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安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马CA1区细胞结构及神经元损伤的保护作用

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中国实验方剂学杂志 2022年第7期28卷 26-32页

作者：谢光璟徐波夏婧王平湖北中医药大学武汉430065

目的:探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元及相关蛋白表达的影响。方法:通过随机数字表法将SD大鼠分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组。空白与模型组给予等容生理盐水,安寐丹组给药9.09 g·kg^(-1)·d^(-1)。褪黑素组给药0.27 g·k... 详细信息

目的:探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元及相关蛋白表达的影响。方法:通过随机数字表法将SD大鼠分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组。空白与模型组给予等容生理盐水,安寐丹组给药9.09 g·kg^(-1)·d^(-1)。褪黑素组给药0.27 g·kg^(-1)·d^(-1)。自制睡眠剥夺箱造模4周。Ethovision XT视频分析系统监测大鼠自发活动状态,苏木素-伊红(HE)染色观察海马CA1区神经元形态,尼氏染色观察海马CA1区神经元及尼氏体变化,超微电镜观察海马细胞超微结构,免疫组化检测海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)、巢蛋白(Nestin)、神经元特异核蛋白(NeuN)的表达。结果:与空白组比较,模型组中心点移动距离延长,平均活动速度增加,中心点累计持续时间增加,身体填充平均值增加,活动频率更高(P<0.01),海马CA1区神经元数量减少,排列紊乱,核皱缩,细胞质深染,尼氏体数量减少,出现明显丢失,线粒体出现肿胀变形,嵴缩短,高尔基体囊泡肿胀,GFAP蛋白积分吸光度(IA)增加,MAP2、Nestin、NeuN蛋白IA下降(P<0.01);与模型组比较,安寐丹组中心点移动距离缩短,平均活动速度降低,中心点累计持续时间缩短,身体填充平均值降低,活动频率降低(P<0.05,P<0.01),海马CA1神经元损伤减轻,细胞数量增加,核仁清晰,胞浆明显,尼氏体数量增加,线粒体等细胞器损伤减轻,GFAP蛋白IA降低,MAP2、Nestin、NeuN蛋白IA升高(P<0.05,P<0.01)。结论:安寐丹改善睡眠剥夺大鼠海马CA1神经元结构损伤,并可能通过降低GFAP蛋白表达,增加MAP2、Nestin、NeuN蛋白表达而实现。

关键词：安寐丹睡眠剥夺胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 微管相关蛋白2(MAP2) 巢蛋白(Nestin) 神经元特异核蛋白(NeuN)

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王平治疗更年期眩晕经验

中华中医药杂志 2017年第9期32卷 4044-4046页

作者：谢光璟王平湖北中医药大学老年医学研究所武汉430065

文章介绍了王平教授治疗更年期眩晕的经验,总结了更年期眩晕的病因、病机,王教授认为更年期眩晕以虚证、虚实夹杂为主,气虚、阴虚为代表,常挟痰挟瘀,治疗上重视扶正固本兼以祛邪,同时详细介绍了益气温阳、滋阴养血、培元固本、健脾燥湿... 详细信息

文章介绍了王平教授治疗更年期眩晕的经验,总结了更年期眩晕的病因、病机,王教授认为更年期眩晕以虚证、虚实夹杂为主,气虚、阴虚为代表,常挟痰挟瘀,治疗上重视扶正固本兼以祛邪,同时详细介绍了益气温阳、滋阴养血、培元固本、健脾燥湿、活血逐瘀、平肝潜阳、化痰熄风等治疗原则、辨证思路、处方用药,并结合相应的病例加以阐析。

关键词：更年期眩晕名医经验

天王补心丹加减改善PCPA失眠大鼠Trx系统氧化损伤的机制探讨

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中国实验方剂学杂志 2019年第6期25卷 32-38页

