胞内游离原卟啉(FEP)。结果:各剂量组及阳性对照组与低铁对照组大鼠相比,初期的BW、Hb、HCT、FEP均无显著差异;实验末期,Hb含量及增量、HCT及HCT增量显著增高(P<0.01),FEP含量显著降低,FEP减量显著升高(P<0.01)。结论:复合枣粉能显著改善大鼠缺铁性贫血。

关键词：复合枣粉缺铁性贫血大鼠

富硒无花果提取物片急性毒性及体外肿瘤细胞生长抑制试验研究

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食品安全质量检测学报 2019年第21期10卷 7234-7239页

作者：刘力进唐萌萌谢宏晨郭橹橹黄毅娜四川大学华西公共卫生学院四川大学华西第四医院

目的探究自制富硒无花果提取物片的急性毒性及其体外肿瘤增殖抑制和诱导凋亡作用.方法以富硒无花果为原料自制富硒无花果提取物片.采用SD大鼠进行急性经口毒性试验.体外用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法观察富硒无花果... 详细信息

目的探究自制富硒无花果提取物片的急性毒性及其体外肿瘤增殖抑制和诱导凋亡作用.方法以富硒无花果为原料自制富硒无花果提取物片.采用SD大鼠进行急性经口毒性试验.体外用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法观察富硒无花果提取物片对4种人源性肿瘤细胞[肺腺癌A549、肝癌(hepatitis,Hep)G2、结肠癌HCT116、乳腺癌MDA-MB-231]增殖的影响,并采用流式细胞术分析其对细胞周期的影响.结果富硒无花果提取物片对SD大鼠急性经口LD50大于10 g/kg·bw,为实际无毒级别.富硒无花果提取物片对HepG2、HCT116、MDA-MB-231增殖抑制作用不明显,对A549的最高抑制率为14.15%(P0.05),降低HCT116S期细胞比例,降低HepG2G0/G1的细胞数目降低,增加S期的细胞数目(P<0.05).结论富硒无花果提取物片急性经口毒性为实际无毒级别,对肺腺癌A549具有增殖抑制作用,能将肝癌HepG2细胞的生长周期阻滞在S期.

关键词：富硒无花果癌细胞活性抑制细胞周期急性毒性

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明刊《几何原本》第六卷第五界注释来源探讨

自然辩证法通讯 2025年第04期 66-74页

作者：王宏晨萨日娜纪志刚上海交通大学科学史与科学文化研究院

韩应陛跋本《几何原本》是否为万历丁未初刻，前人尚存疑意。崇祯初年《天学初函》本的第六卷第五界注释较韩跋本有千余字异文，为解决此问题提供了文本线索。本文将这两个明刊本第六卷第五界的注释与克拉维乌斯拉丁语1574年首版及其后... 详细信息

韩应陛跋本《几何原本》是否为万历丁未初刻，前人尚存疑意。崇祯初年《天学初函》本的第六卷第五界注释较韩跋本有千余字异文，为解决此问题提供了文本线索。本文将这两个明刊本第六卷第五界的注释与克拉维乌斯拉丁语1574年首版及其后续增补本分别进行比对，证明韩跋本此篇注释在结构与细节方面均与克氏首版相吻合，而初函本注释特有的中率相结之理、带分数通分法与“借象之术”则来自克氏后续增补本，从而为韩跋本是万历丁未初刻本提供了有力证据。

关键词：韩跋本初函本克拉维乌斯版《原本》