作者：谢光璟黄攀攀王平湖北中医药大学基础医学院武汉430065

目的:探讨天王补心丹加减对对氯苯丙氨酸(PCPA)所致失眠大鼠硫氧还蛋白(Trx)系统抗氧化损伤的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组。造模组以腹腔注射PCPA造模,注射剂量为150 mg·kg^(-1),间断注射7 d。造模成功后,依... 详细信息

目的:探讨天王补心丹加减对对氯苯丙氨酸(PCPA)所致失眠大鼠硫氧还蛋白(Trx)系统抗氧化损伤的作用机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组。造模组以腹腔注射PCPA造模,注射剂量为150 mg·kg^(-1),间断注射7 d。造模成功后,依次分为模型组(等容生理盐水),天王补心丹加减低、中、高剂量组(8. 8,17. 6,35. 2 g·kg^(-1)·d^(-1))和艾司唑仑组(0. 1 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。自发活动视频分析系统监测大鼠昼夜活动节律,透射电镜观察大鼠下丘脑视交叉上核(SCN)形态及细胞器完整性,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平,免疫荧光(IF)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测SCN细胞硫氧环蛋白2(Trx2),硫氧环蛋白还原酶2(TrxR2)的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠活动时间显著增加(P <0. 01),昼夜节律紊乱,线粒体嵴断裂,数量减少,排列紊乱,伴空泡化和髓鞘样变,SOD,GSH-Px活性下降且MDA含量显著升高(P <0. 01),Trx2的蛋白表达量显著降低(P <0. 01),TrxR2蛋白表达量显著增加(P <0. 01);与模型组比较,天王补心丹中、高剂量组能够明显改善大鼠昼夜节律紊乱,减少活动时间(P <0. 01),同时线粒体水肿程度减轻,部分嵴尚完整,SOD,GSH-Px活性升高,MDA水平明显降低(P <0. 05,P <0. 01),Trx2蛋白表达明显升高,TrxR2蛋白表达明显下降(P <0. 05)。结论:天王补心丹加减对失眠模型大鼠的改善作用与调控Trx抗氧化系统中Trx2与TrxR2的蛋白表达有关。

关键词：失眠天王补心丹视交叉上核(SCN) 氧化应激硫氧还蛋白系统

安寐丹通过线粒体介导的海马神经细胞凋亡改善睡眠剥夺模型大鼠的学习记忆水平

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中国实验方剂学杂志 2020年第24期26卷 38-44页

作者：谢光璟徐波黄攀攀王平湖北中医药大学基础医学院武汉430065

目的:探讨安寐丹通过线粒体介导海马神经细胞凋亡对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响。方法:48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、安寐丹低、中、高剂量(4.86,9.72,19.44 g·kg^-1·d^-1)组和艾司唑仑组(0.1 mg·kg^-1·d^-1),每组8只。通过... 详细信息

目的:探讨安寐丹通过线粒体介导海马神经细胞凋亡对睡眠剥夺大鼠学习记忆的影响。方法:48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、安寐丹低、中、高剂量(4.86,9.72,19.44 g·kg^-1·d^-1)组和艾司唑仑组(0.1 mg·kg^-1·d^-1),每组8只。通过自制睡眠剥夺箱进行持续性睡眠剥夺14 d。以Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的含量。透射电镜观察海马区神经元线粒体形态结构,免疫荧光和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测海马区细胞色素C(Cyt-C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白及Bcl-2,Bax mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组上平台潜伏期、游泳总路程延长,初次到达平台时间延长,跨越平台次数减少,目标象限时间显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平下降,Bax蛋白及mRNA水平显著升高(P<0.01),线粒体结构破坏,嵴断裂,肿胀变形;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,安寐丹低、中、高剂量组明显改善SD大鼠空间探索和定位航行水平(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA水平升高,Bax蛋白及mRNA水平明显降低(P<0.05,P<0.01);线粒体损伤改善,水肿减轻;Cyt-C,Caspase-3蛋白及mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论:安寐丹能够改善睡眠剥夺大鼠学习记忆水平,其作用与线粒体介导的海马神经细胞凋亡,降低Cyt-C,Caspase-3等蛋白表达相关。

关键词：安寐丹睡眠剥夺细胞凋亡学习记忆细胞色素C(Cyt-C) 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)

安寐丹对睡眠剥夺大鼠自发活动昼夜节律的调节及对生物钟蛋白的影响

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中国实验方剂学杂志 2022年第7期28卷 33-39页

作者：谢光璟徐波黄攀攀王平湖北中医药大学老年医学研究所武汉430065

目的:探讨安寐丹(AMD)对睡眠剥夺大鼠生物节律及相关蛋白表达的影响。方法:80只大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组。自制睡眠剥夺箱进行睡眠剥夺4周,正常与模型组给予等容生理盐水,安寐丹组给药9.09 g·kg^(-1)·d^(-1)... 详细信息

目的:探讨安寐丹(AMD)对睡眠剥夺大鼠生物节律及相关蛋白表达的影响。方法:80只大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组。自制睡眠剥夺箱进行睡眠剥夺4周,正常与模型组给予等容生理盐水,安寐丹组给药9.09 g·kg^(-1)·d^(-1)。褪黑素组给药0.27 g·kg^(-1)·d^(-1)。自发活动视频分析系统评价自发活动昼夜节律,苏木素-伊红(HE)染色观察下丘脑组织形态,尼氏染色观察下丘脑组织神经元及尼氏小体,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测下丘脑cAMP反应元件结合蛋白(CREB)/近日钟基因(Per)通路蛋白表达,免疫组化检测生物钟蛋白核心时钟基因1(Bmal1)、时钟基因(Clock)、Per1、隐花色素1基因(Cry1)的表达。结果:模型组昼夜节律相对紊乱,在6个节点活动时间较空白组显著增加,活动速度及活动次数增加(P<0.01);同时神经元数量减少,排列稀疏,胞核皱缩或碎裂;尼氏体数量减少,出现明显丢失,尼氏体着色变淡;p-CREB、Per1蛋白相对表达降低,Bmal1、Clock、Per1、Cry1蛋白阳性率下降(P<0.01)。与模型组比较,安寐丹组大鼠活动时间、活动速度及活动次数均下降(P<0.01);神经元损伤减轻,数量增加,部分核仁清晰,胞浆明显,尼氏体数量增加;p-CREB、Per1蛋白相对表达升高,Bmal1、Clock、Per1、Cry1蛋白阳性率上升(P<0.01)。结论:安寐丹改善睡眠剥夺大鼠自发活动昼夜节律,其作用可能通过调节CREB/Per信号通路,增加生物钟蛋白Bmal1、Clock、Per1、Cry1表达有关。

关键词：安寐丹睡眠剥夺昼夜节律生物钟蛋白视交叉上核(SCN)

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天王补心丹加减干预睡眠剥夺大鼠能量代谢机制的生物信息学分析

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中国实验方剂学杂志 2020年第22期26卷 172-180页

作者：黄晓宇谢光璟黄攀攀湖北中医药大学基础医学院武汉430065

目的:使用基因芯片测序技术测定睡眠剥夺大鼠模型被天王补心丹干预前后,能量代谢相关差异基因功能表达谱的变化,为睡眠剥夺的防治提供可能思路及理论依据。方法:采用多平台水环境法对大鼠进行睡眠剥夺造模后随机分为天王补心丹组和模型... 详细信息

目的:使用基因芯片测序技术测定睡眠剥夺大鼠模型被天王补心丹干预前后,能量代谢相关差异基因功能表达谱的变化,为睡眠剥夺的防治提供可能思路及理论依据。方法:采用多平台水环境法对大鼠进行睡眠剥夺造模后随机分为天王补心丹组和模型组,天王补心丹组按照20 g·kg-1的剂量灌服天王补心丹水煎剂,模型组给予等体积纯水,连续灌胃14 d。取肝、心、下丘脑为样本,高通量测序获取差异基因,采用基因本体(GO)数据库与京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)通路富集分析,并构建与lncRNA的共表达网络,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测其中3个差异性显著的能量代谢关键基因神经肽Y(NPY),双特异性磷酸酶1/丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1(DUSP1/MKP-1),α-L-艾杜糖醛酸酶(IDUA)的mRNA表达水平。结果:得到321个差异基因,其中表达上调231个,下调90个,主要促进脂代谢、糖代谢与蛋白代谢进程;参与纤维蛋白原、维生素B6与星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)的合成表达;涉及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),p53基因(p53),环磷酸腺苷(cAMP)等信号通路。与模型组比较,天王补心丹组IDUA表达水平明显增加(P<0.05),NPY和DUSP1表达水平显著降低(P<0.01)。结论:天王补心丹从多方面干预睡眠剥夺大鼠的能量代谢机制,通过下调NPY,DUSP1的mRNA表达水平,可能激活参与p38 MAPK信号通路,影响脂质代谢。

关键词：天王补心丹睡眠剥夺能量代谢生物信息学差异基因

基于Cyt C调节细胞凋亡途径探讨安寐丹改善老年睡眠剥夺模型致认知损伤的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第19期30卷 1-9页

作者：张军路孙康吴艺璇王平谢光璟湖北中医药大学基础医学院武汉430065 湖北中医药大学老年脑健康中医药防护技术与新产品研发教育部工程研究中心武汉430065 湖北时珍实验室武汉430065

目的:探讨安寐丹(AMD)对老年睡眠剥夺模型的认知功能及细胞色素C(Cyt C)信号通路蛋白表达和细胞凋亡影响。方法:60只老年C57小鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹高、中、低剂量组(26.26、13.13、6.565 g·kg^(-1)·d^(-1))和褪黑素组(1.... 详细信息

目的:探讨安寐丹(AMD)对老年睡眠剥夺模型的认知功能及细胞色素C(Cyt C)信号通路蛋白表达和细胞凋亡影响。方法:60只老年C57小鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹高、中、低剂量组(26.26、13.13、6.565 g·kg^(-1)·d^(-1))和褪黑素组(1.3 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。通过自制睡眠剥夺箱进行连续性睡眠剥夺4周。以Morris水迷宫检测小鼠的认知功能水平,苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察海马CA1区的锥体细胞形态学改变。透射电镜观察海马神经元线粒体形态结构;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马中Cyt C、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、脑源性神经营养因子(BDNF)、线粒体转录因子A(TFAM)、电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)蛋白表达。免疫组化检测Cyt C、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达水平。免疫荧光检测海马B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组上平台潜伏期延长(P<0.01),穿越平台次数,目标象限活动时间和路程显著减少(P<0.01),线粒体结构损坏,嵴消失或断裂,肿胀变形;Cyt C、Caspase-3、Caspase-9、Bax、VDAC1蛋白表达显著增加(P<0.01),BDNF、TFAM、Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.01)。与模型组比较,安寐丹高、中、低剂量组改善老年睡眠剥夺模型小鼠空间探索和定位航行水平(P<0.05,P<0.01);缓解线粒体损伤,增加尼氏小体数量;Cyt C、Caspase-3、Caspase-9、Bax、VDAC1蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.01),BDNF、TFAM、Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论:安寐丹能够改善老年睡眠剥夺模型小鼠认知功能,其作用可能与降低Cyt C信号通路介导的细胞凋亡途径有关。

关键词：安寐丹老年睡眠剥夺细胞凋亡线粒体细胞色素C(CytC)信号通路

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酸枣仁炮制前后镇静催眠作用比较研究

中国药理学通报 2024年第5期40卷 984-991页

作者：蔡铭陈林霖徐波谢光璟夏婧湖北中医药老年脑健康中医药防护技术与新产品研发教育部工程研究中心湖北武汉430065 湖北中医药大学教育部中药资源与复方重点实验室湖北武汉430065

目的基于网络药理学和动物实验探讨中药酸枣仁(Semen Ziziphi Spinosae,SZS)炮制前后镇静催眠作用差异。方法通过相关平台和数据库收集SZS的化学成分,检索失眠和睡眠障碍的靶点进行检索,构建蛋白质相互作用关系,绘制出中药-成分-靶点-... 详细信息

目的基于网络药理学和动物实验探讨中药酸枣仁(Semen Ziziphi Spinosae,SZS)炮制前后镇静催眠作用差异。方法通过相关平台和数据库收集SZS的化学成分,检索失眠和睡眠障碍的靶点进行检索,构建蛋白质相互作用关系,绘制出中药-成分-靶点-通路网络,并进行富集分析。结合预测结果,通过戊巴比妥诱导睡眠试验、行为学分析、脑组织相关基因mRNA水平和血浆神经递质评价SZS不同制品对昆明小鼠的影响。结果SZS与失眠相关的靶点基因共有22个,包括乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,ACHE)、α-1B肾上腺素能受体(alpha-1B adrenergic receptor,ADRA1B)、钠依赖性5-羟色胺转运蛋白[solute carrier family 6(neurotransmitter transporter,serotonin),member 4,SLC6A4]等,它们可能通过9个相关途径和69个生物学过程发挥作用,其中包括钙信号通路、唾液分泌等。体内实验发现,SZS生用、炒用及生炒合用均能减少小鼠活动性,增强戊巴比妥钠催眠效果,降低皮质及海马中ACHE、ADRA1B和SLC6A4 mRNA水平,调节血浆中乙酰胆碱、肾上腺素等含量,且效果与药物剂量呈正比。结论SZS具有镇静催眠作用,以高剂量的生炒SZS合煎液效果更佳,这种作用可能是由影响神经递质及其相关受体水平,介导中枢神经系统导致的。

关键词：酸枣仁炮制网络药理学失眠镇静催眠

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安神类中药调控能量代谢治疗睡眠障碍性疾病的研究进展

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中国实验方剂学杂志 2022年第7期28卷 40-48页

作者：夏婧徐波谢光璟黄攀攀王平湖北中医药大学老年医学研究所武汉430065

睡眠在能量平衡中起着很重要的作用,研究表明睡眠障碍是代谢性疾病发生的重要危险因素,控制能量代谢和睡眠之间的关系可以影响睡眠稳态及机体代谢率。中药在失眠防治中疗效显著,具有绿色、安全、副作用小的特征,受到国内外学者的广泛关... 详细信息

睡眠在能量平衡中起着很重要的作用,研究表明睡眠障碍是代谢性疾病发生的重要危险因素,控制能量代谢和睡眠之间的关系可以影响睡眠稳态及机体代谢率。中药在失眠防治中疗效显著,具有绿色、安全、副作用小的特征,受到国内外学者的广泛关注。近年来对于中药如何干预睡眠的机制研究取得了显著进展,该文综述了安神类中药化合物紫檀芪,单味中药酸枣仁,以及中药复方交泰丸、酸枣仁汤、天王补心丹、安寐丹、半夏厚朴汤、杞藿饮、松郁安神方、疏泄一号方等,调控能量代谢治疗睡眠障碍性疾病的研究进展,结果发现中药可以通过影响物质代谢、线粒体功能、氧化应激与炎症反应、食欲系统和生物钟系统等代谢相关途径干预睡眠剥夺模型,其中使用排名靠前的药物依次为酸枣仁、茯苓、五味子、丹参等,归心、肝经以调节血液运行,保障能量供应,发挥养心安神作用。笔者通过从能量代谢角度归纳中药治疗失眠等睡眠障碍性疾病的作用效果和机制,以期为今后疾病的进一步研究和探索提供参考。

关键词：睡眠能量代谢分子机制中药安神

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